气相色谱法测定盐酸吉西他滨中的5种残留溶剂

王崇益 陈建刚 金 华 江苏正大清江制药有限公司,江苏省淮安市 300; 江苏省淮安药品检验所

盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)化学名2-脱氧-2,2-盐酸二氟脱氧胞苷(β-异构体),是一种阿糖胞苷类似物,属于新型抗嘧啶核苷酸代谢化疗药物,属细胞周期特异性抗代谢类药物,主要作用于DNA合成期的肿瘤细胞,即S期细胞。在一定条件下,可以阻止G1期向S期的进展;具有抗瘤谱广、作用机制独特、毒性反应低、与其他化疗药物无交叉耐药且毒性反应无叠加等特点。国家药品标准[1]规定检查二氯甲烷、氯仿、吡啶、甲苯、正己烷的残留量,曾有资料报道[2]对丙酮、二氯甲烷、甲苯进行控制。而目前盐酸吉西他滨合成过程中使用了一定量的甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶媒,中国药典2005年版[3]对上述溶剂均规定了残留限度,笔者参考标准要求,采用顶空毛细管气相色谱方法,建立对盐酸吉西他滨中5种残留溶剂的测定方法,结果准确、灵敏,操作简便。

1 仪器与试药

Clarus500GC型气相色谱仪(检测器FID)(Perkins Elmer公司生产),Turbomatrix40型顶空进样器(Perkins Elmer公司生产);甲醇、乙醇、异丙醇 、二氯甲烷、二甲亚砜均为色谱纯,乙酸乙酯为分析纯;盐酸吉西他滨样品(江苏正大清江制药本公司生产,批号为 080301、080302、080401,红外图谱经与USP盐酸吉西他滨标准品图谱比对一致)。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品贮备溶液的制备。分别精密称取甲醇约3g、乙醇约3g、异丙醇约 1g、二氯甲烷 0.2g、乙酸乙酯约 1g,置装有约80ml二甲亚砜的100ml量瓶中混匀,加二甲亚砜稀释至刻度,摇匀备用。

2.1.2 样品溶液的制备。精密称取盐酸吉西他滨样品约0.5g,置顶空瓶中,精密加入二甲亚砜5ml,溶解,摇匀备用。

2.2 色谱条件与系统适用性 色谱柱:DB-624石英毛细管柱(30m×0.45mm,2.55μ m),柱温 40℃保持2min,然后以2℃/min升温至 50℃,再以 20℃/min升温至 200℃,保持1.5min;进样口温度140℃,检测器温度 260℃;载气为氮气,流速为5.5ml/min,分流为22ml/min;顶空平衡时间60min,进样体积1ml;加热炉温度 90℃;取样针温度100℃;传输线温度100℃。精密量取各对照品贮备溶液1ml,置入100ml量瓶中,用二甲亚砜稀释至刻度,摇匀;精密量取 5ml置顶空瓶中,密封。在上述色谱条件下进样测定,结果显示5种有机溶剂的理论板数均不低于5 000,各组分与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。

2.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液0.05ml、0.1ml、0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml分别置入 100ml量瓶中,加入二甲亚砜稀释至刻度,摇匀。分别量取上述溶液5ml,置顶空瓶中,密封,照2.2项中的方法进样测定。以对照品浓度C为横坐标,以峰面积A为纵坐标,进行线性回归。线性回归方程见表1。

表1 5种有机溶剂的线性回归方程

2.4 检测限及定量限的测定 分别精密量取甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯适量,逐级稀释,按 2.2项中的方法进行测定。以基线噪音的3倍计算,甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯的检测限分别为1.92,0.316,0.542,0.418,1.06μ g◦ml-1;以基线噪音的10倍计算,定量限分别为 6.336,1.04,1.789,1.38,3.18μ g◦ml-1。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液1.0ml,置入100ml量瓶中,加二甲亚砜稀释至刻度,混匀,制成100%规格的溶液作为对照溶液。精取5.0ml注入顶空瓶中,密封。按2.2项中方法进行测定,计算甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的RSD范围分别为 0.4%、0.4%、0.3%、0.8%(n=6)。

2.6 回收率试验 分别取对照品溶液适量,加二甲亚砜分别制成低(80%)、中(100%)、高(120%)3种浓度的对照品溶液;取已知溶剂残留的样品约0.5g共6份,精密称定,分别置顶空瓶中,精密加入上述 6份对照品溶液各5ml,密封,进样测定。结果甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯3种浓度样品的平均回收率分别为99.0%、104.4%、103.4%、105.0%、103.1%;RSD 分别 为2.9%、2.1%、1.7%、4.3%、1.9%。

2.7 样品测定 取3批原料按照2.2项中的方法制备供试品溶液,进样测定。计算样品中各有机溶剂残留量,结果甲醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均未检出,乙醇的含量分别为 305.3μ g/g 、260.8μ g/g 、265.2μ g/g;RSD 分 别为 4.3%、1.8%、1.1%,符合药典要求。

3 讨论

3.1 溶剂选择 以水为溶剂时,乙酸乙酯的回收率偏低,乙醇偏高,可能是乙酸乙酯在顶空瓶内加热水解的原因。用二甲亚砜作为溶剂后避免了乙酸乙酯的水解,因而得到了较好的回收率。

3.2 顶空进样条件 提高平衡温度有利于残留溶剂的挥发,但高温会引起样品的分解,干扰检测的进行。平衡时间的选择,在尝试 15、30、45、60、75、90min,显示 60min 后,各溶剂面积基本不变,故选择60min。进样体积的选择,尝试进样 0.2、0.5、1.0、1.5ml、2.0ml(蒸汽)、0.2、0.5ml体积进样时尤其是二氯甲烷相应值低,不利于样品检测。进样体积1.5ml以上时会导致样品峰加宽,不利于组分的分离。因为二甲亚砜在常压的情况下沸点为189℃,故要对取样针和传输线进行温度设置,考虑到加热平衡的炉温为90℃,在此基础上增加到100℃,用以防止二甲亚砜等挥发性成分在取样针和传输线上的冷凝。

1 国家药典委员会,编.国家药品标准-新药转正标准(第 47册)〔M〕.北京:人民卫生出版社,2005:50.

2 杨先启,茅海琼.顶空气相色谱法测定盐酸吉西他滨中的残留溶剂〔J〕.中国药师,2009,(5):600-601.

3 国家药典委员会,编.中华人民共和国药典(二部)〔S〕.北京:化学工业出版社,2005:附录56.