鸡骨草醇提物对大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用研究

黄凯文，陈剑梅，苏宁，郭洁文，梁锦诗，刘若轩，吴伟文（.南方医科大学附属顺德第一人民医院，佛山市 5800；.广州市中医医院，广州市 500；.广州中医药大学，广州市 50405）

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指除酒精外和其他明确损肝因素（如遗传-环境-代谢-应激相关因素等）所致的、以弥散性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征，目前NAFLD全球发病率为20%～33%，由肥胖或2型糖尿病所致达75%，且有逐年增加的趋势[1，2]，目前对其尚无有效治疗药物。有研究[3]表明，鸡骨草具有利湿退黄、清热解毒、疏肝止痛之功效，本研究采用高脂饮食-四氯化碳（CCl4）复制脂肪肝大鼠模型，观察鸡骨草醇提物对病鼠肝功能和脂肪肝的影响。

1 仪器与材料

1.1 仪器

7170型全自动生化分析仪型（日本日立公司）；TB1020型切片机、RM2135型脱水机（德国Leica公司）；CX21型显微镜（日本Olympus公司）；RE252A型旋转蒸发仪（西安德派生物科技有限公司）。

1.2 试药

鸡骨草（广州致信药业有限公司，批号：090110）经广东省药物研究所中药药理室邱光清教授鉴定为真品；CCl4（上海联试化工试剂有限公司，批号：000220）；丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（批号：090121）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（批号：090116）均由上海北海生物技术工程有限公司提供。

1.3 动物

SPF级SD大鼠，♀♂兼半，体重180～200 g，购自广州中医药大学动物实验中心（动物合格证号：0067696）。

2 方法

2.1 试药的制备

用FW100型高速万能粉碎机粉碎鸡骨草，取20 g粉末置于索氏提取器中，加200 mL75%的乙醇在90℃水浴中回流提取3 h，取出提取液，再次用200 mL75%的乙醇在90℃水浴中回流提取3 h，合并提取液，用旋转蒸发仪将提取液浓缩至20 mL，即为试药（液）；40%CCl4橄榄油溶液。

2.2 模型的复制和分组、给药

参照文献[4]将50只SD大鼠随机分为正常对照（等容生理盐水）、模型（等容生理盐水）和鸡骨草醇提物高、中、低剂量（40、30、20 g·kg-1）组。正常饲养1周后开始复制模型。正常对照组常规饲养，模型和鸡骨草醇提物高、中、低剂量组大鼠于第1～2周给予高脂低蛋白饲料（79.5%玉米粉、20%猪油、0.5%胆固醇）饲养，并配合CCl4溶液sc。首次以纯CCl4溶液5 mL·kg-1sc，其后用40%CCl4橄榄油溶液3 mL·kg-1sc，每周2次，连续2周。此后，所有大鼠均采用普通饲料喂养，自由饮食。复制模型成功后，ig给药，每天1次，连续2周。于末次给药后禁食不禁水24 h，称大鼠体重，眼眶静脉丛采血，低速离心后取血清，－20℃贮藏，备用。全自动生化仪检测血清中AST、ALT含量。随后断颈处死大鼠，取肝脏，吸干表面血液后称重，计算肝脏系数；取肝左叶同部位肝组织1块（0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm），置于4%多聚甲醛中固定，做常规HE染色，光镜下进行病理形态学观察。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 动物存活情况

除正常对照组外，其余各组大鼠在复制模型过程中出现精神萎靡、活动减少、食欲下降、皮毛欠光滑、体重增长缓慢等，50只大鼠共死亡7只，其中喂养过程中ig死亡3只，严重肝损伤致死4只，最后存活大鼠数量为：正常对照组9只，模型组8只，鸡骨草醇提物低剂量组8只，鸡骨草醇提物中剂量组9只，鸡骨草醇提物高剂量组7只，其病死率分别为10%、20%、20%、10%、30%。

3.2 鸡骨草醇提物对模型大鼠血液生化指标的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠血清中AST、ALT含量显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，鸡骨草醇提物高、中、低剂量组大鼠血液AST、ALT含量显著降低，AST/ALT值显著升高（P＜0.01），提示鸡骨草醇提物可降低CCl4+高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠血清中AST、ALT活性，减轻肝细胞损伤程度。鸡骨草醇提物对CCl4致大鼠脂肪肝血清AST、ALT含量的影响见表1。

表1 鸡骨草醇提物对CCl4致大鼠脂肪肝血清AST、ALT含量的影响（±s）Tab 1 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on the serum levels of AST and ALT in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

表1 鸡骨草醇提物对CCl4致大鼠脂肪肝血清AST、ALT含量的影响（±s）Tab 1 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on the serum levels of AST and ALT in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

与正常对照组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

组别正常对照组模型组鸡骨草醇提物低剂量组鸡骨草醇提物中剂量组鸡骨草醇提物高剂量组n 9 8 8 9 7剂量/g·kg-1-- 2 0 30 40 AST/U·L-1 137.50±19.60 184.27±16.37＊139.43±23.55#135.67±14.12#134.15±32.87#ALT/U·L-1 36.20±14.85 68.20±13.51＊40.14±10.64#38.96±6.50#37.86±6.58#AST/ALT 3.79±0.59 2.70±0.64＊3.47±0.67#3.48±0.62#3.54±0.94#

3.3 鸡骨草醇提物对脂肪肝大鼠肝脏系数的影响

肝脏系数＝肝脏重量/大鼠体重（g）×100%。与正常对照组比较，模型组大鼠肝脏系数显著增加（P＜0.05）；与模型组比较，鸡骨草醇提物高、中、低剂量组均能显著降低大鼠肝脏系数（P＜0.05）。鸡骨草醇提物对CCl4致大鼠脂肪肝的肝脏系数的影响见表2。

表2 鸡骨草醇提物对CCl4致大鼠脂肪肝的肝脏系数的影响（±s）Tab 2 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on liver index in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

表2 鸡骨草醇提物对CCl4致大鼠脂肪肝的肝脏系数的影响（±s）Tab 2 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on liver index in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

与正常对照组比较：＊P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05vs.normal control group：＊P＜0.05；vs.model group：#P＜0.05

组别正常对照组模型组鸡骨草醇提物低剂量组鸡骨草醇提物中剂量组鸡骨草醇提物高剂量组n 9 8 8 9 7剂量/g·kg-1 2 mL·kg-1 2 mL·kg-1 20 30 40肝脏系数0.028±0.003 0.039±0.003＊0.034±0.002#0.032±0.003#0.031±0.004#

3.4 大鼠肝组织形态学观察

与正常对照组比较，模型组大鼠肝脏发生不同程度的肝细胞损伤及脂肪变性，肝小叶结构破坏严重，肝细胞胞浆内有大量脂肪空泡。与模型组比较，鸡骨草醇提物高、中、低剂量组大鼠肝细胞胞浆内脂肪空泡明显减少，肝小叶结构比较清楚，肝细胞索基本正常，提示鸡骨草可减轻肝细胞损伤及脂肪变性程度。大鼠肝组织形态学见图1。

图1 大鼠肝组织形态学观察（×200）Fig 1 Histomorphological observation of rats liver（×200）

4 讨论

NAFLD是由于过量脂肪向肝细胞内渗透、堆积形成脂肪浸润变化，“二次打击”学说是其较为公认的发病机制，“初次打击”是胰岛素抵抗导致肝脏的脂肪沉积，“二次打击”是在此基础上发生的氧化应激和脂质过氧化损伤导致肝脏炎症，脂肪性肝炎的持续存在或其他因素的打击可造成肝脏细胞外基质合成大于降解，形成进展性纤维化[5，6]。CCl4在肝内经细胞色素P450分解活化，生成2个活性自由基及一系列氧活性物，诱导膜系统发生脂质过氧化反应，大量降解膜磷脂，破坏生物膜结构的完整性，增高膜的通透性，肝细胞中的AST、ALT大量进入血液[7]。

鸡骨草成分复杂，具有降血脂、抗脂肪肝、护肝、利胆、抗菌、抗炎、镇痛、增强免疫、抗氧化、清除自由基、抗肿瘤和抗辐射等药理作用，临床主要用于治疗各类肝胆疾病，对急慢性肝炎、病毒性肝炎、胆囊炎、胆石症、脂肪肝均有良效[8]。本研究结果亦显示其能降低病大鼠血清中AST、ALT含量及肝脏系数，减轻其肝细胞损伤及脂肪变性程度，具有较强的抗肝损伤及缓解肝脏脂肪沉积的作用，证实鸡骨草可改善高脂饲料+CCl4所致大鼠的脂肪肝，但有关其有效部位或成分、药理作用机制和量效关系等尚需作进一步研究。

[1] 中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性脂肪性肝病诊疗指南[J].实用肝脏病杂志，2007，10（1）：11.

[2] Atul Luthra，Priyanka Nigam，Anoop Misra.Metabolic correlation and management strategies of non-alcoholic fatty liver disease：an Asian Indian perspective[J].Diabetes and Metabolic Syndrome：Clinical Research and Reviews，2007，4（1）：279.

[3] 陈晓白，莫志贤，甘耀坤，等.毛鸡骨草对高脂血症模型大鼠血脂和肝脂的影响[J].中国药房，2010，21（3）：202.

[4] 刘 锋，向志钢，许继凡，等.高脂饲料结合CCl4诱导小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立[J].江苏医药，2010，36（1）：69.

[5] Lidofsky SD.Nonalcoholic fatty liver disease：diagnosis and relation to metabolic syndrome and approach to treatment[J].Curr Diab Rep，2008，8（1）：25.

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[7] 张锦雀，黄丽英.肝损伤动物模型研究进展[J].福建医科大学学报，2009，43（1）：86.

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