消水肿Ⅱ号对妊娠高血压综合征大鼠的防治作用*

孙国珍 陈卫平 史党民 贾淑杰 姚天一 李毅敏 叶 娟 王 蕾

消水肿Ⅱ号对妊娠高血压综合征大鼠的防治作用*

孙国珍 陈卫平 史党民 贾淑杰 姚天一 李毅敏 叶 娟 王 蕾

目的：观察消水肿Ⅱ号对亚硝酸左旋精氨酸甲酯(L-NAME)7 mg/kg致妊娠高血压综合征（妊高征）大鼠血压、尿蛋白及胎盘胎仔发育的影响。方法雌雄鼠合笼次日晨，雌鼠阴道涂片发现精子确定为孕0 d(E0 d)，按照顺序依次分入各受试组，即正常孕鼠组(A组，n=6，E10 d开始灌胃蒸馏水10 mL/kg)、妊高征模型对照组(B组，n=10，E10 d灌胃蒸馏水10 mL/kg)、硫酸镁阳性对照组(C组，n=8，E14 d开始腹腔注射硫酸镁注射液100 mg/kg)、消水肿Ⅱ号42 g生药/kg组(D组，n=10，E10 d开始灌胃消水肿Ⅱ号42 g/kg)、消水肿Ⅱ号21 g/kg组(E组，n=9，E10 d开始灌胃消水肿Ⅱ号21 g/kg)。孕期14 d开始，除A组外其他各组经静脉注射L-NAME 7 mg/kg 1次/d，共4 d。测定大鼠尾动脉血压，尿蛋白含量，胎仔、胎盘质量及死胎率、畸胎率。结果实验结束时，D组大鼠收缩压，舒张压，平均动脉压与B组比较，差异有统计学意义（均P<0.01）。E组较B组收缩压明显降低（P<0.05）。消水肿Ⅱ号对尿蛋白含量未见明显改善作用。E组死胎率较妊B组明显降低，畸胎率亦显著下降（均P<0.01）。结论消水肿Ⅱ号能够有效降低妊高征大鼠血压，促进妊高征大鼠胎盘供血和胎仔发育。

高血压,妊娠性 血压 胎盘 死胎 畸胎 疾病模型,动物 大鼠,Sprague-Dawley 消水肿Ⅱ号

消水肿Ⅱ号临床主要应用于妊娠高血压综合征(妊高征)。该方应用丹参和川芎的脂溶性成分以舒张平滑肌、黄芪的益气固本和益气化淤作用达活血安胎、益气生血及行血行水的功能。本研究旨在利用现代药理学方法探讨其用于妊高征治疗作用药效及机制，为消水肿Ⅱ号的临床应用提供药理学参考。

1 材料与方法

1.1实验动物 SPF级SD大鼠139只，雌性90只，雄性49只，平均8周龄，平均体质量(260.0±10.0)g，购自北京大学医学部实验动物科学部，许可证编号：SCXK（京）2006-0008。动物管理：标准化实验室［实验动物使用许可证号SYXK（津）2007-0001］，每天为大鼠提供普通全价颗粒饲料Ⅱ号(北京科澳协力饲料有限公司)，自由饮水。

1.2仪器与试剂 ALC-NIBP无创血压测量分析系统（上海奥尔科特生物科技有限公司），T-1000电子天平（常熟市双杰测试厂），PL203精密电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；消水肿Ⅱ号，为棕色膏状，规格2.371 g生药/g膏，用纯净水配制成不同浓度的应用液：42 g生药/kg，21 g生药/kg。硫酸镁注射液（天津金耀氨基酸有限公司），亚硝酸左旋精氨酸甲酯（L-NAME），购自碧云天生物科技有限公司，使用前用双蒸水无菌条件下配制成0.7%L－NAME溶液。

1.3造模与给药方法 将雌雄大鼠按照2∶1比例合笼，次晨用生理盐水浸湿的无菌棉签对雌鼠进行阴道擦拭，镜检发现精子者为妊娠[1]。造模：从妊娠后14 d开始，除正常孕鼠组外，其余孕鼠静脉注射L-NAME 7 mg/kg，正常孕鼠组静脉注射生理盐水，1次/d，共4 d。确定受孕大鼠43只，按受孕顺序依次分入各组，正常孕鼠组（A组）6只，于妊娠后10 d开始灌胃蒸馏水10 mL/kg；妊高征模型对照组（B组）10只，于妊娠后10 d开始灌胃蒸馏水10 mL/kg；硫酸镁阳性对照组（C组）8只，于妊娠后14 d开始腹腔注射硫酸镁注射液100 mg/kg；消水肿Ⅱ号42 g生药/kg组（D组）10只，于妊娠后10 d开始灌胃消水肿Ⅱ号42 g生药/kg（相当于临床人用剂量的30倍）；消水肿Ⅱ号21 g生药/kg组（E组）9只，于妊娠后10 d开始灌胃消水肿Ⅱ号21 g生药/kg（相当于临床人用剂量的15倍）。

1.4指标检测及方法 （1）血压：每组于妊娠后9 d（药物干预前）测量基础收缩压、基础舒张压及基础平均动脉压、于18 d（药物干预后）测量收缩压、舒张压及平均动脉压。（2）尿蛋白：妊娠18 d测定血压后，用4.5%戊巴比妥钠溶液腹腔注射大鼠麻醉，膀胱穿刺取尿，与日间3次腹部按压收集的尿液混合后，送检500 μL测得尿蛋白浓度。（3）胎盘和胎仔：剖腹取胎，观察子宫和胎盘形态，记录胎仔和胎盘质量，比较各组间的死胎率（死胎数/胎鼠总数）和畸胎率（畸死胎数/胎鼠总数）。

1.5统计学方法 用SPSS 11.5和SAS 9.1.3统计学软件进行数据分析，计量资料以x ±s表示，多组均数间比较采用单因素方差分析及SNK-q检验。计数资料用χ2检验，不符合χ2检验时进行双向无序R×C表确切概率法，组间两两比较时选用四格表确切概率法，以P<0.05为差异有统计意义。

2 结果

2.1消水肿Ⅱ号对妊高征大鼠血压的影响 制备妊高征模型前，各组大鼠基础血压差异无统计学意义(P>0.05)，见表1；实验结束时，B组大鼠收缩压、舒张压、平均动脉压较A组升高，D组收缩压、舒张压、平均动脉压较B组明显降低，E组收缩压较B组明显降低，差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05），见表2。

2.2对妊高征大鼠尿蛋白的影响 A～E组尿蛋白分别为（0.080±0.015）、（0.130±0.027）、（0.106±0.018）、（0.115±0.023）及（0.128±0.024）mg，差异有统计学意义(F=5.680，P<0.01)，其中B组较A组差异有统计学意义（q=3.804，P<0.01），C、D、E组与B组比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。

表1 药物干预前各组大鼠基础血压比较

表1 药物干预前各组大鼠基础血压比较

均P>0.05;1 mm Hg=0.133 kPa

组别 n 基础收缩压 基础舒张压 基础平均动脉压A组B组C组D组E组F 6 10 8 10 9 130.72±17.26 133.18±8.64 132.39±13.05 130.99±15.52 125.85±10.06 0.473 90.35±14.30 99.69±16.30 100.35±16.16 97.62±11.55 96.70±13.03 0.519 101.46±15.54 110.23±17.63 112.03±17.45 109.20±12.76 106.80±13.20 0.483

表2 消水肿Ⅱ号对妊娠高血压大鼠血压的影响

表2 消水肿Ⅱ号对妊娠高血压大鼠血压的影响

*P<0.05,**P<0.01

组别 n 收缩压 舒张压 平均动脉压A组B组C组D组E组F q A∶B A∶C A∶D A∶E B∶C B∶D B∶E C∶D C∶E D∶E 6 10 8 10 9 128.74±15.92 159.35±11.94 134.04±13.82 132.57±13.87 141.77±16.43 6.499**5.837**0.938 0.743 2.484 5.058**6.036**3.871*0.299 1.544 2.073 96.00±18.01 117.42±8.52 104.85±14.40 99.89±9.30 111.25±13.24 4.061**4.697*1.801 0.868 3.343 2.889 4.543**1.563 1.161 1.470 2.943 106.25±18.80 129.36±10.05 115.41±16.03 111.90±9.75 123.40±14.22 3.862*4.674*1.719 1.162 3.470 2.957 4.174*1.390 0.759 1.695 2.751

2.3消水肿Ⅱ号对胎仔和胎盘的影响 各组胎盘和胎仔质量比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表3。B组和D组均出现死胎和畸胎现象，且A组死胎率与B组、D组比较差异均有统计学意义（P<0.05），C组、E组死胎率和畸胎率与B组比较均显著降低（P<0.05或P<0.01），见表4。

3 讨论

妊高征动物模型的建立方法主要有结扎双侧子宫动脉致子宫胎盘缺血[2]、内毒素皮下注射致血管内皮损伤[3]、局部寒冷刺激孕鼠足底[4]及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂皮下或静脉注射致一氧化氮合成降低[5-6]。结合妊高征的全身细小动脉痉挛的基本病理变化，本实验采用L-NAME静脉注射，慢性阻断孕鼠NOS使其产生妊高征样症状。实验结果证实孕鼠L-NAME静脉注射7 mg/kg即可诱发孕鼠血压升高及蛋白尿，同时出现胎鼠发育迟缓，死胎增加等症状，与人类妊高征的表现相似。大鼠孕期分期为孕1～4 d为着床期，7～9 d为早孕期，9～13 d为中孕期，16～18 d为晚孕期[5]。L-NAME诱导的大鼠妊高征大多是在大鼠妊娠中晚期，因此本实验选择L-NAME注射时间为孕14 d，以求起到慢性NOS抑制作用。

表3 消水肿Ⅱ号对胎仔和胎盘的影响

表3 消水肿Ⅱ号对胎仔和胎盘的影响

均P>0.05

组别 n 胎盘质量 胎仔质量A组B组C组D组E组F 6 10 8 10 9 0.404±0.019 0.376±0.023 0.377±0.043 0.408±0.032 0.391±0.060 1.291 1.510±0.055 1.430±0.056 1.462±0.105 1.544±0.140 1.548±0.140 2.116

表4 消水肿Ⅱ号对死胎率、畸胎率的影响 （%）

D组大鼠尾动脉收缩压、舒张压和平均动脉压较B组均降低，表明消水肿Ⅱ号降压作用明显，但未见对尿蛋白含量的影响。孕鼠、胎盘和胎仔三者有着紧密的关系：一氧化氮（NO）在维持胎儿-胎盘循环的基础血管张力，调节孕期子宫-胎儿-胎盘循环的血流量方面发挥重要作用。胎儿发育迟缓，死胎增加是妊高征的重要特征[7]。本实验结果表明，L-NAME静脉注射可致孕鼠胎盘质量下降，胎仔发育迟缓，死胎、畸胎率增加；消水肿Ⅱ号可降低畸胎率、死胎率。D组出现9个死胎和1个畸胎，E组未出现死胎和畸胎，考虑可能为消水肿Ⅱ号21 g生药/kg是预防畸胎和死胎的有效剂量，而随剂量增高至42 g生药/kg，其预防畸胎、死胎的效果已不明显。

[1] 徐叔云主编.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2002：1571-1571.

[2] Takei H,Iizuka S,Yamamoto M,et al.The herbal medicine To⁃ki-shakuyaku-san improves the hupertension and intrauterine growth retardation in preeclampsia rats induced by Nomega-ni⁃tro-L-arginine methyl ester[J].J Phytomedicine Sci，2007,104(4):319-328.

[3] Pandhi P,Saha L,Malhotra S.Effect of oral magnesium supplemen⁃tation on experimental preeclampsia induced by prolonged block⁃ade of nitric oxide synthesis in pregnant rats[J].Indian J Exp Biol，2002,40(3):349-351.

[4] Fernández Celadilla L,Carbajo Rueda M,Muñoz Rodríguez M.Pro⁃longed inhibition of nitric oxide synthesis in pregnant rats:effects on blood pressure,fetal growth and litter size[J].Arch Gynecol Ob⁃stet，2005,271(3):243-248.

[5] Podjarny E,Benchetrit S,Katz B,et al.Effect of methyldopa on re⁃nal function in rats with L-NAME-induced hypertension in preg⁃nancy[J].Nephron，2001，88（4）：354-359.

[6] 方马荣，李继承.川芎嗪合并硫酸镁治疗妊高征大鼠的疗效及机制探讨[J].实验生物学报，2005，38（2）：45-53.

[7] 陈敦金，赵扬，佘若菁，等.川芎嗪、硫酸镁对妊娠高血压综合征患者的影响[J].中国中西医结合杂志，2003，23（3）：185-188.

The Preventive Effect of XSZⅡon Pregnancy-Induced Hypertension in Rats

SUN Guozhen,CHEN Weiping，SHI Dangmin，JIA Shujie，YAO Tianyi，LI Yimin，YE Juan，WANG Lei

Tianjin Central Hospital of Obstetrics and Gynecology，Tianjin 300052，China

Objective:To study the hypotensive and preventive effects of XSZⅡon pregnancy-induced hypertension in rat model established by L-NAME.Methods:Pregnancy rats were assigned to 5 groups according to the sequence of pregnan⁃cy including normal pregnancy rats(A group,n=6,PO distilled water 10 mL/kg from E10)，hypertension control rats(B group,n=10,PO distilled water 10 mL/kg from E10)，Epsom salt control rats(C group，n=8,ip Epsom salt 100 mg/kg from E14)，XSZⅡ 42 g/kg group(D group，n=10,PO XSZⅡ 42 g/kg from 10)and XSZⅡ 21 g/kg group(E group，n=9,PO XSZⅡ21 g/kg from E10).Pregnancy rats were injected 7 mg/kg L-NAME i.v.on the E14 once a day for 4 days except for rats of A group.The values of tail arterial blood pressure,urine protein,placental weight,fetal death rate and birth defects rate were measured in rats.Results:There were different significances in systolic blood pressure,diastolic blood pressure and mean ar⁃terial pressure between D and B group(P<0.01).The systolic blood pressure was significantly decreased in E group com⁃pared with that of B group(P<0.05).There was no significant improvement in urine protein in rats treated by XSZⅡ.The still birth rate was significant lower in E group than that of B group(P<0.01).The abnormal embryo rate was also significant lower in rats of E group than that of control group(P<0.01).Conclusion:For pregnancy-induced hypertension,XSZⅡcan effectively reduce the blood pressure and promote blood supply to the placenta and fetal rat development.

hypertension,pregnancy-induced blood pressure placenta fetal death monsters disease models,animalrats,Sprague-Dawley XSZⅡ

*天津市卫生局中医、中西医结合科研课题基金（项目编号：07054）

300052 天津市中心妇产科医院（孙国珍，史党民，姚天一，叶娟）；天津市医药科学研究所（陈卫平，贾淑杰，李毅敏，王蕾）

（2010-03-30收稿 2010-08-13修回）

（本文编辑 陆荣展）

消 息