子宫内膜异位症合并不孕患者卵泡液中ENA-78的意义

张岭梅 刘风华 王沂峰 姚吉龙

上皮中性粒细胞活化肽-78(epithelial neutrophil-activating peptide-78，ENA-78)属于C-X-C超家族，由78个氨基酸组成，相对分子量为83 000，是一种重要的炎性介质，具有趋化和激活中性粒细胞的作用［1］。其作为复杂炎性网络的一个重要环节，在生殖过程中也有重要作用。本研究旨在检测ENA-78在子宫内膜异位症合并不孕患者及输卵管因素不孕症患者卵泡液中的表达水平，探讨ENA-78在子宫内膜异位症致不孕中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年12月至2011年8月于深圳市妇幼保健院行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)子宫内膜异位症合并不孕患者及输卵管因素不孕症患者82例，年龄24～35岁;卵巢功能正常:月经第2～5天基础FSH水平4～10 U/L，LH水平4～10 U/L，E2水平200～293 pmol/L，阴道B超下每侧卵巢窦卵泡数均为5～9个;排除乙肝等感染性疾病;排除多囊卵巢综合症、糖尿病等其他内分泌疾病。其中经腹腔镜或开腹手术证实为子宫内膜异位症患者36例作为研究组，年龄(30±3)岁，不孕年龄(5.53±1.40)年。经腹腔镜或开腹手术证实为输卵管因素不孕患者46例作为对照组，年龄(30±3)岁，不孕年龄(4.87±1.17)年。IVF前及促排卵过程中B超下未发现双侧输卵管积液情况。2组一般资料具有均衡性。

1.2 方法 所有患者均选择黄体期降调节长方案。取卵时，实验室人员拣卵后回收第1管无血液污染的卵泡液。卵泡液经1 000×g离心10 min，取上清液分装至无菌小试管中，－20℃保存，酶联免疫吸附法(ELISA)检测卵泡液ENA-78水平。人ENA-78试剂盒(美国 ADL公司):检测范围 0～800 pg/ml，灵敏度1.0 pg/ml。严格按照说明书进行试剂配制和操作。

1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料正态性检验用Kolmogorov Smirnov法，采用两独立样本均数t检验进行数据处理，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究组卵泡液ENA-78水平平均为(185±65)pg/ml，对照组为(140±58)pg/ml，2组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。见表 1。

表1 2组患者卵泡液ENA-78水平及IVF-ET结局

3 讨论

育龄女性子宫内膜异位症发生率约为25%，其中30%～50%合并不孕［2］。子宫内膜异位症引起不孕的机制复杂，目前尚无一个单一的因素可以解释子宫内膜异位症与不孕的关系。有研究认为子宫内膜异位症患者体内免疫平衡异常是导致不孕的重要因素之一，异常的免疫调节可破坏腹腔液或卵泡液的微环境，导致卵泡发育异常、卵子质量下降，而对其受精过程产生不良影响，造成不孕［3，4］。ENA-78作为一种重要的炎性介质，在女性生殖系统的表达及作用已得到初步阐明。有学者发现女性生殖系统如输卵管上皮、卵巢组织、在位及异位子宫内膜间质细胞、腺细胞及胎膜组织等均可表达分泌ENA-78［5－8］。而在一些炎性等异常病变时其表达分泌会明显升高，Chegini等［7］通过体外实验证实TNF-α可以诱导子宫内膜间质细胞ENA-78分泌增加，IL-1β、内毒素、脂多糖等也可使相关组织细胞分泌ENA-78增加。ENA-78作为中性粒细胞趋化及活化的关键因子，其水平升高可导致中性粒细胞增多，并分泌相关细胞因子，损害正常组织或破坏局部微环境［6］。

本实验对子宫内膜异位症患者卵泡液中ENA-78水平进行ELISA检测发现，子宫内膜异位症合并不孕患者卵泡液ENA-78水平较输卵管因素不孕患者明显升高，这也与Dorothea M的实验结果基本一致［9］。同时对2组患者IVF-ET的随访发现，研究组与对照组相比，其胚胎种植率、妊娠率及流产率无降低，但其获卵数及受精率明显下降，提示子宫内膜异位症患者卵母细胞质量异常。卵巢排卵使卵泡液成为腹腔液主要来源之一，腹腔液成份的变化可能来自于卵泡液成份的变化，并与之变化相一致，本实验结果与既往发现内异症患者腹腔液ENA-78水平变化一致［10］。腹腔液中ENA-78可以刺激中性粒细胞及淋巴细胞分泌生长因子及细胞因子，促进内异症形成，破坏腹腔局部微环境，因此ENA-78可以作为子宫内膜异位症及其严重程度的评价指标。而卵泡液中ENA-78水平升高，与使之分泌增加的TNF-α、IL-1β，及由其所引起的炎性细胞及其分泌细胞因子协同，可使卵母细胞生长的微环境发生改变，从而影响卵母细胞的质量，并可使其受精能力及所形成的胚胎后续发育能力降低。

1 Walz A，Burgener R，Car B，et al.Structure and neutrophil-activating properties of a novel inflammatory peptide(ENA-78)with homology to interleukin 8.J Exp Med，1991，174:1355-1362.

2 Gianetto-Berrutti A，Fcyles V.Endometriosis related to infertility.Minerva Gineco1，2003，55:407-416.

3 林芸，周灿权，庄广伦，等.子宫内膜异位症影响体外受精-胚胎移植结局的初步探讨.中国实用妇科与产科杂志，2004，10:729-731.

4 Garrido N，Navarro J，García-Velasco J，et al.The enodmertrium versus embryonic quality in endometriosis-related infertility.Hum Reprod Update，2002，8:95-103.

5 Nakayama S，Mukae H，Ishii H，et al.Comparison of BALF concentrations of ENA-78 and IP10 in patients with idiopathic pulmonary fibrosis and nonspecific interstitial pneumonia.Respir Med，2005，99:1145-1151.

6 Itoh H，Nasu K，Nishida M，et al.Human oviductal stromal fibroblasts，but not oviductal epithelial cells，express Toll-like receptor 4:the site-specific mucosal immunity of the human fallopian tube against bacterial infection.Am J Reprod Immunol，2006，56:91-101.

7 Chegini N，Luo X，Pan Q，et al.Endometrial expression of epithelial neutrophil-activating peptide-78 during the menstrual cycle or in progestinonly contraceptive users with breakthrough bleeding and the influence of doxycycline therapy.Hum Reprod，2007，22:427-433.

8 Nishida M，Nasu K，Fukuda J，et al.Down-regulation of interleukin-1 receptor type 1 expression causes the dysregulated expression of CXC chemokines in endometriotic stromal cells:a possible mechanism for the altered immunological functions in endometriosis.J Clin Endocrinol Metab，2004，89:5094-5100.

9 Wunder DM，Mueller MD，Birkhuser MH，et al.Increased ENA-78 in the follicular fluid of patients with endometriosis.Acta Obstet Gynecol Scand，2006;85:336-342.

10 冯利霞，徐韶杰，孔翠花.子宫内膜异位症腹腔液中IL-2、IL-6的变化.河北医药，2010，32:1722-1723.