小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量测定

2010-06-01唐德智

中国药业 2010年6期

唐德智，莫迎

（广西壮族自治区南宁食品药品检验所，广西南宁 530001）

小儿健脾开胃合剂由黄芪、白术、山药、大枣、山渣、莲子、枸杞子等组方，具有益气健脾功效，用于治疗脾胃虚弱所致的小儿厌食症、消化不良，并可促进儿童对钙的吸收。君药黄芪中的黄芪甲苷为主要有效成分之一，原质量标准采用薄层扫描法测定其含量，方法烦琐，结果重现性差。本试验参考有关文献[1-3]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量，为进一步控制产品质量提供了依据，报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Softa Model 400型ELSD检测器；WML色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公司）；BP211D型电子天平（瑞士梅特勒）。黄芪甲苷对照品（中国药

品生物制品检定所，批号为0781-200109，供含量测定用）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；小儿健脾开胃合剂（广西欢宝药业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Shim-pack VP-ODS柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -水（34 ∶66）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；ELSD 参数：漂移管温度60℃，雾化管温度35℃，气体流速为2.0 mL/min；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

取经五氧化二磷减压干燥24 h的黄芪甲苷对照品约15 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。取样品适量，混匀，精密量取20 mL，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20 mL，弃去氨液，正丁醇液再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量称取除黄芪外的其余药材，按制备工艺制成缺黄芪的阴性样品，取适量，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密吸取对照品贮备液 0.5，1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释成不同质量浓度的对照品溶液，按上述色谱条件分别进样20 μL，测定峰面积，以对照品进样量的常用对数值为横坐标、峰面积积分值的常用对数值为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y=1.567 2 X+12.711，r=0.999 6（n=6）。结果表明，黄芪甲苷进样量在0.61～6.13 μg范围内与峰面积线性关系良好。

专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定。结果供试品溶液色谱中，均有与黄芪甲苷保留时间相同的色谱峰，且与相邻杂质峰能完全分离，阴性对照品溶液色谱图中则无此峰，见图1。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，依法重复进样6次，测定并记录黄芪甲苷峰面积。结果的 RSD为1.37%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，1，2，4，6，8，12，14 h时依法进样测定。结果峰面积的 RSD为1.81%（n=8），表明供试品溶液在14 h内稳定。

重现性试验：取同一批（批号为20060702）样品6份，每份精密量取20 mL，依法制备供试品溶液并测定。结果黄芪甲苷的平均含量为 0.045 mg/mL，RSD 为 1.79%（n=6）。

加样回收试验：精密吸取已知含量的同一批（批号为20060702）样品10 mL，共6份，分别精密加入对照品溶液（0.231 mg/mL）1.0，2.0，3.0 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，用外标两点法对数方程计算含量。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取6批样品依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算含量。结果批号为 20050201，20060201，20060701，20060702，20060801，20060901的样品中黄芪甲苷含量分别为0.042，0.056，0.065，0.045，0.048，0.063 mg/mL（n=3）。