蒺藜总皂苷对AD大鼠的影响*

王永斌，甘云波

(咸宁学院基础医学院，湖北 咸宁 437100)

蒺藜(Tribulus terrestris L.)为蒺藜科蒺藜属植物，在我国民间有着悠久的药用历史［1］。蒺藜总皂苷(gross saponin from Tribulus terrestris L，GSTT)是从蒺藜中提取的甾体皂苷。已有研究表明，蒺藜总皂苷具有抗血小板聚集、抑制血栓形成、改善血液流变学、抗心肌缺血缺氧、抗脑缺血及改善脑缺血部位的血流量，减轻心脑缺血、缺氧损伤的作用［2］，临床主要用于缺血性心脑血管疾病治疗。AD是老年人常见的一种慢性进行性神经退行性疾病，目前针对AD的药物治疗效果不明显。由于AD的发病原因及机制没有完全清楚，研究开发出真正具有预防或治疗作用的药物将有广阔的前景和深远的意义。本实验拟观察蒺藜总皂苷对WT/GFX诱导的AD模型大鼠的学习记忆能力的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物和分组

成年健康雄性 SD大鼠30只，体重200～250g，咸宁学院实验动物中心提供。随机分为对照组、AD模型组、蒺藜总皂苷组，每组10只。

1.2 造模与用药

蒺藜总皂苷组每日上午给予蒺藜总皂苷(30mg/kg)尾静脉注射，每日1次，连续7天，AD模型组和蒺藜总皂苷组于第8天上午侧脑室注射WT/GFX，对照组给予生理盐水处理。

1.3 大鼠侧脑室立体定位注射

大鼠称重后，以水合氯醛(30mg/kg)腹腔麻醉。将大鼠固定于脑立体定位仪，头顶局部常规备皮、消毒，头顶正中矢状切开约1.5cm，3%H2O2棉球擦拭使前囟清晰暴露。依照立体定位图谱进行定位，确定前后囟在同一水平线上后，于前囟后0.8mm、矢状线左侧1.5mm处用手钻钻一孔(直径0.6mm)。用微量注射器取wortmannin及GF-109203X(WT/GFX)(浓度为 100μM)10μl，进针至硬膜下约4mm，慢速注入，注射时间每只约为5min。注射完毕后留针8～10min，再缓慢退针，以防药物沿针道返流颅外。术后局部涂抹青霉素粉末、缝合皮肤，再次消毒创处预防感染，将大鼠置于空笼内待其苏醒。

1.4 Morris水迷宫检测

在静脉给药的同时进行Morris水迷宫测试大鼠的空间记忆。测试用圆形水池直径120cm，高60cm;圆柱形有机玻璃平台直径10cm，高40cm，平台的顶端平面低于水池液面2cm，动物凭视觉无法辨认水池中有无平台。室温及水温均保持在(26±2)℃，水以奶粉搅浑，整个背景均为乳白色，以避免老鼠用视觉搜寻平台。大鼠在训练前放入水池自由游泳120s，使其熟悉环境。训练时将大鼠从任一象限1/2弧度处头面向池壁轻放于水中，其游泳图像经水面上方1.5cm处的摄像机拍摄并连接于路径追踪系统采集，通过微机分析，可提供潜伏期(即老鼠从入水点找到平台所用时间)、路径、搜索策略等指标，本实验选用潜伏期和游泳路径衡量大鼠学习和记忆成绩。每只大鼠每天在4个象限各训练1次，每次游泳时间限为120s，若在120s内未找到平台者系统自动停止记录，潜伏期记为120s，由测试者引导其上台，休息30s后进行下一次训练。采用的实验策略为每组大鼠侧脑室注射前连续训练7d，训练时间每天固定在2:00 pm到8:00 pm。侧脑室给药处理24h后，第9d再进行Morris水迷宫测试检测大鼠的空间记忆，以大鼠第9d训练的成绩作为测试成绩，将各组所得的成绩作比较，可反映大鼠空间记忆保留情况。

1.5 统计学分析

2 结果

水迷宫测试是一种主要依赖于海马的空间学习、记忆测试方法，而空间学习、记忆能力的减退与AD密切相关。对照组训练7d后，所有大鼠均在10s内找到水迷宫平台，其游泳轨迹比较简单笔直。第8d左侧脑室注射WT/GFX，在24h后检测其空间记忆保留能力的变化。结果显示:注射WT/GFX后，大鼠寻找平台的潜伏期增加约3倍，明显引起大鼠的空间记忆保留障碍(P＜0.01)，而预先给予蒺藜总皂苷可以明显缩短WT/GFX所致的潜伏期延长，大鼠的空间记忆保留障碍得以明显改善(P＜0.01)。与WT/GFX引起的杂乱无序的游泳轨迹相比，蒺藜总皂苷明显改善大鼠搜寻策略，游泳轨迹接近正常。以上结果表明蒺藜总皂苷能有效防止WT/GFX引起空间记忆障碍。见图1-3。

图1-3:Morris水迷宫检测大鼠空间记忆

3 讨论

有研究表明大鼠侧脑室注射wortmannin及GF-109203X(WT/GFX)能够模拟AD病理变化，该模型既表现空间记忆保留障碍，又有tau蛋白过度磷酸化及GSK-3β过度激活［3］。我们以往的研究发现蒺藜总皂苷能明显改善因AlCl3所致的大鼠空间记忆障碍［4］，本研究应用侧脑室注射WT/GFX的大鼠AD模型。首先尾静脉注射GSTT 1w，同时进行Morris水迷宫训练，在第8天侧脑室注射WT/GFX，24h后进行水迷宫测试，结果发现蒺藜总皂苷组明显缩短大鼠寻找平台的时间，搜寻策略也得以改善，由杂乱无章变成趋向式搜寻，表明蒺藜总皂苷能明显改善因WT/GFX所致的大鼠空间记忆障碍，对WT/GFX所致AD大鼠有治疗作用，蒺藜总皂苷对WT/GFX引起的tau蛋白过度磷酸化及GSK-3β过度激活是否也有改善作用有待进一步研究。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典一部.北京:化学工业出版社，2000:289

［2］侯俊英，王秀华，李红，等.蒺藜皂苷对缺血再灌注损伤心肌细胞保护作用实验研究［J］.中国药理学通报，2004，20(4):418

［3］Liu SJ，Zhang AH，Li HL，et al.Overactivation of glycogen synthase kinase-3 by inhibition of phosphoinositol-3 kinase and protein kinase Cleads to hyperphosphorylation of tau and impairment of spatial memory［J］.Journal of Neurochemistry，2003，87:1333

［4］甘云波.蒺藜总皂苷对阿尔兹海默病模型大鼠记忆能力的影响［J］.咸宁学院学报(医学版)，2008，22(2):100