GC 法测定烧伤灵酊中右旋龙脑的含量

陈关键，陈爽（1.重庆市合川区中医院，重庆市401519；.重庆市疾病预防控制中心，重庆市40004）

烧伤灵酊由虎杖、黄柏、冰片等多味中药组成，具清热燥湿、解毒消肿、收敛止痛之功效，用于治疗各种原因引起的Ⅰ、Ⅱ度烧伤[1]。冰片为方中主药之一，传统医学认为，冰片有开窍醒神、清热止痛、生肌之功；现代医学研究表明，冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效[2]。笔者采用气相色谱（GC）法对烧伤灵酊中冰片的有效成分右旋龙脑进行含量测定，所建立的方法简便、灵敏、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

6890N型GC仪，包括其化学工作站等（美国Agilent公司）。

右旋龙脑对照品（批号：111688-200701）、水杨酸甲酯（批号：110707-200708）均由中国药品生物制品检定所提供；烧伤灵酊（石家庄乐仁堂制药有限责任公司，批号：20080521-1、20080521-2、20080521-3）；氮气、氢气和空气为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：ZB-WAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），固定相为聚乙二醇，涂布浓度为100%；柱流量：2.0 mL·min-1；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；载气：N2，流量为45 mL·min-1；燃气：H2，流量为40 mL·min-1；助燃气：空气，流量为450 mL·min-1；进样口温度：200 ℃；检测器温度：280 ℃；进样量：1 μL；分流进样，分流比为10∶1；程序升温：初始温度120℃，保持10 min，以20℃·min-1升至200℃，保持4 min。在上述条件下，右旋龙脑峰与内标峰及其他杂质峰达到基线分离，分离度均＞1.5，理论板数按右旋龙脑峰计算应不低于2 000[3～5]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液 精密称取内标物水杨酸甲酯0.500 0 g，置于50 mL量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液 精密称取右旋龙脑对照品0.125 0 g，置于25 mL量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液 精密移取样品0.1 mL，置于10 mL量瓶中，加上述内标溶液1 mL，再加无水乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液 精密移取缺冰片的阴性样品0.1 mL，按“2.2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

取无水乙醇、内标溶液、对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进行GC分析。结果表明，阴性对照溶液色谱图中无干扰吸收峰，表明其对样品测定无干扰，专属性强。色谱见图1。

2.4 线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置10 mL量瓶中，各加上述内标溶液1 mL，再加无水乙醇至刻度，摇匀。取1 μL注入GC仪，以右旋龙脑浓度（Y）为纵坐标，右旋龙脑与内标的峰面积比值（X）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝0.561 4X+0.008 9（r＝0.999 8，n＝6）。结果表明，右旋龙脑检测浓度在0.2～0.7 mg·mL-1范围内同其与内标的峰面积比值呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加上述内标溶液1 mL，再加无水乙醇至刻度，摇匀，取1 μL注入GC仪，重复进样6次，测定峰面积。结果，平均峰面积为0.876 0，RSD＝1.08%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液适量，分别于0、1、4、8、12、18 h进样分析，测定峰面积。结果，平均峰面积为0.909 2，RSD＝0.28%（n＝6），表明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批样品适量，共6份，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果，平均峰面积为0.899 1，RSD＝0.43%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取9份右旋龙脑浓度为50.0 g·L-1的样品溶液0.05 mL，置于10 mL量瓶中，分别加浓度为50.0 g·L-1的对照品溶液380、380、380、480、480、480、580、580、580 µL，加上述内标溶液1 mL，再加无水乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，进行GC分析，计算加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

按上述色谱条件和方法测定3批样品，分别进样，记录峰面积，计算样品中右旋龙脑的含量，结果见表2。

3 讨论

烧伤灵酊对多种细菌有较强的抗菌作用；可凉血、止血、止痛；能改善创面营养，促进新生肉芽组织生长，达到清创、去腐生肌和皮肤再生的目的；减少渗出，促使创面干燥等[6]。本试验采用GC法，在上述色谱条件下测定烧伤灵酊中右旋龙脑的含量，以水杨酸甲酯为内标物，以聚乙二醇为固定液，结果表明该方法专属性强、灵敏度高；并且除固定相为聚乙二醇外，其他试验条件均可作适当调整，测定结果不受影响，表明方法耐用性好。因此，该方法可用于本制剂的质量控制。

表2 3批中试样品测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of 3 batches of samples（n＝3）

[1] 彭如习，陈 桦，吕雪斌，等.HPLC法测定烧伤灵酊中虎杖苷的含量[J].中药材，2005，28（6）：514.

[2] 孙晓萍，欧立娟，宓穗卿，等.冰片抗炎镇痛作用的实验研究[J].中药新药与临床药理，2007，18（5）：353.

[3] 潘金火，严国俊.气相色谱法测定溃可宁贴片中龙脑的含量[J].中成药，2005，27（4）：469.

[4] 徐 华，刘伟华，杨少芳.气相色谱法测定肤康软膏中冰片的含量[J].中国医院药学杂志，2005，25（8）：743.

[5] 张开莲，叶 云，王 俊，等.毛细管气相色谱法测定雪抑乐中龙脑的含量[J].中国药房，2007，18（30）：2 355.

[6] 张蜀芸，廖慧中.烧伤灵酊治疗压疮39例疗效观察[J].齐鲁护理杂志，2009，15（1）：123.