高效液相色谱法测定骨炎灵片中甘草酸含量

王 雁，纪 红，朱志杰

（通化金马药业集团股份有限公司，吉林 通化 134001）

骨炎灵片收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第五册）》，由当归、黄芪、地黄、川芎、菟丝子等14味中药组方，具有补养气血、清热解毒、消肿止痛的功效，用于治疗骨髓炎、开放骨折感染及“虚人痈疡”。原质量标准未制订含量测定项，为有效控制药品质量，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对方中甘草的甘草酸进行了含量测定，报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪；BS124S十万分之一电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；AE240型分析天平（梅特勒-托利多仪器＜上海＞有限公司）。骨炎灵片（通化金马药业集团股份有限公司）。甘草酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0731-9704，供含量测定用）；水为Milli-Q经0.22 μm膜净化的超纯水，其他试剂均为分析纯试剂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DiamonsilC18柱（250mm ×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇 -0.2 mol/L 乙酸铵溶液 -冰醋酸（67 ∶33 ∶1）；流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm；柱温：30℃。理论塔板数按甘草酸单铵盐峰计应不小于2 000。

2.2 溶液制备

取甘草酸单铵盐对照品约10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1 mL含甘草酸单铵盐对照品0.2 mg，折合甘草酸为 0.195 9 mg）。取样品适量，除去包衣，精密称定，研细，取约 3 g，精密称定，置 50 mL量瓶中，加流动相约45 mL，超声处理（功率 250 W，频率 20 kHz）30 min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液[1]。取不含甘草的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

阴性对照试验：在上述色谱条件下，将2.2项下所制得的3种溶液进样测定，色谱图见图1。可见，在与甘草酸对照品色谱峰相同位置上，供试品溶液有色谱峰出现，色谱峰与其相邻峰能完全达到基线分离，阴性对照品溶液在甘草酸峰相应位置上无干扰。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液（0.202 mg/mL）2，4，8，12，20 μL进样，按拟订的色谱条件测定，以色谱峰峰面积值为纵坐标、甘草酸进样量为横坐标作图，得回归方程 Y=469 531.104 1 X-265.736 9，r=0.999 98（n=5）。结果表明甘草酸进样量在0.404～4.04 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定甘草酸峰面积积分值。结果的 RSD=1.71%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，4，8，12，24 h时进样测定甘草酸峰面积。结果的 RSD为1.53%（n=5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：精密量取6份已知甘草酸含量的样品1.5 g，分别精密加入对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率。结果见表1。

表1 甘草酸加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

根据上述色谱条件，依法测定样品3批，每批测定2次。结果3批样品中甘草酸的含量分别为1.53，1.52，1.55 mg/片（n=2）。

3 讨论

分别考察了用甲醇超声30 min和加流动相超声30 min两种提取方法，结果以前者测定结果的回收率高，且分离效果较好。取甘草酸铵对照品的甲醇-0.2 mol/L乙酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）溶液，经紫外可见分光光度计扫描，并参考2005年版《中国药典（一部）》甘草的含量测定[1]，规定测定波长为250 nm。

本试验结果表明，HPLC法测定骨炎灵片中甘草酸的含量，方法简便、灵敏、重现性好，适宜在生产中应用。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：59.