大花蕙兰原球茎的诱导、增殖及植株再生研究

季华 吴伟剑 吴华 等

摘要：从大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）试管苗取材，诱导原球茎，建立植株再生体系，分析了不同激素及其浓度对原球茎诱导、增殖和植株生根的影响。结果表明，不定芽比叶片更容易诱导出原球茎；生长素ＮＡＡ对原球茎的诱导效果好于２，４－Ｄ，最适合原球茎诱导的激素组合为１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ；原球茎增殖培养基中添加１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ增殖效果较好，增殖系数可达７．９0；最适生根培养基为１／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖。

关键词：大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）；原球茎；组织培养；植株再生

中图分类号：Ｓ６８２．３１；Ｓ６０３．６文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）15－3369-03

Ｓｔｕｄy ｏｎ Ｐrotocorm Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｌａｎｔｌｅｔ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ

Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ

ＪＩ Ｈｕａ１，ＷＵ Ｗｅｉ－ｊｉａｎ２，ＷＵ Ｈｕａ１，ＣＨＥＮ Ｌｏｎｇ－ｑｉｎｇ１

（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｏｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｗｕｈｕ Ｆａｒｍ， Ｈｕａｎｇｐｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｗｕｈａｎ ４３０３４５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｅｘｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｒａｗｉｎｇ ｆｒｏｍ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｆｏｒ ｐrotocorm ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｉｎｄ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｐrotocormｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｐrotocorm ｆｒｏｍ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｅａｓｉｌｙ ｔｈａｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｆ ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ． ＮＡＡ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｆｏｒ ｐrotocorm ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈａｎ ２，４－Ｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐrotocorm ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ １．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ． Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｐrotocorm ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ （７．９0） ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｉｎｇ １．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗａｓ １／２ ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ３０ ｇ／Ｌ ｓｕｃｒｏｓｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ； ｐrotocorm； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ

大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）是兰科兰属中大花型附生种类的杂交种，具有花大色艳、花多且花期长的特点，深受大众喜爱［１］。大花蕙兰的繁殖方式主要以分株为主，由于长期无性繁殖，造成带病毒植株日益增多，使兰花的品质下降；同时新品种的培育也对繁殖方式和快繁技术提出了需求。目前，兰属植物的组织快繁主要是以原球茎（Ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｙ，ＰＬＢ）为外植体诱导出愈伤组织或胚性愈伤组织，进而获得小植株［２－８］。国内对大花蕙兰组织培养［９－１６］多数是采用茎尖、侧芽为外植体，通过诱导原球茎获得小植株。本实验以大花蕙兰试管苗的不定芽和叶片为外植体，诱导和增殖原球茎，建立大花蕙兰的快速繁殖体系，以达到加大试管苗繁殖系数、简化繁殖步骤的目的。

１材料与方法

１．１材料

供试材料为华中农业大学园艺林学学院种质资源实验室的大花蕙兰试管苗。

１．２方法

１．２．１原球茎的诱导从长势良好的大花蕙兰试管苗上取大小一致、高２～３ ｍｍ的不定芽及叶片作为外植体，将叶片切割成０．５～１．０ ｃｍ２的小块。外植体接种在ＭＳ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖＋６ ｇ／Ｌ琼脂培养基上。培养基中添加不同浓度的ＢＡ、ＮＡＡ或２，４－Ｄ，激素浓度组合见表１。每处理接种６个外植体，重复３次。在培养室中培养，培养温度（２５±２） ℃，光照１４ ｈ／ｄ，光照度２ ０００ ｌｘ，３０ ｄ后统计各处理原球茎的诱导率。

１．２．２原球茎的增殖以ＭＳ为基本培养基，附加３０ ｇ／Ｌ蔗糖和６ ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ ５．５～５．８，添加不同浓度的ＢＡ和ＮＡＡ（表２）。每处理接种１５个不定芽，重复３次，培养条件同１．２．１，培养４０ ｄ后统计外植体增殖系数。

１．２．３生根培养生根培养以１／２ＭＳ为基本培养基，附加６ ｇ／Ｌ琼脂和质量分数０．５％的活性炭，添加不同浓度的ＮＡＡ与蔗糖（表３），ｐＨ ５．５～５．８。每处理接种１５个不定芽，重复３次，培养条件同１．２．１。６０ ｄ后统计外植体的苗高、根长大于１ ｃｍ的根数目、根长和生根率。

１．２．４炼苗移栽将生根培养得到的大花蕙兰试管苗炼苗移栽，以水苔为栽培基质，移栽前用无菌水将植株根部的培养基冲洗干净，再植入穴盘，移入遮阴棚中培养。每天向叶片喷水数次，每周浇施１～２次稀释的营养液。

２结果与分析

２．１原球茎的诱导

将大花蕙兰叶片和不定芽接种到含不同激素配比的培养基，３０ ｄ后原球茎的诱导结果见表１。诱导３０ ｄ后，处理Ａ１～Ａ４的叶片有肿胀膨大的现象，但没有诱导出原球茎；而处理Ａ５～Ａ８的腋芽周围有绿色半透明颗粒状组织产生并逐渐长大，即诱导产生的原球茎（图１），说明不定芽较叶片易发生再分化产生原球茎。其中Ａ６处理的原球茎诱导效果最好，诱导率达７６．９％。培养基中ＢＡ浓度相同时，１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的诱导效果要好于０．５ ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ；随着ＢＡ浓度的增高，两种生长素的诱导率都有所增加。可见实验范围内原球茎诱导的最佳激素浓度组合为１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ。

２．２原球茎的增殖培养

增殖培养４０ ｄ后，不定芽周边长出新的原球茎（图２），一般产生５～８个，最多达到１５个（表２）。激素ＢＡ和ＮＡＡ的浓度不同，增殖系数也会发生变化。Ｂ５处理，即ＢＡ和ＮＡＡ的浓度分别为１．０ ｍｇ／Ｌ和０．５ ｍｇ／Ｌ时增殖系数最高，为７．９０。ＢＡ和ＮＡＡ浓度过高或过低均不利于原球茎的增殖。

２．３生根培养

将增殖培养获得的大花蕙兰原球茎转移到含不同浓度ＮＡＡ和蔗糖的生根培养基上，２０ ｄ后各处理陆续有根形成，并有新的叶片展开。培养６０ ｄ后各处理生根及苗生长情况见表３和图３。

由表３可知，大花蕙兰原球茎的生根情况较好，除Ｃ１处理外，其他处理的生根率均达到１００.0％。在相同的蔗糖浓度条件下，ＮＡＡ浓度对各处理之间苗高、叶片数和根长的影响不显著。而ＮＡＡ为０．５ ｍｇ／Ｌ时，较高的蔗糖浓度对植株苗高有显著的促进作用。各处理中，Ｃ４（０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖）处理的幼苗生长情况最好，试管苗苗高、叶片数、根长均大于其他处理，其中苗高和根长显著大于其他处理。

２．４炼苗移栽

移栽培养７ ｄ后，幼苗未出现死亡现象，但部分移栽苗叶尖变黄，且大多发生于较小的植株，较大的植株则生长良好。说明试管苗个体越大、越健壮，移栽后的生长状况越好，移栽越易成活。一般适于移栽的植株要求苗高５ ｃｍ以上、具有展开叶３～５片，以及２条以上长度大于１ ｃｍ的根。

３讨论

在以叶片为外植体诱导原球茎时，叶片虽有膨大的现象，但生长３０ ｄ左右后叶片逐渐死亡，没有原球茎产生，与Teixeira da silva等［１７］的报道一致，叶片诱导原球茎不成功可能与激素的种类有关［１８］。本实验发现２，４－Ｄ的诱导效果没有ＮＡＡ好，与Ｈｕａｎ等［５，６］的报道是一致的，实验浓度范围内１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ对原球茎的诱导效果好，这与徐宏英等［１１］的结果略有差异，可能与试管苗体内的激素浓度变化有关。传统的增殖方式主要是由原球茎直接获得生根的小植株；也有的以初次诱导的原球茎或原球茎薄层细胞为外植体诱导出愈伤组织或胚性愈伤组织，获得增殖的原球茎后再获得小植株［１９，２０］。本实验中以不定芽为外植体，有原球茎的形成，但未见愈伤组织形成。增殖培养４０ ｄ后增殖系数均在４．６7以上，１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的增殖效果最好，增殖系数达７．９0，高于以往的报道［２１］。在生根实验中，较高浓度的ＮＡＡ和蔗糖有利于根的生长和植株伸长，可适当缩短生根时间，对移栽后植株的生长有利。

参考文献：

［１］ 胡松华． 热带兰花［Ｍ］． 北京：中国林业出版社，２００２．

［２］ ＢＥＧＵＭ Ａ， ＴＡＭＡＫＩ Ｍ， ＴＡＨＡＲＡ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｎｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，６３（２）：４１９－４２７．

［３］ ＬＩＮ Ｙ Ｈ， ＣＨＡＮＧ Ｃ， ＣＨＡＮＧ Ｗ Ｃ． Ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃａｌｌｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ａ Ｐａｐｈｉｏｐｅｄｉｌｕｍ ｈｙｂｒｉｄ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ， Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，２０００，６２（１）：２１－２５．

［４］ 李杰，黄敏仁，王明庥，等． 植物外源激素对大花蕙兰体胚发生影响的研究［Ｊ］． 北京林业大学学报，２００５，２７（４）：６５－６８．

［５］ ＨＵＡＮ Ｌ Ｖ Ｔ， ＴＡＫＡＭＵＲＡ Ｔ， ＴＡＮＡＫＡ Ｍ． Ｃａｌｌｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃａｌｌｕｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｉｎ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｏｒｃｈｉｄ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，１６６（６）：１４４３－１４４９．

［６］ ＨＵＡＮ Ｌ V T， ＴＡＮＡＫＡ Ｍ． Ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｙ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，７９（３）：４０６－４１０．

［７］ ＲＯＹ Ｊ， ＢＡＮＥＲＪＥＥ Ｎ． Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｈｏｏｔ－ｔｉｐ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ Ｌｉｎｄｌ． ｖａｒ． ｏｃｕｌａｔｕｍ Ｈｋ． ｆ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，２００３，９７（３）：３３３－３４０．

［８］ ＺＨＡＯ Ｐ， ＷＵ Ｆ， ＦＥＮＧ Ｆ Ｓ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｙ （ＰＬＢ） ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ Ｗａｌｌ ｅｘ Ｌｉｎｄｌ．［Ｊ］． Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ－Ｐｌａｎｔ， ２００８， ４４（３）：１７８－１８５．

［９］ 刘园，王四清．大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）的研究动向［Ｊ］． 园艺学报，２００５，３２（４）：７４８－７５２．

［１０］ 谭文澄，戴策刚．观赏植物组织培养技术［Ｍ］．北京：中国林业出版社，１９９１．２３７－２７８

［１１］ 徐宏英，赵玉明，谢海军，等．大花蕙兰组培快繁影响因素分析［Ｊ］． 园艺学报，２００２，２９（２）：１８３－１８５．

［１２］ ＢＥＧＵＭ Ａ， ＴＡＫＡＭＩ Ｍ， ＫＡＫＯ Ｓ． Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｉｅｓ （ＰＬＢ） ａｎｄ ｓｈｏｏｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｏｕｔｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ＰＬＢ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，６３（３）：６６３－６７３．

［１３］ ＣＨＡＮＧ Ｃ，ＣＨＡＮＧ Ｗ Ｃ． Ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃａｌｌｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｅｎｓｉｆｏｌｉｕｍ ｖａｒ． ｍｉｓｅｒｉｃｏｒｓ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，１９９８，１７（４）：２５１－２５５．

［１４］ ＫＵＳＵＭＯＴＯ Ｍ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｃｏｎｕｔ ｍｉｌｋ， ａｇａｒ ａｎｄ ｓｕｃｒｏｓｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｅｄｉｕｍ ｐＨ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｐｒｏｔｏｃｏｒ

ｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｉｅｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８０，４８（４）：５０３－５０９．

［１５］ ＭＯＲＥＬ Ｇ Ｍ． Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ： Ａ ｎｅｗ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｃｌｏｎａｌ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｃｈｉｄｓ［Ｊ］． Ａｍ Ｏｒｃｈｉｄ Ｓｏｃ Ｂｕｌｌ，１９６４，３３：４７３－４７８．

［１６］ ＤＡ ＳＩＬＶＡ Ｊ Ａ Ｔ， ＹＡＭ Ｔ， ＦＵＫＡＩ Ｓ， ｅｔ ａｌ． Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｏｐｔｉｍｕｍ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉａ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｓｗ．（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ） ｕｓｉｎｇ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｙ ｓｅｇｍｅｎｔｓ［Ｊ］． Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ Ｐｌａｎｔｓ，２００５，５（３）：１２９－１３６．

［１７］ ＴＥＩＸＥＩＲＡ ＤＡ ＳＩＬＶＡ Ｊ Ａ， ＴＡＮＡＫＡ Ｍ． Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｖｉａ ｔｈｉｎ ｃｅｌｌ ｌａｙｅｒｓ ｉｎ ｈｙｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ （Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，２００６，２５（３）：２０３－２１０．

［１８］ ＧＯＷ Ｗ Ｐ， ＣＨＥＮ Ｊ Ｔ， ＣＨＡＮＧ Ｗ Ｃ． Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｄｉｒｅｃｔ ｅｍｂｒｙｏ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｏｒｃｈｉｄｓ［Ｊ］． Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａｅ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００８， ３０（４）：５０７－５１２．

［１９］ ＴＥＩＸＥＩＲＡ ＤＡ ＳＩＬＶＡ Ｊ Ａ， ＣＨＡＮ Ｍ Ｔ， ＣＨＡＩ Ｍ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｉｍｉｎｇ ａｂｉｏｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍａｌ ｈｙｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ （Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ） ＰＬＢ ａｎｄ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｐｌａｎｔｌｅｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］． Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，２００６，１０９（４）：３６８－３７８．

［２０］ ＳＩＬＶＡ Ｊ Ａ Ｔ， ＳＩＮＧＨ Ｎ， ＴＡＮＡＫＡ Ｍ． Ｐｒｉｍｉｎｇ ｂｉｏｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍａｌ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｙ ａｎｄ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｙｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）， ａｎｄ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ， Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ，２００６，８４（２）：１００１１９－１００１２８．

［２１］ 杨玉珍，孙天洲，孙廷，等． 大花蕙兰组织培养和快速繁殖技术研究［Ｊ］．北京林业大学学报，２００２，２４（２）：８６－８８．