高效液相色谱法检查骨筋丸胶囊中非法添加的松香酸

(江苏省泰州市药品检验所，江苏 泰州 225300)

为追求利益最大化，不法分子在某些贵重中药材中非法添加其他成分以增重，如在血竭、沉香中添加松香酸。松香酸为天然松香树脂的主要成分。有报道称，银屑敌胶囊因非法添加松香酸而造成患者视力下降、死亡等严重后果。骨筋丸胶囊是由乳香、没药、白芍、血竭等14味中药组成，按法定标准[1]检验是符合规定的，但笔者用薄层色谱法初步断定骨筋丸胶囊可能添加了松香酸，为此建立了用高效液相色谱(HPLC)法检查骨筋丸胶囊中非法添加的松香酸的方法，并通过二极管阵列检测器(DAD)加以确证，为基层打假提供了有效的检验方法。

1 仪器与试药

Waters 2695/2996/Empower高效液相色谱系统。松香酸对照试剂(Flvka Analytical，批号为1384624);骨筋丸胶囊(湖南某药厂，批号为0902301);乙腈(色谱纯)，水(超纯水)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱法

取供试品2 g，加石油醚(60～90℃)20 mL，振摇10 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。取松香酸对照试剂，用石油醚(60～90℃)溶解，制成0.5 g/L的对照试剂溶液。按处方量制备未添加松香酸的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照品溶液。分别取供试品溶液、对照试剂溶液和阴性样品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－冰乙酸(9∶1∶0.1)为展开剂展开，取出晾干，置紫外灯(254 nm)下检视。结果在供试品、对照试剂、供试品与对照试剂溶液混合点样的色谱图相应位置上，均检出形状及颜色相近的荧光斑点，并且供试品与对照试剂溶液混合点样的色谱图中斑点单一、紧密，在阴性对照品溶液色谱的相应位置上则没有检出荧光斑点(图1)。

图1 薄层色谱图

2.2 HPLC 法

2.2.1 色谱条件

色谱柱:SymmetryC18柱(150mm×4.6mm，5 μm);流动相:乙腈－0.1%甲酸(75 ∶25);检测波长:241nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25℃。

2.2.2 溶液制备

取供试品2 g，加甲醇20 mL，超声处理20 min，过滤，取续滤液即得供试品溶液。精密称取松香酸对照试剂10 mg，呈100 mL量瓶中，加甲醇约40 mL，超声溶解，放至室温，加甲醇至刻度，作为松香酸对照试剂溶液。按处方量制备未添加松香酸的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。

2.2.3 检测结果

分别吸取供试品溶液、对照试剂溶液、阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录HPLC色谱图及DAD光谱图。色图谱见图2，二极管阵列光谱图见图3。图2表明，供试品溶液色谱图在与对照试剂溶液色谱图保留时间相应位置上出现色谱峰，阴性样品无干扰。图3表明，供试品溶液和对照试剂溶液的HPLC－DAD图谱一致。利用计算机检测样品峰纯度，结果在规定阈值范围内。

图2 高效液相色谱图

图3 DAD光谱图

2.2.4 精密度试验

精密吸取松香酸对照试剂溶液10 μL，连续进样6次。结果松香酸对照试剂色谱峰保留时间分别为 14.988，14.985，14.995，14.886，14.945，14.946 min，RSD 为 0.3%，表明进样精密度良好。

2.2.5 样品中添加对照试剂测定

精密吸取样品中添加对照试剂溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并与供试品溶液色谱图比较。结果峰面积明显增大，且保留时间变化在变异范围内。

3 讨论

经过薄层色谱图、液相色谱图以及光谱图的验证，检查出骨筋丸胶囊确实非法添加了松香酸。

采用薄层色谱法发现，样品在与松香酸对照试剂相应的位置上有相同颜色的荧光斑点，初步确定样品中含有松香酸。再通过二极管阵列检测器对供试品溶液色谱图中与松香酸对照试剂溶液保留时间基本一致的色谱峰进行紫外光区的光谱检测发现，两者的光谱行为一致，进一步确定样品中含有松香酸。

[1]YBZ13882004，国家食品药品监督管理局标准(试行)[S].