丙肝抗体假阳性检测中ELISA法应用

郑煤集团总医院，河南郑州 452371

丙型肝炎（HepatitisC，简称丙肝）是有丙型肝炎病毒（HCV）引起的危害广大人群肝脏健康的一种传染性疾病，目前临床上把检测患者血清丙肝抗体（HCV-Ab）做为诊断丙肝的主要依据，酶联免疫吸附法（ELISA）因其灵敏度高、特异性强，是进行HCV-Ab的主要检测方法之一[1]，但实验室在应用 ELISA法检测丙肝抗体有许多因素可能会导致假阳性的结果[1]。为此本文就回顾性统计分析了郑煤集团总医院 36例用 ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本，再采用聚合酶链反应（PCR）方法将ELISA方法检测的HCV-Ab检测HCV-RNA进行确证试验复检的结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料36例血清标本均来自2011年1月至2012年1月郑煤集团总医院门诊和住院患者。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂HCV-RNA使用美国ABI7500实时荧光定量PCR扩增仪，测定试剂由上海科华生物技术有限公司提供；HCV-Ab使用北京普朗新技术公司酶免仪以及配套洗板机，试剂由上海科华生物技术有限公司提供。

1.2.2 检测方法抽取患者空腹静脉血3～5ml，离心分离血清后 1～2h内先用 ELISA方法检测的HCV-Ab，筛查出采用同种方法检测 3次仍为弱阳性的血清标本，再用聚合酶链反应法将ELISA方法检测的HCV-Ab检测HCV-RNA加以证实。

1.2.3 质控所有试剂均在有效期内，全部仪器、设备运行状况良好，每日质控结果、每批测定阴阳对照均在可信范围，HCV-Ab每次参加河南省临检中心质控合格。

2 结果

36例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本，再采用聚合酶链反应(PCR)方法检测HCV-RNA进行确证试验复检的结果显示28例仍为阳性，8例阴性，表明以PCR检测HCV-RNA方法为准，ELISA法有77.8%的真阳性率，有22.2%的假阳性率。

3 讨论

目前，确定和临床广泛应用的 HCV感染诊断方法有两大类：检测患者血清 HCV-Ab和HCV-RNA，虽然最近也发展了丙肝抗原（HCV-Ag）检测技术，但尚未得到广泛应用。对血清（或血浆）HCV-RNA的检测是目前唯一直接揭示存在的使用方法，但PCR也存在着技术复杂，要求特殊设备、费用高等缺点，难以在基层医院推广应用。血清HCV-Ab的检测主要有胶体金（GICA）和酶联免疫吸附（ELISA）方法，GICA法虽然快捷、方便，但存在灵敏度低，重复性差，不能提供准确的确定界限值的标准品，不能进行质控工作等缺点，仅可以做为初步筛查试验[3]，而ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、可进行定量和半定量测定等优点成为检测HCV感染的主要方法。

导致ELISA法检测血清HCV-Ab出现假阳性的原因多数报道认为[4]易受加样、反应温度、反应时间、洗涤彻底性等诸多因素的影响，根据工作体会认为以下几个方面是出现假阳性主要因素：标本溶血、被细菌污染、贮存时间过长和标本凝固不全等标本处理问题；试剂盒的抗原不纯、采用多克隆抗体和酶结合物纯度低等试剂盒本身问题；加样时间过长造成加样后放入恒温箱前等待时间过长，加样后孔壁上贴有微小血块加样等问题；洗板针堵塞，抽吸不完全，洗液量不足，洗板次数少等问题。总之，影响ELISA法检测血清HCV-Ab出现假阳性因素除了方法学、试剂盒本身之外，还有标本处理、操作不当等多种因素。因此，检验人员在工作中应严格按照操作步骤进行操作，认真对待每一份标本，一定要做好检验前、检验中、检验后质控，尽可能降低人为因素造成的假阳性，对可疑的假阳性的标本一定要认真复测，尽可能用两种以上不同厂家试剂盒进行复检，最好采用PCR检测HCV-RNA进行确证。

[1]洪秀华.临床微生物学检验[M].1版,北京:中国医药科技出版社,2004:385.

[2]张志梅.ELISA法检测丙肝抗体出现假阳性的分析[J].中国社区医师,2009,11(24):187.

[3]王鹏,任美英,王树平.应用金标法检测抗-HCV 假阴性和假阳性的结果分析[J].实用医技杂志,2007,14(02):172-173.

[4]郑岚,蒋黎敏,方娴静,等.HBsAg,HCV 抗体和 HIV-1/2抗体胶体金检测法在急诊手术前的应用[J].现代检验医学杂志,2010,25(04):115-116.