透皮促进剂对萘普生的促透效果研究

姜建华，周晓芳，叶金翠

(1.浙江省杭州下城区中西医结合医院，浙江 杭州 310004; 2.浙江省肿瘤医院，浙江 杭州 310022;3.浙江省医学科学院药物研究所，浙江 杭州 310013)

萘普生为非甾体抗炎镇痛药(NSAIDs)，具有抗炎、镇痛、解热功效，临床常用于治疗各类风湿性关节炎、骨关节炎及强直性脊椎炎，可缓解各种轻度至中度的疼痛。NSAIDs对整个胃肠道均有损伤，患者长期口服NSAIDs，胃和十二指肠溃疡的发生率为10% ～20%[1]，是未使用NSAIDs的健康人群的5～15倍[2－3]，严重胃肠道并发症的发生危险是非NSAIDs使用者的4倍[4]。因此，需长期服药的患者或胃溃疡患者往往不能耐受NSAIDs。经皮给药作为安全、有效的给药途径，非常适合NSAIDs。萘普生经皮给药，不仅可避免口服给药的胃肠道刺激，而且可使药物在皮下、关节等局部保持高浓度，以发挥更好的治疗作用，避免全身作用产生的副反应。萘普生具有低相对分子质量(230.26)、低熔点(153～154℃)、油水分配系数与溶解性合适以及生物半衰期较短等特性，使得萘普生研制成透皮吸收制剂具可行性。本研究考察了透皮促进剂月桂氮酮(azone)、油酸(oil acid，OA)、月桂醇(dodecyl alcohol，DA)与 1，2－ 丙二醇(1，2－PG)单用或混合使用对萘普生的促透效果，为萘普生透皮给药系统的开发提供参考。

1 仪器与试药

LC－10 A型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD－10 A型紫外检测器;C－R 6 A型数据处理器(日本岛津);Valia－Chien双室渗透池(浙江大学玻璃仪器厂);电子分析天平(德国赛多利斯)。萘普生(中国药品生物制品检定所，批号为100198－0002);月桂氮酮(广州助剂化工厂)、油酸(沈阳市都西试剂厂)、月桂醇(上海化学试剂供应站)、丙二醇(如皋市金陵试剂厂)均为分析纯。雄性SD大鼠(浙江省医学科学院)。

2 方法与结果

2.1 皮肤来源与处理

取体重约200 g的雄性SD大鼠，用刀片刮去大鼠腹部毛，处死，剥离腹部皮肤，去除皮下脂肪及黏液，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干后置冰箱储存，备用。

2.2 皮肤渗透试验

将处理好的大鼠腹部皮肤固定于Valia－chien双室渗透池上，角质层面向供应室，真皮层面向接受室。渗透池固定在磁力搅拌器上，用星状磁粒以500 r/min的速度搅拌，并用水浴夹套使温度恒定为(37±0.5)℃。供应室中加入4 mL不同促进剂的萘普生供给液，塞子盖紧并以膜封口，接受室内加入10% 聚乙二醇400(PEG 400)生理盐水 4 mL。分别于 4，6，8，10，24 h 时取样 500 μL，同时立即补加等温等体积的接受液。以高效液相色谱(HPLC)法测定各时间点接受室中药物浓度，计算单位面积内药物的累积渗透量 Q(μg/cm2)。计算公式如下:

式中 Vn和 Cn分别为第 n次取样时接受液的体积和浓度;Vi和 Ci分别为第 i次取样时接收液的体积和浓度;Vn=Vi=4 mL;∑CiVi为取样带走的药物的累积和。以 Q与时间(t)作图得药物累积曲线，对曲线的直线部分进行线性回归，所得的直线斜率即为透皮扩散速率J(μg·cm2/h)。

2.3 萘普生质量浓度测定(高效液相色谱法)

2.3.1 检测波长选择

取萘普生适量，溶于流动相中，于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描。根据吸收图谱，萘普生在流动相中的最大吸收波长为231 nm，因此选定此波长为检测波长。

2.3.2 色谱条件

色谱柱:ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(70 ∶30)，水相中加入冰醋酸调 pH 至 2.0;流速:1.0 mL/min;检测波长:231 nm;柱温:37 ℃;进样量:20 μL。

2.3.3 线性关系考察

精密称取萘普生适量，配成贮备液，再用甲醇稀释配制成质量浓度分别为 1，5，15，20，25，30，35，40，50 μg/mL 的溶液，摇匀。精密量取20 μL注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录峰面积，得回归方程 A=16 403 C－469.4，R2=0.999 3(n=9)。结果表明，萘普生溶液的质量浓度在1.0～50 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.4 回收率试验

精密称取萘普生适量，配制高、中、低质量浓度的样品溶液各5批，依法测定，将结果代入标准曲线计算，与实际浓度比较，计算方法回收率。结果平均回收率为100.85%。

2.3.5 精密度试验

按照回收率试验项下操作方法，配制高、中、低3种质量浓度的样品溶液，同日内测定5批，隔日测定1批并连续5批。结果日内 RSD 为 0.53% ～0.85%，日间 RSD 为 0.67% ～2.10%。

2.4 单一促进剂促透试验

结果见表1。可知，azone和OA对萘普生有显著的经皮促透效果，而DA和1，2－PG对其无明显促透作用，尤其是1，2－PG单独使用时基本无促透作用。图1为单一使用促进剂后的药物经皮累积渗透量－时间曲线，结果表明，azone和OA对萘普生的促透作用明显与剂量相关，在5%浓度以下药物透皮量与促进剂浓度成正比，但5%浓度以上随促进剂浓度的增加促透效果反而下降，其中5%azone和5%OA的促透作用最显著。

表1 促进剂作用下萘普生的经皮渗透速率(J)及其促透倍数(ER)

2.5 合用促进剂促透试验

研究了azone或OA与1，2－PG联合应用对萘普生的经皮渗透促透效果，固定5%azone和5%OA浓度不变，分别与不同浓度的1，2－PG联合使用进行皮肤渗透试验。结果见表2和图2。可见脂溶性促进剂azone和OA与水溶性促进剂联合使用，比单独使用的促透效果更显著，促透倍数较在水中高达10倍以上。5%azone+20%1，2－PG可达最大促透效果。

3 讨论

萘普生收载于2005年版《中国药典(二部)》，其原料含量测定采用传统容量法，取样量大，滴定液配制较烦琐。萘普生针剂含量测定采用紫外分光光度法。本研究采用灵敏的高效液相色谱法测定萘普生的质量浓度，准确性好、精密度高，出峰快、峰形好，分析时间短，且皮肤蛋白浸出液等杂质峰与主峰分离完全，专属性好，回收率与精密度均符合要求，适用于体外透皮试验的检测。由于萘普生为弱酸性药物，在溶液中存在解离平衡，色谱行为受pH影响较大，因此试验时需在水相中加入冰醋酸调节流动相的 pH，以改善其峰形与维持稳定性。

图1 在不同促进剂其及不同浓度作用下药物经皮渗透累积量－时间曲线

表2 促进剂联合使用的经皮渗透速率(J)及其促透倍数(ER)

图2 azone或OA与1，2－PG联合使用的药物渗透累积量－时间曲线

提高药物的透皮速率是开发经皮给药制剂的关键，应用透皮促进剂是增加药物透皮吸收的首选方法[5]。其作用机制多是通过改变皮肤角质层扁平细胞的有序叠集结构(使有序排列变为无序排列)，增大角质层细胞间隙的空隙，使药物迅速进入皮下而被吸收[6]。本研究结果表明，azone和OA对萘普生的促透效果显著，且呈剂量依赖关系，5%浓度可达最佳促透作用;联合1，2－PG使用，可达单一促进剂无法比拟的促透效果，促透倍数达10倍以上，其中5%azone+20%1，2－PG达最大促透倍数。azone发挥促透作用与其同角质层中脂质的相互作用有关。azone的化学结构中有一较大的极性基团和脂质烷基链，可进入到脂质双分子层中破坏它的有序结构。采用电子衍射方法对从人角质层剥离的脂质进行的研究也表明，azone可作为一个独立相存在于角质层的脂质中[7]。1，2－PG单独作用无明显促透效果(促透倍数ER为1.03)，但与azone或OA联用时促透作用显著。一般认为，这主要是因为1，2－PG能作为良好的溶剂分布在类脂极性基团之间的亲水性区域，使azone更容易分配进入细胞间区域[8]。同时，1，2－PG的水溶性有利于药物在皮肤角质层和活性表皮间转运。5%的OA和20%的1，2－PG混合使用也可取得显著的促透效果(促渗倍数ER为11.78)。OA属于脂肪酸类化合物，与皮肤中脂肪酸有相似的结构，分子中存在的不饱和双键使其具有不对称的空间结构。当OA分子插入角质层内的脂质双分子层疏水结构时，由于其不饱和疏水的顺式结构，使双分子层扭转，形成微细的、易于渗透的流动性通道，从而有效地影响了角质层脂质结构的有序排列[9]。本试验所得结果初步验证了萘普生透皮给药的可行性，为萘普生经皮给药制剂的研发提供了参考。

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