大孔吸附树脂分离白鲜皮抗炎有效组分的实验研究

艾丹，杨桂明

(黑龙江中医药大学佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007)

白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的根皮，具有清热燥湿、祛风解毒，止痒的功效。现代药理学研究证明，白鲜皮具有抗氧化、抗病毒、抗细菌、抗炎、抗肿瘤等多种活性。本课题组前期研究发现，白鲜皮的95%乙醇提取物具有显著的抗炎作用。本实验中采用大孔吸附树脂柱色谱法对白鲜皮的95%乙醇提取物进一步分离，考察不同洗脱物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响，探讨白鲜皮抗炎的有效组分。

1 材料与仪器

1.1 动物

SPF级KM小鼠70只，体重(18～22)g，♂，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK黑2008004，适应饲养3d后供试。

1.2 药物

药材:白鲜皮购于河北安国药材市场，经黑龙江中医药大学中药学教研室陈效忠副教授鉴定为芸香科植物白鲜(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的干燥根皮，粉碎成粗粉，备用。

受试药物:水洗脱物、20%乙醇洗脱物、50%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物、95%乙醇洗脱物，供药效筛选用。

阳性对照药物:吲哚美辛肠溶片，临汾宝珠制药有限公司，批号:090201。

空白对照药物:生理盐水，浙江济民制药有限公司，批号:08122403。

1.3 试剂及仪器

二甲苯(分析纯，沈阳市新西试剂厂，批号:20061110);乙醇(分析纯，沈阳市东光试剂厂，批号:20090429);氢氧化钠(分析纯，天津市恒光化学试剂制造有限公司，批号:20081218);盐酸(分析纯，固安县北方化学工业公司，批号:081216);水为蒸馏水;AB－8型大孔吸附树脂(河北省沧州市宝恩化工有限公司)。

恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司，型号:DK－98－1);真空干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司，型号:DZF－6020);旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂，型号:RE5220);旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司，型号:R－201);电子分析天平(德国赛多利斯集团，型号:ALC－210.4)。

2 方法

2.1 样品溶液制备

称取白鲜皮粗粉800g，加入4倍量的95%乙醇，于恒温水浴锅(100℃)中回流提取2h，提取液经滤过后，减压浓缩挥去乙醇，放入真空干燥箱中除去残留溶剂，干燥后的样品加蒸馏水稀释至0.5g·mL－1，备用。

2.2 大孔吸附树脂预处理

称取一定量的AB－8型大孔吸附树脂，用水漂洗去白色混浊物，加入95%乙醇泡24h使之充分溶胀，湿法装柱，用95%乙醇洗柱至流出液与水混合(1∶3)不呈白色混浊为止，以蒸馏水洗柱至流出液无醇味，然后用4%NaOH溶液洗至呈碱性，浸泡6h，以蒸馏水洗至中性，再用4%HCl溶液洗至呈酸性，浸泡6h，以蒸馏水洗至中性，备用。

2.3 吸附洗脱

样品溶液过预先装好的大孔吸附树脂柱进行吸附。依次用水、20%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂，加蒸馏水稀释至浓度为4mg·mL－1，备用。

2.4 阳性对照药物制备方法

吲哚美辛肠溶片，每片25mg，实验时用蒸馏水配置成5mg·mL－1的溶液，备用。

2.5 抗炎实验

取KM小鼠70只，随机分成7组:生理盐水组，吲哚美辛组，水洗脱物组，20%乙醇洗脱物组，50%乙醇洗脱物组，70%乙醇洗脱物组和95%乙醇洗脱物组。分别灌胃给白鲜皮不同洗脱物制剂和对照药物(详见表1)，连续7d。末次给药1h后，于小鼠右耳两侧均匀涂布二甲苯0.05mL·只－1，左耳不涂作为对照，致炎1h后脱颈处死动物，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打孔器打下双耳同一部位圆片，用电子分析天平精密称重，右耳片重量减去左耳片的重量即为肿胀度，抑制率(%)=(模型组肿胀度－给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%。

2.6 统计学处理

3 结果

结果如表1所示，与生理盐水组比较，95%乙醇洗脱物能明显减轻二甲苯致炎小鼠的耳廓肿胀程度(P<0.01)，提示95%乙醇洗脱物均有较好的抗炎作用;与吲哚美辛组比较，95%乙醇洗脱物抗炎作用未见明显差异(P>0.05)，作用与吲哚美辛相似;与生理盐水组比较，20%乙醇洗脱物，50%乙醇洗脱物，70%乙醇洗脱物不具有抗炎作用(P>0.05)。

表1 白鲜皮不同洗脱物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(±s)

表1 白鲜皮不同洗脱物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(±s)

注:与空白对照组比较，*P<0.01。

组别 动物数(只)剂量(g·kg－1)肿胀程度(mg)抑制率(%)17.08±1.97－吲哚美辛组 10 10 7.40±1.79* 56.67水洗脱物组 10 50 16.38±1.95 4.16 20%乙醇洗脱物组 10 50 16.11±1.87 5.68 50%乙醇洗脱物组 10 50 15.96±1.76 6.56 70%乙醇洗脱物组 10 50 15.78±1.81 7.67 95%乙醇洗脱物组 10 50 8.81±1.92*生理盐水组 10 10mL·kg－1 48.42

4 讨论

4.1 中药提取液中有效成分的精制方法有醇沉去杂法、有机溶剂萃取法、大孔吸附树脂吸附法、聚酰胺柱分离法等。其中大孔吸附树脂吸附法操作简便、无污染、成本较低，较其它方法所得提取物体积小、不吸潮、易制成各种剂型。本研究中采用AB－8型大孔吸附树脂对白鲜皮的醇提物进行分离。AB－8型大孔吸附树脂为聚苯乙烯型非极性吸附树脂，该树脂的比表面积和孔径较大，适合于吸附具有一定疏水性的中药成分，吸附量较大，洗脱容易，吸附动力学性能良好［1］。对热、有机溶剂和一般使用条件下的酸、碱稳定，使用寿命较长。

4.2 非特异性炎症是具有血管系统的活体组织对局部损伤的反应。在炎症的早期，某些炎症介质刺激血管，使血管扩张，血管内皮间隙扩大，血管壁通透性增强，血管内的液体、蛋白质和白细胞等渗出到组织间隙，随着渗出的增加，造成组织肿胀，炎症渗出组织肿胀是急性炎症病理组织学的主要特征。本研究采用二甲苯作为致炎因子，引起急性炎症反应，通过测定小鼠耳廓的肿胀程度，反应出白鲜皮不同洗脱物的抗炎效果。实验研究结果表明，95%乙醇洗脱物能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀，提示其具有显著的抗炎作用。

［1］景怡，景荣琴，任远，等.AB－8大孔吸附树脂分离纯化玉米须中总黄酮的研究［J］.中医药学报，2010，38(1):75－77.