钩藤总碱缓释滴丸的制备、含量测定和释放度考察Δ

刘 卫，王 盟，杨雪萍，张 强，王中师，孙 昕（解放军第88医院药剂科，泰安市 271000）

钩藤总碱是茜草科植物钩藤的主要成分，有明确的降低血压的作用[1]，但在水中难溶，煮沸后不稳定[2]，难以制成在水中完全分散的稳定制剂。在考察钩藤总碱性质后发现，它在1，2-丙二醇聚和聚乙二醇（PEG）中有很好的溶解性。因此，笔者制备了钩藤总碱缓释滴丸，以期改善钩藤总碱的分散度和释放度，达到抗高血压药所要求的持久平稳降低血压的目的。

1 仪器与试药

滴丸制备装置，参考文献方法[3，4]，由我院自制；1200型高效液相色谱（HPLC）仪（美国安捷伦公司）；ZBS-8型智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；UV-2401PC型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）。

钩藤，购自广西，经泰山医学院药学系赵雪梅教授鉴定为真品，按先前报道的方法[5]提取得到钩藤总碱；钩藤碱、异钩藤碱标准品（批号分别为1266-070214、1385-090213，中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，含量＞98%）；PEG6000（天津科密欧化工有限公司，批号：20070809001）；硬脂酸（常州佳业化工有限公司，批号：07111501）；1，2-丙二醇（天津博迪化工有限公司，批号：20070511）。

2 方法与结果

2.1 钩藤总碱缓释滴丸处方和制备工艺的确定

按照滴丸剂的一般制法，取钩藤总碱细粉与1，2-丙二醇混匀；将硬脂酸与PEG6000按比例混合后在水浴上加热熔融，加入钩藤总碱[5]混合物（总碱含量不低于90%），搅拌，溶解，保温倒入滴丸装置中，用规定的滴头按规定的滴速滴入冰浴的液体石蜡冷凝剂中冷却，固化成丸。

以钩藤总碱与丙二醇混合后在处方中的含量（A）、硬脂酸与PEG6000比例（B）、滴制温度（C）、滴速（D）为因素，每个因素选取3个水平，采用正交试验法，以滴丸外观质量（硬度、圆整度、丸重差异）和药物释放度为指标，外观总体指标和释放度指标权重各为0.5，对滴丸制备工艺进行优选，确定最佳成型工艺。其中，滴丸硬度、圆整度和丸重差异[6]按照从好到差的顺序人为分为5个等级，分别计1、2、3、4、5分；药物释放度参照2010年版《中国药典》（二部）中缓释、控释和迟释制剂指导原则的规定，用转篮法[6]测定释放度，考察以下3个时间点的累积释放量作为评价指标：1 h的累积释放度（Q1），以30%为标准；4 h的累积释放度（Q4），以60%为标准；10 h的累积释放度（Q10），以80%为标准。各点的评分为：1 h的评分为|Q1－30|；4 h的评分为|Q6－60|；10 h的评分为|Q10－80|；综合评分（K）＝|Q1－30|+|Q6－60|+|Q10－80|，K值越小，说明释放度与所定的标准越接近，即处方越合理。因素水平见表1；正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

由表2、表3可知，影响滴丸成型工艺的因素依次为B＞A＞C＞D，其中B因素有显著性意义。最佳组合为A1B2C2D2，并根据滴丸软硬度调1，2-丙二醇的量，得到优化的处方，即为钩藤总碱细粉8.8 g，1，2-丙二醇3.6 g，PEG6000 14.1 g，硬脂酸3.5 g，制成1 000丸。制法为钩藤总碱细粉（过100目）与1，2-丙二醇混匀；另取PEG6000、硬脂酸水浴熔融后，混匀，加入钩藤总碱，搅拌，溶解，保温70℃，用液体石蜡为冷凝液，滴距5 cm，滴速45 d·min-1，按每丸重30 mg制得滴丸。

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

表2 正交试验结果Tab 2 Results of orthogonal experiment

表3 方差分析结果Tab 3 Variance analysis of orthogonal experiment

2.2 钩藤总碱的含量测定方法

取本品6粒（相当于钩藤总碱约50 mg），精密称定，研细，加氯仿使溶解，精确加入25 mL 0.01 mol·L-1硫酸标准液，在水浴上挥去氯仿，过滤，瓶中残渣用适量蒸馏水洗涤2次，过滤，合并滤液和洗液，加入甲基红-亚甲蓝混合指示剂2滴，以0.02 mol·L-1氢氧化钠溶液滴定，由樱红色至黄绿色为终点。总碱量以钩藤碱计，每1 mL 0.01 mol·L-1硫酸溶液相当于7.68 mg钩藤碱。

2.3 钩藤碱、异钩藤碱的含量测定方法

2.3.1 色谱条件色谱柱：Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：室温；流动相：甲醇-水（60∶40）含10 mmol·L-1三乙胺，醋酸调pH值至7.5；流速：1 mL·min-1；进样量：10 μL；测定波长：254 nm。在此色谱条件下，钩藤碱的理论板数不低于1 500。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.3.2 线性关系考察 精密称取钩藤碱、异钩藤碱标准品各5 mg，分别置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准品溶液。分别取各标准品溶液1.2、2.0、2.8、3.6、4.4 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进样20 μL，做HPLC分析。以进样量（x，μg）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为A钩藤碱＝11.132x－1.232（r＝0.999 8）、A异钩藤碱＝21.243x－2.081（r＝0.999 1）。结果表明，钩藤碱和异钩藤碱的进样量分别在0.48～1.76 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.3 样品含量测定 取钩藤总碱20 mg，用甲醇溶解后滤过，25 mL容量瓶定容，按上述色谱条件进样测定钩藤总碱中钩藤碱和异钩藤碱的含量。

2.3.4 稳定性试验 精密称取钩藤总碱适量，置水中制成混悬液，分别在60、90℃水浴中加热60 min，放冷至室温，用氯仿萃取，水浴蒸干，甲醇溶解，测定室温及加热状态下钩藤总碱、钩藤碱和异钩藤碱的含量。结果表明，钩藤碱的稳定性优于异钩藤碱，故选择钩藤碱为定量指标。温度对钩藤总碱中各成分含量的影响见表4。

表4 温度对钩藤总碱中各成分含量的影响Tab 4 Effect of temperature on the content of components in rhomotoxine

2.3.5 钩藤碱的加样回收率试验 精密称定钩藤碱标准品约50 mg（A），与丙二醇混匀。将硬脂酸与PEG6000按处方比例混合，在水浴上加热熔融，加入钩藤碱标准品，精密称定（S1），搅拌混匀，保温下倒入滴丸装置中，按规定的方法制备滴丸100粒。取其中5丸，精密称定（S2），计算其中钩藤碱加入量（A×S2/S1），研细，用甲醇溶解，超声处理40 min，转移至50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定钩藤碱含量，计算回收率，结果见表5。

表5 加样回收率试验结果Tab 5 Results of recovery tests

2.4 钩藤总碱缓释滴丸释放度考察

2.4.1 对照样品的制备 为观察钩藤总碱缓释滴丸的缓释效果，按照制备钩藤总碱缓释滴丸的方法制备钩藤总碱普通滴丸作为对照，处方为钩藤总碱细粉8.8 g，1，2-丙二醇3.6 g，PEG6000 17.6 g，制成1 000丸。

2.4.2 测定释放度 药物释放度参照2010版《中国药典》（二部）中缓释、控释和迟释制剂指导原则的规定，用转篮法[6]分别测定3批（批号：080623、080624、080625）钩藤总碱普通滴丸的溶出度和钩藤总碱缓释滴丸的释放度，以0.1 mol·L-1盐酸作为溶出介质，转速为100 r·min-1，温度为（37±0.5）℃，依法测定，分别于0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12 h取样5 mL，同时补充同体积同温度的溶出介质，经0.45 μm微孔滤膜过滤后，测定钩藤碱浓度，计算累积释放度，绘制体外时间-浓度曲线。结果，钩藤总碱缓释滴丸释放缓慢且释放完全。钩藤总碱缓释滴丸体外时间-浓度曲线见图2。

2.4.3 重复性试验 制备钩藤总碱缓释滴丸3批（批号：080623、080624、080625），按上述方法测定释放度。结果，钩藤总碱缓释滴丸3批每个时间点累积释放百分率RSD＜5%，表明该产品累积释放度重复性好。钩藤总碱缓释滴丸的释放度重复性测定结果见表6。

表6 钩藤总碱缓释滴丸的释放度重复性测定结果Tab 6 Reproducibility experiment of release rate of Rhomotoxine sustained-release dropping pills

2.4.4 释药模型拟合 将批号分别为080623、080624、080625的缓释滴丸的释放度结果用零级模型、一级模型和Higuchi模型进行拟合。结果，Higuchi模型拟合的r＝0.992 3，为最大，表明本制剂释药过程符合Higuchi方程。钩藤总碱缓释滴丸的释药模型拟合见表7。

表7 钩藤总碱缓释滴丸的释药模型拟合Tab 7 Fitted drug release model of Rhomotoxine sustained-release dropping pills

3 讨论

滴丸剂是一固体分散制剂，通常以水溶性载体为基质制成滴丸，有提高药物分散度、加快药物溶出速率的作用，加入水不溶性基质可使普通滴丸具有缓释特性，这样既可以增加药物的分散度，又能达到缓慢、平稳释药的目的。本试验采用了水溶性载体PEG6000和水不溶性载体硬脂酸联合使用，制成了钩藤总碱缓释滴丸。滴丸成型工艺研究一般以圆整度、色泽、硬度等作为评价指标，但它们是一种非量化的主观判断，难以全面客观地反映滴丸的内在质量。本试验以滴丸的外观质量加丸重差异和累积释放度等为综合指标，通过正交试验对滴丸的成型工艺进行优化筛选，同时考虑了制剂的外观和缓释特性。

钩藤总碱是钩藤的主要有效成分，而异钩藤碱和钩藤碱是钩藤总碱的主要组成成分，具有降低血压的作用，作用强度顺序是异钩藤碱＞钩藤碱＞钩藤总碱[7]。可见，异钩藤碱和钩藤碱有条件作为滴丸的质量控制指标成分。由于异钩藤碱不稳定，加热条件下短时间内即发生分解，所建方法的不稳定，所以采用钩藤碱一种成分来进行滴丸的质量控制。试验证明，该方法稳定可靠，且操作简单，条件易控制。

释放度是评价缓释制剂的重要指标，其试验方法应尽量模拟药物在体内释放和吸收过程，本试验以0.1 mol·L-1盐酸为释放介质，模拟体内环境。结果表明，钩藤总碱缓释滴丸在0.1 mol·L-1盐酸中的释放时间超过2 h，药物在体内此时应已进入小肠碱性环境中，所以该制剂在碱性环境中的释药特性有待进一步确定。

[1] 何 昱，洪筱坤，王智华.钩藤及其有效成分的药理研究进展[J].上海中医药杂志，2003，37（11）：57.

[2] 黄卓谦，刘建利，王玉英，等.钩藤煎煮过程中化学成分变化的研究[J].西北大学学报，2008，38（10）：787.

[3] 俞慧琴，潘荣富.介绍一种滴丸制备装置[J].中国医院药学杂志，1986，6（9）：37.

[4] 孙 昕，魏 强，吕泰省，等.复方麝香草脑滴丸研制[J].中国药房，1997，8（6）：262.

[5] 王 盟，刘 卫，邱庆浩，等.正交试验法优选钩藤总碱提取工艺[J].医药导报，2009，28（9）：1 200.

[6] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录11.

[7] 王 盟，刘 卫.钩藤总生物碱的研究进展[J].实用医药杂志，2008，25（3）：361.