改变波长高效液相色谱法测定氨咖敏片中氨基比林和咖啡因含量

2011-03-06

中国药业 2011年4期

(河南省濮阳市食品药品检验所，河南濮阳 457000)

氨咖敏片是以氨基比林、咖啡因为主要成分的复方制剂。在国家药品标准[1]中，其氨基比林与咖啡因含量测定方法为化学分析法，其中氨基比林采用中和滴定法，存在辅料干扰引起的空白和样品滴定终点色泽不一致的误差;咖啡因采用氯仿萃取后剩余碘量法，操作烦琐、不准确。同时，咖啡因的含量较低。为使结果更精确，笔者采用改变检测波长的高效液相色谱法[2－3]测定，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;Secomam UVIKON xL型双光束扫描紫外/可见分光光度计;Precisa 92－SM－202A型电子天平。氨基比林、咖啡因对照品(批号分别为 100503－200301，100101－198403，中国药品生物制品检定所);氨咖敏片(成都第一制药有限公司);甲醇(色谱纯)，冰醋酸(分析纯)，水(纯化水)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水－冰醋酸(40 ∶60 ∶0.2);流速:1.0 mL/mL;柱温:室温;进样量:20 μL。外标法定量峰面积。理论板数按氨基比林峰计应不低于2 000，分离度符合要求。

2.2 检测波长确定

以流动相为溶剂，配制质量浓度分别为20 μg/mL的氨基比林与咖啡因对照品溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果氨基比林在263 nm波长处、咖啡因在273 nm波长处有最大吸收。在选定色谱条件下，氨基比林和咖啡因的平均保留时间分别为2.5 min和3.6 min。由于咖啡因的含量较低，为了提高方法的灵敏度和准确度，使检测器的检测波长在检测时均处于两种主要成分的最大吸收波长处，本试验采用变波长检测，即0～3 min时为263 nm，3～15 min时为273 nm。

2.3 溶液制备

取氨基比林对照品50.21 mg，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液Ⅰ;取105℃下干燥至恒重的咖啡因对照品10.16 mg，置100 mL量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀，作为贮备液Ⅱ;精密量取上述两种贮备液各5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按处方制备不含氨基比林和咖啡因的阴性对照品溶液。取氨咖敏片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于氨基比林0.1 g)，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 方法学考察

阴性干扰试验:取阴性对照品溶液、对照品溶液、供试品溶液，分别注入液相色谱仪。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱相应位置无吸收，证明阴性无干扰(图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取2.3项下对照品溶液，用色谱仪自动进样器分别进样 5，10，15，20，25，30 μL，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，氨基比林回归方程Y=55.85 X+73.635(r=0.999 8)，进样量在 0.5 ～ 3.0 μg 范围内与峰面积线性关系良好;咖啡因回归方程 Y=78.342 X+20.057(r=0.999 7)，进样量在 0.05 ～0.30 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一批供试品溶液，重复测定6次。结果氨基比林峰面积的 RSD=0.08%，咖啡因峰面积的 RSD=0.21%。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 h 时进样测定。结果峰面积基本不变，氨基比林峰面积的 RSD=0.13%，咖啡因峰面积的 RSD=0.29%。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品6份，每份10 mL，每2份分别精密加入氨基比林对照品(质量浓度74.4 μg/mL)、105℃下干燥至恒重的咖啡因对照品(质量浓度7.81 μg/mL)的混合溶液12，10，8 mL，按供试品溶液制备方法制备成供试液，分别测定，结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.5 样品含量测定

依法测定了4批样品，结果见表2。

3 讨论

在流动相中加入冰醋酸，峰形得到改善，同时在一定程度上缓解了拖尾现象。在每 100 mL 流动相中加入 0.1，0.2，0.3 mL 的冰醋酸，柱效、峰形随冰醋酸的加入明显提高，冰醋酸的加入量以0.2 mL为宜。试验中比较了250 mm，150 mm两种长度的C18柱。结果采用250 mm的C18柱时，咖啡因的色谱峰严重拖尾、对称性差;采用150 mm的C18柱时，氨基比林、咖啡因两主成分色谱峰的峰形均较理想，因此选用150 mm的C18柱。