高效液相色谱法在生药分析中的应用

2011-10-30邹传宗

卫生职业教育 2011年8期

关键词：植物药色谱法指纹

邹传宗，陈华

（平凉医学高等专科学校，甘肃平凉 744000）

高效液相色谱法在生药分析中的应用

邹传宗，陈华

（平凉医学高等专科学校，甘肃平凉 744000）

随着植物药越来越受到人们的重视，其需求也不断增长，开展植物药的药代动力学、毒理学研究和质量控制，开发快速、灵敏、具有选择性的分析方法也越来越迫切。高效液相色谱法（HPLC）作为分析化学成分的有效手段，近年在药学领域的应用日趋广泛。现综述高效液相色谱法在生药分析中的应用。

高效液相色谱法；生药分析；应用

植物药越来越受到人们的重视。据报道，全世界大约有70%的医疗依靠各种类型的植物药。对植物药的兴趣主要基于以下2个原因：一是人们普遍认为植物药具有较小的毒性；二是用合成方法寻求新药物的可能性变得越来越小，同时已有的西药对一些疑难病症无能为力。随着对植物药需求的不断增长，开展植物药的药代动力学、毒理学研究和质量控制，开发快速、灵敏、具有选择性的分析方法也越来越迫切。高效液相色谱法（HPLC）作为一项分析速度快、分离效率高和操作自动化的技术，是一种非常有效和普遍适用的植物药分析方法。它较之于以往常用的薄层色谱等方法，无论是在精密度、准确度上，还是在灵敏度、重现性上都有无与伦比的优势。目前高效液相色谱法已经广泛应用于植物药中生物碱、皂苷、黄酮、蒽醌、香豆素等各种中药有效成分的测定，还用于中药及其制剂的质量监控。高效液相色谱法（HPLC）在生药中的具体应用主要体现在如下几个方面。

1 建立单味中药的高效液相指纹图谱

2000年，我国中药指纹图谱技术全面启动。指纹图谱能根据中医用药理论，从宏观的角度完成对中药的综合分析和整体分析，表达产品质量的稳定性、均一性；有效地鉴别样品的真伪或产地；指导中药种植符合GAP的要求。它是中药质量标准的一个飞跃，也是中药实现国际化的关键技术之一。

余静等通过对同一产地（龙江伊春南岔）10批刺五加样品，采用HPLC-UV、HPLC-MS进行分析，得到分离度和重现性均较好的刺五加药材HPLC-UV及HPLC-MS指纹图谱，并分别对水溶性成分指纹图谱中5个色谱峰和脂溶性成分指纹图谱中8个色谱峰进行了初步定性。2个指纹图谱相互补充为刺五加的相关研究提供了较全面的数据。同时表明质谱检测器对UV检测器是较好的补充。刘艳娥等通过对10批金银花药材样品进行HPLC指纹图谱研究确定了它们有11个共有峰。王荣等在对甘肃地产大黄药材样品的5批样品及其不同用药部位的HPLC研究中确定了7个特征峰，并且发现其中的α值（α=Tri/Trs，Tri为各组分的出峰时间，Trs为内参照峰的出峰时间）为0.12、0.13、0.28、0.67，它们在标准对照药材中未标出。由此认为共有7个色谱峰是大黄药材鉴定的有力依据。

对单味中药的高效液相指纹图谱进行研究，不仅在基础理论上为药材质量的评价做了大量而有效的工作，而且也为指纹图谱理论在应用领域中的开展提供了简便易行的方法。李磊等在对丹参水溶性成分以HPLC法进行研究的过程中，发现正品丹参共有18个共有峰，与其他鼠尾草属植物的指纹图谱存在较大差异，并且采用归一化数药法处理HPLC指纹图谱得到不同类别丹参的典型指纹条形码图。该条形码图简单明了，能直观、快捷地对不同等级和质量的丹参做出评价，对不同来源及真伪丹参做出准确鉴别。

2 不同地域、批次药材中主要化学成分比较的指纹图谱研究

对于部分应用时间长、疗效肯定、成分明确的药材，通过研究其主要化学成分的HPLC指纹图谱，从方法学的角度讲，能够使研究的方向更加明确，结果比较确定，能对药材质量做出更好的评价。陈志霞等通过对化橘红黄酮成分的HPLC法研究，从不同品种和产地的10批样品中得到三十余个峰，其中共有峰20多个，并发现大部分光橘红样品在51.40 min有一个含量超过10%的峰，而毛橘红则检测到此峰的含量极低。此外，毛橘红中的柚皮苷的含量均在70%以下，表明化州柚和柚主要有效部位黄酮类成分的HPLC指纹图谱有明显差别。马翠英等对10批不同地区的黄芩样品采用溶剂系统梯度洗脱后，确定了14个共有峰的HPLC指纹图谱。此外，张雯洁等进行了三七不同部位皂苷类成分的HPLC指纹图谱研究，认为三七不同部位中皂苷成分大体相同，并确定了17个特征峰。

3 应用于相似药材的鉴别及质量评价

许多同科或同属的药材，由于其具有相似的功效，在临床上有时混用，或在药材流通中掺伪。与此同时，某些资源匮乏、稀有的名贵药材，也存在急需寻找替代品的问题。而上述问题的解决都需要通过有力的质量控制和评价方法来解决，HPLC就是其中的方法之一。李晓蒙等通过对5批水牛角和羚羊角样品的HPLC法测定，发现羚羊角与水牛角的氨基酸含量有明显差异，前者含较高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸，而后者则是丙氨酸、颉氨酸的含量相对较高，2者可以用HPLC法区分。张聪等对中国红参和高丽红参进行了HPLC指纹图谱比较研究，表明国产红参和高丽红参的品质十分接近。

4 中药制剂的HPLC指纹图谱研究

中药制剂是中药产业发展的一个重要部分，质量控制是影响其全面发展和国际化的一个瓶颈。2002年，国家食品药品监督管理局要求对中药注射剂进行指纹图谱研究，而其他剂型的指纹图谱也相继有人开展了研究。苗爱军通过对2个不同厂家生产的刺五加注射液的分析，建立其24个特征峰的HPLC指纹图谱，并发现不同厂家的产品共有峰面积的比值有一定差异，认为HPLC指纹特征图谱可以快速区分不同的产品。而沈嘉等对不同工艺、不同原料制备的黄连解毒汤制品以及日本汉方黄连解毒汤剂用HPLC法分析，发现共有15～16个特征峰为共有峰，而不同生产工艺及原料制品的特征峰与内标峰的峰高比有显著区别，他们认为HPLC指纹图谱可以量化区分不同原料和生产工艺生产的同处方复方中药的质量特征。

5 中药方剂（见表1）

表1 HPLC在中成药分析中的应用

中药方剂一般由几种甚至几十种中药材组成，化学成分非常复杂。目前我们对中药方剂中的有效成分的认识还相当有限，有待开发准确地评价中药方剂质量的分析方法。人们由分析中药复方制剂中的一种活性组分到分析几种活性组分，逐渐提高评价中药制剂的水平。日本和台湾的健康福利部门都已明确规定，凡申请检察和注册的中药制剂必须包括至少2个作为质量指标的化学成分的含量分析。

Wen等对3种含黄芩、葛根的中药复方制剂中的黄芩甙、葛根素进行了测定。Lee以0.03%磷酸/乙腈（V/V）为流动相在Cosmosil 5C18-AR柱上用梯度洗脱，同时测定了由多味药材构成的中药复方制剂中的甘草甙、甘草甜素、橙皮甙、桂皮酸、桂皮醛和厚朴酚等6种活性组分。在同样的柱和流动相条件下，Lin等以对羟基苯甲酸丙酯为内标，测定了中药制剂中的龙胆苦甙、芒果甙、小檗碱、黄芩甙、次黄芩素和甘草酸。表1中列出了近年来为分析中药制剂中的活性组分开发的HPLC法。

高效液相色谱法吸取了经典液相色谱和气相色谱2种方法的优点，它必将在中药鉴定以及中药材的种植、中药炮制研究、中药活性成分的分析、生产工艺规范与优化、中药及其制剂生产的质量监控等方面起到重要的作用，但由于中药及其复方物质基础的复杂性，在中药药代动力学研究中高效液相色谱技术还有待进一步完善。

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