E-cadherin和Ezrin在大肠癌组织中的表达及意义

张 伟,刘媛媛,徐东来,刘东威,张学义

(抚顺矿务局总医院病理科,辽宁抚顺113008)

上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)是介导同质细胞间连接的粘附蛋白,主要分布于上皮组织中。当E-cadherin表达异常时,细胞间粘附能力下降,促进肿瘤的侵袭和转移。埃兹蛋白(Ezrin)是一种细胞膜与细胞骨架之间的连接蛋白,近年的研究发现它与肿瘤关系密切,被认为是肿瘤转移的关键调节因子[1],Ezrin在肿瘤组织中的表达异常,提示Ezrin在肿瘤的侵袭和转移机制中发挥重要的作用。目前,联合检测大肠癌中E-cadherin和Ezrin表达的研究较少,本实验采用免疫组织化学SP法检测大肠癌组织中E-cadherin和Ezrin的表达,探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 取2005年至2008年本院手术切除的大肠癌癌组织和癌旁正常大肠组织的存档蜡块62例,患者男36例,女26例,年龄 36-78岁,平均 52岁,术前均未行放化疗。高分化腺癌17例、中分化腺癌20例,低分化腺癌22例;未及浆膜层34例,浸润浆膜层28例;无淋巴结转移40例,有淋巴结转移22例。所有标本均经4%中性甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋、切片。

1.2 试剂与方法 E-cadherin和Ezrin抗体均为鼠抗人单克隆抗体,购自福州迈新生物技术开发公司,采用免疫组织化学SP法对大肠癌组织中E-cadherin和Ezrin进行检测,按试剂盒说明书操作,用已知阳性的切片做阳性对照,PBS代替一抗为阴性对照。

1.3 结果判定 E-cadherin在细胞膜或细胞质表达,呈均匀的棕黄色线状。判断标准:(-),无瘤细胞着色,＜10%且染色强度明显减弱;(+),着色瘤细胞数＞10%且染色强度与对照相近或稍有减弱[2]。Ezrin在细胞质内表达呈棕黄色颗粒,按染色强度和阳性表达细胞数比例,参考Mathew等[3]的分级标准:(—),无表达;(+),着色瘤细胞＜50%或染色较浅;(++)着色瘤细胞＞50%且染色较深。(+)和(++)均视为阳性表达。

1.4 统计学分析 应用SPSS13.0统计软件包进行统计,采用卡方检验(χ2)及Spearman等级相关分析,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 E-cadherin和Ezrin在大肠癌组织和癌旁正常组织中的表达 E-cadherin在正常大肠组织中上皮细胞膜呈均匀致密表达,在大肠癌组织中癌细胞的细胞膜或细胞质呈弥漫或灶状表达(图1),E-cadherin在大肠癌组织中的表达阳性率为59.68%,低于癌旁正常大肠组织的阳性表达率90.32%,差异有统计学意义(χ2=15.52,P＜0.05)。Ezrin主要定位于细胞质,呈灶状至弥漫表达(图2),Ezrin在大肠癌组织中的表达阳性率为74.19%,高于癌旁正常大肠组织的阳性表达率16.13%,差异有统计学意义(χ2=42.20,P＜0.05),结果见表1。

表1 E-cadherin和Z在大肠癌与癌旁正常组织中的表达

2.2 E-cadherin和Ezrin的表达与临床病理因素的关系 E-cadherin和Ezrin的表达均与大肠癌患者的性别、年龄无明显相关性(P＞0.05);E-cadherin和Ezrin的表达均与大肠癌浸润深度、有无淋巴结转移有关,浸润达浆膜组和浸润未及浆膜组中,E-cadherin和 Ezrin的表达差异均有统计学意义(P＜0.05),有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中,E-cadherin和Ezrin的表达差异均有统计学意义(P＜0.05);Ezrin的表达还与大肠癌分化程度有关,随着大肠癌分化程度的降低,Ezrin的阳性表达率增高,差异有统计学意义(P＜0.05),结果见表2。

表2 E-cadherin和Ezrin的表达与临床病理因素的关系

2.3 E-cadherin和Z在大肠癌组织中表达的相关性Spearman等级相关分析显示,E-cadherin和 Ezrin在大肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.26,P＜0.05),结果见表3。

图1 大肠中分化腺癌E-cadherin阳性表达SP法×100

图2 大肠中分化腺癌Ezrin阳性表达SP法×100

表3 E-cadherin和Ezrin在大肠癌组织中表达的相关性

3 讨论

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要的生物学特征,是致患者死亡的主要因素,大约90%的恶性肿瘤患者死于肿瘤转移[4]。侵袭和转移是一个复杂的、多环节、多步骤的过程,大致的步骤包括:原发灶肿瘤细胞破坏基底膜进入间质并接触脉管,破坏脉管内皮及基底膜,进入其中并且存活,然后肿瘤细胞在不同部位穿出脉管,在组织中存活、增殖并形成转移灶。

3.1 E-cadherin的表达 E-cadherin分子量为124 KD,单链I型跨膜糖蛋白,广泛存在于上皮组织中,由约720-750左右的氨基酸构成的糖蛋白分子,是最重要也是研究最深入的一类钙粘附蛋白,E-cadherin基因定位于I 6号染色体q22.1,是一个重要的肿瘤转移抑制基因,于1995年由Berx首先克隆[5]。E-cadherin是维护上皮细胞形态和结构完整性和极性的重要分子。由于E-cadherin的表达降低,使同质性的细胞间的粘附性减小,肿瘤细胞之间不能保持紧密的接触,肿瘤细胞脱离原发灶,侵透基底膜,并侵及邻近组织和脉管,造成肿瘤的侵袭和转移。本研究发现E-cadherin的表达阳性率在大肠癌组织中低于癌旁正常大肠组织,差异有统计学意义,提示E-cadherin的低表达与大肠癌的发生、发展有关。E-cadherin的表达阳性率在大肠癌浸润浆膜层组、有淋巴结转移组均低于未及浆膜层组、无淋巴结转移组,差异有统计学意义,提示E-cadherin的低表达与大肠癌的侵袭、转移有关,与[6]等的研究结果相一致。总之,E-cadherin的低表达造成同质细胞间粘附功能下降或缺失,在大肠癌的侵袭和转移中起重要作用,E-cadherin的表达对大肠癌患者判断预后有重要意义。

3.2 Ezrin的表达 Ezrin是一种膜-细胞骨架连接蛋白(又称 cytovillin或 p81),2004年,由 Yu等[7]和Khanna等[8]共同发现的。属 ERM(Ezrin、radixin、moesin)家族成员,在细胞的运动、迁移、有丝分裂等生理功能中发挥重要作用。Ezrin可通过与粘附分子作用如:CD44、E-cadherin、整合素等,来改变细胞间的粘附作用,亦可参与多种信号途径如:Rho[9]、PDGF等[10]信号的传导,从而促进肿瘤的发生和发展。本研究结果发现Ezrin的表达阳性率在大肠癌组织中高于癌旁正常大肠组织,差异有统计学意义,提示Ezrin的高表达与大肠癌的发生、发展有关。Ezrin的表达阳性率在大肠癌浸润浆膜层组、有淋巴结转移组均高于未及浆膜层组、无淋巴结转移组,差异有统计学意义。Ezrin的表达阳性率随着大肠癌分化程度的降低而增高,差异有统计学意义。提示Ezrin的低表达与大肠癌的发生、发展、侵袭和转移有关,与柳福海[11]、翟云芝[12]等的研究结果相一致。大肠癌组织中检测Ezrin,对于评价肿瘤的恶性程度预测转移、判断预后有重要的参考价值。

3.3 E-cadherin与Ezrin的关系 Ezrin的表达增强使E-cadherin向细胞内聚集,而在细胞表面的E-cadherin减少,E-cadherin的功能遭到破坏,一方面影响细胞间的粘附性,使细胞间连接松散,促进肿瘤的侵袭和转移,另一方面使E-cadherin失去了对CD44活性的调节,无法抑制CD44介导的肿瘤转移。Ezrin还有使细胞间隙增宽的作用,使细胞形成伪足,运动能力增强,侵袭力亦增强[10]。本实验显示,在大肠癌组织中E-cadherin的表达与Ezrin的表达呈负相关。

综上所述,E-cadherin和Ezrin与大肠癌的侵袭和转移密切相关,二者联合检测,可以作为评估大肠癌预后的指标。

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