二陈汤配方颗粒质量标准研究

(江阴天江药业有限公司，江苏 江阴 214434)

二陈汤出自《太平惠民和剂局方》，由陈皮、半夏(制)、茯苓、甘草、生姜等中药组方，具有除湿化痰、理气和胃之功效，适用于咳嗽痰多、胸膈痞闷、恶心呕吐等症[1]。二陈汤配方颗粒是由上述药味经现代制剂技术制成的颗粒剂。为有效控制该制剂的内在质量，确保临床用药安全有效，笔者应用薄层色谱(TLC)法建立了陈皮、甘草的鉴别方法，采用高效液相色谱(HPLC)法对陈皮中主要有效成分橙皮苷进行了含量测定[2]。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司);AT－330型柱温箱(天津奥特赛恩斯科学仪器有限公司);超声清洗机(无锡超声电子设备厂);十万分之一电子天平(瑞士梅特勒公司)。橙皮苷对照品(批号为0721－200010)、甘草酸铵对照品(批号为0731－200205)均购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用;二陈汤配方颗粒(批号分别为200811，200901，200904，江阴天江药业有限公司);硅胶G(青岛海洋化工厂);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

陈皮[2]:取本品3 g，研成细粉，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至约2 mL，作为供试品溶液。取不含陈皮的阴性样品3 g，同法制成阴性对照品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各3 μL，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)为展开剂，展开，展距约3 cm，取出，晾干;再以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展开，展距约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照品溶液则无此斑点(图1 A)。

甘草[2]:取本品2 g，加甲醇30 mL，超声处理1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。再取不含甘草的阴性样品2 g，同法制成阴性对照品溶液。另取甘草对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述4种溶液各4 μL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液及对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照品溶液则无此斑点(图1 B)。

图1 薄层色谱图

2.2 橙皮苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Lichrospher C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－醋酸－水(35∶4∶61)[2];检测波长:283 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 溶液制备

取橙皮苷对照品约10.70 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.107 0 g/L的对照品溶液。取本品约1 g，精密称定，精密加甲醇50 mL，称定质量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得供试品溶液。取缺陈皮的阴性样品约1 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

干扰试验:照上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各5 μL，分别注入色谱仪。供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液色谱图相应位置上显示相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间处无干扰，见图3。

线性关系考察:分别精密吸取橙皮苷对照品溶液(0.107 0 g/L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 量瓶中， 加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度分别为 0.021 4，0.042 8，0.064 2，0.085 6 g/L 系列对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值(Y)为纵坐标、橙皮苷质量浓度(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=21 503.99 X－6.84，r=0.999 87。结果表明，橙皮苷进样量在 0.214 ～1.070 μg 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

图3 高效液相色谱图

精密度试验:精密吸取橙皮苷对照品溶液(0.107 0 g/L)10 μL，按上述色谱条件重复进样5次，测定橙皮苷峰面积积分值。结果的RSD为0.40%(n=5)，表明精密度良好。

重现性试验:取同一批(批号为200811)样品，依法制备供试品溶液并测定。结果平均含量为4.25 mg/g，RSD为0.89%(n=5)。

稳定性试验:同一供试品(批号为 200811)溶液，分别于0，2，4，6，8 h时分别进样10 μL，测定橙皮苷的峰面积。结果的 RSD为1.02%(n=5)表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:取橙皮苷对照品约10.15 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(1.015 g/L)，备用。取已知含量的样品(批号200811)0.5 g，精密称定，分别加入上述橙皮苷对照品溶液 0.8，1.0，1.2 mL，各 2 份，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，分别进样5 μL，测定。结果见表1。

表1 橙皮苷加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

取二陈汤配方颗粒约1.0 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备溶液并进样5 μL，测定、计算含量。结果批号为200811，200901，200904 的样品中橙皮苷含量分别为 4.24，4.32，4.40 mg/g。

3 讨论

二陈汤配方颗粒中陈皮、甘草的定性鉴别采用TLC法，并分别与各自的阴性对照品溶液进行对照，结果没有干扰、斑点清晰，专属性强、重现性好，收到良好的效果。本试验中采用2005年版《中国药典(一部)》陈皮含量测定项下的流动相，分离效果好。

文中建立的定性、定量方法，可有效控制二陈汤配方颗粒的质量。另外，二陈汤配方颗粒制备工艺先进，服用、携带方便，可为临床应用提供新的用药方式。

[1]余子川，刘焱文，方 颖，等.二陈汤配方颗粒与传统煎剂的化学成分比较[J].中国中医药信息杂志，2003，9(10):42.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:59，132.