补康灵对Lewis肺癌小鼠癌性恶病质的改善作用研究Δ

倪美鑫，张锦林，王庆华，朱顺星（.南通大学附属肿瘤医院，南通市 6003；.南通大学，南通市6003）

癌症恶病质（Cancer cachexia）是恶性肿瘤患者晚期常见的临床综合征之一，它严重影响患者的生活质量，是导致患者死亡的重要原因[1]。寻找能够改善癌性恶病质状态，且毒性较低的药物成为医学领域中的重要课题。补康灵是南通大学附属肿瘤医院的特色制剂（批准文号：苏药制字Z04000438），本研究观察补康灵对Lewis肺癌小鼠癌性恶病质的治疗作用，并检测分析与癌性恶病质发生、发展相关的血清细胞因子，探讨补康灵改善癌性恶病质的作用机制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

COULTER EPICS XL型流式细胞分析仪（美国贝克曼库尔特有限公司）；JY1002型电子天平（上海方瑞仪器有限公司）。

1.2 试药

补康灵（南通大学附属肿瘤医院制剂室，批号：2009021001）；醋酸甲地孕酮（MPA，青岛格瑞药业有限公司，批号：20091011）；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素（IL）-1、IL-6 ELISA试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 动物和细胞株

健康C57BL/6小鼠50只，♀♂兼半，体重（20±2）g，由南通大学实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（苏）2007-0021）。Lewis肺癌细胞株由中国科学院上海药物研究所提供。

2 方法

2.1 癌性恶病质动物模型制备

[2]复制Lewis肺癌小鼠胸膜转移恶病质模型的方法，将Lewis肺癌细胞培养传代后，调节细胞浓度为1×107个·mL-1，在小鼠腋后线第6肋间胸膜腔，每只接种0.2 mL细胞悬液，胸腔成瘤率为100%，小鼠于第5天均逐渐出现恶病质。

2.2 分组和给药

将50只小鼠随机分成5组，即空白对照（NC，等量蒸馏水）、癌性恶病质（CC，等量蒸馏水）、MPA（0.12 g·kg-1）和补康灵高、低剂量（BKL-H、BKL-L，18、9 g·kg-1）组。模型复制第5天，ig给药，每天1次，连续10 d。

2.3 观察指标

2.3.1 体重 每日上午8：00-10：00用电子称测量每只小鼠的体重，精确到0.1 g。

2.3.2 摄食量及饮水量 每组小鼠同笼喂养，提供同一饲料和自来水，每日上午8：00-10：00记录每组小鼠摄食总量和饮水总量。摄食总量＝前一天饲料量－次日测得饲料量，饮水总量＝前一天饮水量－次日测得饮水量。

2.3.3 小鼠生存时间 模型复制成功后，随机抽取其中3只，分别记录其生存时间。

2.3.4 标本采集与检测 ig给药结束后，小鼠眼球静脉采血，血液标本置于肝素化Eppendorf（EP）管内，2 000 r·min-1离心15 min，将上清分装，检测TNF-α、IL-1和IL-6，严格按照ELISA试剂盒说明书进行测定。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 补康灵对恶病质小鼠的生存状况的影响

3.1.1 体重变化 种荷瘤第5天，与NC组比较，CC组小鼠体重显著下降（P＜0.05）。与CC组比较，BLK-H组在第10天体重显著增加（P＜0.05），第15天BLK-H、BLK-L组小鼠体重显著增加（P＜0.01或P＜0.05）。小鼠体重变化见表1。

表1 小鼠体重变化（±s，g）Tab 1 Changes of body weight of mic（e±s，g）

表1 小鼠体重变化（±s，g）Tab 1 Changes of body weight of mic（e±s，g）

与NC组比较：＊P＜0.05；与CC组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.NC group：＊P＜0.05；vs.CC group：#P＜0.05，##P＜0.01

组别NC组CC组BKL-L组BKL-H组MPA组第1天19.20±0.75 19.12±0.51 19.22±0.58 19.09±0.47 19.24±0.63第5天21.43±1.02 19.62±0.98＊19.71±0.83 19.57±1.11 20.35±0.65第10天22.76±0.85 18.26±0.80＊19.07±0.98 20.21±1.27#21.20±0.91#第15天23.62±0.79 16.16±1.02＊17.49±1.16#18.23±1.05##18.67±0.81##

3.1.2 摄食量和饮水量 种荷瘤第5天，与NC组比较，CC组摄食量和饮水量显著下降（P＜0.05）。BKL-H、BKL-L组摄食量和饮水量较同期CC组均有显著改善（P＜0.01或P＜0.05）。小鼠摄食量变化见表2；小鼠饮水量变化见表3。

3.1.3 小鼠生存时间 CC组（16.78±1.05）d，BKL-L组（17.45±1.20）d，BKL-H 组（18.07±1.03）d，MPA组（18.13±1.07）d，NC组长期存活。与CC组比较，H-BKL组、MPA组小鼠生存时间显著延长（P＜0.05）。

表2 小鼠摄食量变化（±s，g）Tab 2 Changes of food intake of mice（±s，g）

表2 小鼠摄食量变化（±s，g）Tab 2 Changes of food intake of mice（±s，g）

与NC组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与CC组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.NC group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.CC group：#P＜0.05，##P＜0.01

组别NC组CC组BKL-L组BKL-H组MPA组第1天4.68±0.72 4.91±0.36 4.88±0.29 4.85±0.38 4.69±0.25第5天4.71±0.33 3.26±0.29＊3.39±0.42 3.28±0.31 3.44±0.46第10天4.47±0.24 1.92±0.41＊＊2.45±0.39#2.73±0.28#2.88±0.37#第15天4.59±0.35 1.59±0.26＊＊2.16±0.51#2.77±0.44##2.83±0.30##

表3 小鼠饮水量变化（±s，mL）Tab 3 Changes of water intake of mice（±s，mL）

表3 小鼠饮水量变化（±s，mL）Tab 3 Changes of water intake of mice（±s，mL）

与NC组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与CC组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.NC group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.CC group：#P＜0.05，##P＜0.01

组别NC组CC组BKL-L组BKL-H组MPA组第1天3.51±0.29 3.40±0.31 3.47±0.32 3.44±0.22 3.39±0.27第5天3.60±0.24 2.33±0.35＊2.38±0.30 2.31±0.28 2.26±0.19第10天3.47±0.30 1.41±0.37＊＊2.55±0.43#2.63±0.41#2.87±0.29#第15天3.55±0.41 1.39±0.33＊＊2.31±0.39#2.57±0.46##2.69±0.38##

3.2 恶病质小鼠血清细胞因子的测定

小鼠种荷瘤后IL-1、IL-6及TNF-α较NC组均有不同程度升高（P＜0.05）。与CC组比较，BKL-H、BKL-L组水平较同期CC组显著下降（P＜0.05）。小鼠血清细胞因子测定结果见表4。

表4 小鼠血清细胞因子测定结果（±s，pg·mL-1）Tab 4 The determination of serum cytokines in mic（e±s，pg·mL-1）

表4 小鼠血清细胞因子测定结果（±s，pg·mL-1）Tab 4 The determination of serum cytokines in mic（e±s，pg·mL-1）

与NC组比较：＊P＜0.05；与CC组比较：#P＜0.05vs.NC group：＊P＜0.05；vs.CC group：#P＜0.05

组别NC组CC组BKL-L组BKL-H组MPA组IL-1 14.58±3.92 31.87±7.23＊25.39±7.46#21.97±6.33#20.63±5.15#IL-6 59.71±15.72 116.23±20.19＊101.35±23.59 92.36±21.45#90.89±22.82#TNF-α 73.42±11.37 98.51±10.82＊90.47±11.76 85.66±12.34#84.39±11.50#

4 讨论

癌症恶病质的治疗一直是临床上的难题，且抗肿瘤治疗（如化疗、放疗等）会加重恶病质的发生、发展，使治疗方案难以正常实施，甚至导致患者死亡。虽然支持治疗取得了一定效果，但是由于其发生机制复杂，多数患者治疗并不满意[3]。

中医认为癌症恶病质属于“虚劳”的范畴，脏腑功能障碍及纳差、消瘦等症状乃是由于患者久病不愈，气血阴阳不足，脏腑功能衰竭，脾失运化，肌肤失于濡养所致[4]。因此，研究晚期肿瘤恶病质的中医药治疗有重要意义。根据肿瘤恶病质的中医基本病理变化，结合现代研究成果，补康灵以党参、黄芪、茯苓、白术、当归、熟地、枸杞子等18味中药组方。方中黄芪、党参善补脾肺之气，茯苓、白术善养脾肾之阴，配伍应用有益气养阴之功，当归、丹参为补血活血要药，全方重在补气养血、滋阴益肾，共奏健脾益肾、补气养血之功效。研究该药物对晚期Lewis肺癌恶病质小鼠的治疗作用，并初步探讨其可能机制，可为中医药提高晚期肺癌患者生活质量提供依据，寻找具有中国特色的治疗模式。

本研究发现，荷瘤小鼠体重均出现不同程度的下降、摄食减少等恶病质状态，病程中除NC组外，其余各组小鼠均出现活动减少、睡眠时间缩短及部分小鼠有毛发脱落，经ig给药后BLK组、MPA组在第10天体重无明显下降，第15天治疗组体重显著高于CC组。目前研究显示，部分致炎细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）等参与了恶病质的发生、发展过程，在一些恶液质模型当中IL-1、IL-6、TNF-α与恶液质的严重程度呈正相关[5～7]。本研究结果表明，荷瘤小鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α显著高于NC组，BKL组和MPA组指标显著低于CC组（P＜0.05），说明补康灵在一定的程度上可以改善小鼠癌性恶病质状态，其机制可能与其降低小鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-6水平有关，但确切机制有待进一步研究。

参考文献

[1] Finley.Management of cancer cachexia[J].AACN Clin Issues，2000，11（4）：590.

[2] 杜秀平，韩正祥，高向阳，等.小鼠Lewis肺癌胸腔与皮下移植模型的比较研究[J].中华肿瘤防治杂志，2007，14（23）：1 783.

[3] 邱正国，陈思曾.癌症恶病质的综合性治疗进展[J].医学综述，2009，15（3）：359.

[4] 高 军，王贝贝.癌症恶病质中医研究现状[J].广西中医学院学报，2010，13（3）：61.

[5] Esper DH，Harb WA.The cancer cachexia syndrome：a review of metabolic and clinical manifestations[J].Nutr Clin Pract，2005，20（4）：369.

[6] 王海燕，赵雪花，何丽娅.黄连素抗癌作用的分子机制[J].中国药房，2007，18（3）：221.

[7] 周开国，何桂珍.肿瘤恶病质的机制及可能的治疗基础[J].医学与临床，2011，31（1）：106.