狗皮膏抗炎镇痛作用试验研究

赵贵琴，李帆帆，李纯刚，张燕，曾勇，孟宪丽

狗皮膏作为传统黑膏药制剂，为国家基本药物，并收载于中国药典。狗皮膏处方含有生川乌、生草乌、羌活、独活、青风藤、香加皮、防风等29味中药，具有祛风散寒，活血止痛的功效，用于风寒湿邪、气血瘀滞所致的痹症，症见四肢麻木、腰腿酸痛、筋脉拘挛，或跌打损伤、闪腰岔气、局部肿痛，或寒湿瘀滞所致的腕腹冷痛、行经腹痛、寒湿带下、积聚痞块[1]。目前对狗皮膏的研究主要集中在制备工艺控制指标[2]、基质[3]、提取溶剂、提取工艺及剂型改进[4]，而关于狗皮膏药效学的研究尚未见报道。因此，我们对狗皮膏进行了小鼠抗炎镇痛试验研究，为其临床应用提供药理学依据。

1 材料

1.1 实验动物

昆明种小鼠，体重18～22 g，由四川省医学科学院提供，动物合格证号：SCXK（川）2008-24。

1.2 药物

狗皮膏及基质：由天全县中医医院提供，参照2010年版中国药典制备项[1]进行制备，批号20100219；红花油（五环牌）：广东泰恩康制药厂有限公司生产，批号100702。

1.3 实验试剂

硫化钠：天津市博迪化工有限公司，批号20090226（临用前用75%乙醇配置成8%的溶液）；二甲苯：成都市科龙化工试剂厂，批号20091225；冰醋酸: 成都市科龙化工试剂厂，批号20100701；琼脂: 成都市科龙化工试剂厂，批号20091110。

1.4 主要仪器

智能热板测痛仪、打孔器（6mm）、计时器、电子天平。

2 方法

2.1 给药方法

于给药前24小时将小鼠背部用8%硫化钠脱毛2×2 cm2，将小鼠随机分为5组，即狗皮膏基质组、狗皮膏大、中 、小 3个剂量组 、红花油组，每组10只，各给药组在小鼠背部脱毛部位敷药。其中大、中、小剂量组分别按7.5 g.kg-1、5.0 g.kg-1、2.5 g.kg-1给药，狗皮膏基质组按7.5 g.kg-1给药，红花油组按0.2mL/只给药。每天给药6 h后去药，于实验前1 h再给药一次。

2.2 抗炎试验[5]

2.2.1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响 昆明种小鼠50只，雄性，分组及给药方法见“2.1”项下。连续用药5天，末次给药1 h后，各组动物右耳面涂二甲苯0.02mL致炎，30min后将小鼠脱颈椎处死，用直径为6mm的打孔器分别在左右耳对称处取圆形耳片，称重，以左右耳的重量差异作为肿胀度，计算肿胀抑制率。

2.2.2 对琼脂所致小鼠肉芽肿的影响 昆明种小鼠50只，雄性，分组及给药方法见“2.1”项下。所有小鼠均在左侧肋下皮下注射2%琼脂0.2mL/只，并于第二天开始连续用药6天，第7天将小鼠脱颈椎处死，小心剥离琼脂肉芽块，并称湿重（g）。

2.3 镇痛试验[6]

2.3.1 对小鼠热板法镇痛实验的影响 昆明种小鼠，雌性，给药前 24 h背部脱毛后将小鼠置于恒温热板上，温度保持在(55±0.5) ℃ 范围，测痛阈2次，间隔时间5min，以平均值在 5～30s之间的小鼠为合格。筛选合格小鼠50只，分组及给药方法见“2.1”项下。测定各鼠正常痛阈值后连续用药5天，末次给药 1 h、2 h、3 h、4 h时分别测各鼠痛阈值。

2.3.2 对小鼠扭体法镇痛实验的影响 昆明种小鼠50只，雌雄各半，分组及给药方法见“2.1”项下，连续用药5天后，于末次给药后1小时，每鼠腹腔注射0.7%冰醋酸0.2mL/只，并立即记时，观察小鼠出现扭体反应的潜伏期（min）及15min内扭体反应的次数（以小鼠腹部凹陷，双后肢伸展为扭体反应指标）。

2.4 统计学方法

实验数据均以(x±s)表示，并采用spss 13.0进行组间t检验。

3 结果

3.1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(见表1)

表1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

表1结果表明：狗皮膏大剂量组能够抑制小鼠耳肿胀（P＜0.05），狗皮膏中、小剂量组同基质组在统计上并无显著性差异（P>0.05），但对小鼠耳肿胀的抑制率呈现一定的趋势。提示狗皮膏对小鼠耳肿胀有一定的抑制作用。

3.2 对琼脂所致小鼠肉芽肿的影响（见表2）

表2 对琼脂所致小鼠肉芽肿的影响

表2结果表明：各给药组与狗皮膏基质组比较，狗皮膏大剂量组对小鼠肉芽肿具有一定的抑制作用

（P＜0.05）。

3.3 对小鼠热板法镇痛实验的影响（见表3）

表3 对小鼠热板法镇痛实验的影响

表3的结果表明：狗皮膏大剂量组在给药2 h后，与基质组比较具有显著性差异（P＜0.05），狗皮膏中剂量组在给药4 h与基质组比较也有统计学差异（P＜0.05），说明狗皮膏能提高小鼠痛阈值。

3.4 对小鼠扭体法镇痛实验的影响（见表4）

表4 对小鼠扭体法镇痛实验的影响

表4结果表明：狗皮膏大、中剂量组均能延长潜伏期（P＜0.05），且大剂量组在15min内的扭体次数也明显减少，说明狗皮膏具有较好的镇痛作用。

4 讨论

本研究所选择的4个抗炎镇痛试验均为验证药物抗炎镇痛作用的经典试验方法。本实验结果表明，狗皮膏大剂量组对小鼠耳肿胀及肉芽肿具有一定的抑制作用，且能明显提高小鼠痛阈值，延长潜伏期并减少扭体次数。因此，狗皮膏具有较好的抗炎、镇痛作用。这些结果为狗皮膏用于治疗腰腿疼痛、局部肿痛及跌打损伤提供了药理学实验依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].中国医药科技出版社,2010,844.

[2]张金莲,陈小荣.狗皮膏制备工艺控制指标的研究[J].江西中医学院学报,2002,14(4):26.

[3]张金莲,陈宇帆.狗皮膏基质改进的初步研究[J].江西中医学院学报,2002,14(3):26.

[4]高小春,韩建伟.狗皮膏的完善改进研究概况[J].中国中医药咨讯,2009,1(6):38.

[5]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海科技出版社,1987.

[6]徐淑云.药理实验方法学(第三版)[M].北京:人民卫生出版社,2001.