高效液相色谱法测定老年咳喘片中淫羊藿苷含量

2010-06-01李志红石国明

中国药业 2010年6期

李志红，付彬，石国明

（河南羚锐制药股份有限公司，河南信阳 464000）

老年咳喘片由黄芪、白术、防风、补骨脂、淫羊藿、黄精、甘草组方，具有滋阴壮阳、扶正固本、提高免疫力、促进病体康复等功效，可用于治疗老年慢性支气管炎及各种体虚症[1]。为了有效地控制药品质量，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定其中淫羊藿苷含量，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型自动高效液相色谱仪（美国），包括Agilent 1100型可变波长检测器（VWD），Agilent 1100 泵系统（PMP），Agilent化学工作站；梅特勒AG135型电子天平；KQ-600B型超声波清洗器（昆山）。淫羊藿苷对照品（供含量测定用，批号为 1110737-200414，中国药品生物制品检定所）；老年咳喘片（河南羚锐制药有限公司）；乙腈为色谱醇（天津），水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：HC-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈 -水（25∶75）；检测波长：270 nm；柱温：35 ℃；流速：0.8 mL/min；进样量：10 μL。按上述色谱条件测定，以淫羊藿苷色谱峰计算的理论塔板数为10 000，相邻峰的分离度大于2.0。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取样品细粉0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加乙醇至刻度，超声处理（功率 80 W，频率 40 kHz）25 min，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。精密称取淫羊藿对照品，加甲醇溶解成每1 mL含7.2 μg的溶液，作为对照品溶液。按处方中药味的比例及其工艺自制不含淫羊藿的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇溶解[2]成每1 mL含72.0 μg和7.2 μg的溶液。分别精密吸取对照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，按上述色谱条件进行测定，以对照品进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=5.492 6 X-15.943，r=0.999 7。结果表明，淫羊藿苷进样量在0.014 4～0.864 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

空白干扰试验：取2.2项下3种溶液，依法测定。结果在与淫羊藿苷对照品溶液相同保留时间处未显示色谱峰，故认为阴性样品对测定无干扰（图1）。

稳定性试验：取同一供试品溶液，每隔一定时间进样测定1次峰面积积分值。结果的 RSD=0.5%（n=5），表明供试品溶液在24 h内相对稳定。

精密度试验：精密吸取对照品溶液，依法重复进样5次，测定其峰面积。结果的 RSD=0.4%（n=5），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批（批号为080328）样品5份，依法测定。结果平均含量为0.452 mg/g，RSD=0.9%（n=5）。

加样回收试验：称取已知含量的样品约0.5 g，精密称定，分别精密加入高、中、低3个水平的对照品溶液各2分，同供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。