HPLC测定复方达克罗宁薄荷脑润肤止痒水中达克罗宁的含量

李 成,颜 晗,罗意文,曾繁涛,路 伟,陈连剑*

(1.深圳市福田人民医院,广东 深圳 518033;2.深圳市药检所,广东 深圳 518057)

盐酸达克罗宁为局部麻醉药,对皮肤有止痛、止痒及杀菌作用。复方达克罗宁薄荷脑润肤止痒水是我院制剂室自行研制的一种外用溶液剂,以达克罗宁和薄荷脑为主药,酒精和甘油为辅药,用于治疗我院皮肤科门诊日益增多的秋冬季节的皮肤干燥、瘙痒患者,尤其是日益增多的中老年患者。《复方达克罗宁薄荷脑润肤止痒水的研制》被列为 2009年深圳市科技计划项目。2010年 4-5月,本研究参考国内外有关文献[1-5],并根据盐酸达克罗宁的理化性质,建立了高效液相色谱法测定复方达克罗宁薄荷脑润肤止痒水中达克罗宁的含量,该方法灵敏、准确、重现性好,可作为本品的质量控制方法。

1 药物与仪器

1.1 仪器 岛津 LC-20ADHPLC仪(SPD-20A UV检测器,CTO-10ASVP柱温箱,phenomenex lune色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),SIL-20AL(自动进样器),UV-2201紫外分光光度计(日本岛津),KQ5200DB数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司),AG285电子天平(瑞士梅里达)。

1.2 药物 盐酸达克罗宁(杭州良金生物科技,批号:2091203,含量:99.9%),复方达克罗宁薄荷脑润肤止痒水(本院自制),乙腈(色谱纯,天津四友)。其他试剂均为分析纯。所有试剂和溶液使用前均经 0.45μm微孔滤膜过滤。

2 方 法

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 精密秤取盐酸达克罗宁 20.13 mg,置 100 ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为 0.2013 mg/ml的标准品溶液。

2.1.2 样品溶液制备 精密量取样品 1 ml,置100 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。

2.1.3 空白样品溶液制备 按处方比例秤取除盐酸达克罗宁外的其他的药品和辅料,按该制剂制备工艺制成空白制剂,其余按样品溶液的制备项下方法进行。

2.2 检测波长 精密量取对照品溶液 3 ml至10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,以流动相为空白,在 400-190 nm波长范围内扫描,结果盐酸达克罗宁在 279 nm处有最大吸收(见图 1),薄荷脑及辅料无干扰,故选择 279 nm作为检测波长。

图1 盐酸达克罗宁紫外吸收光谱

2.3 色谱条件及系统适用性实验 色谱柱:Phenomenex lune(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙睛 -水 -三乙胺 -冰醋酸(55∶43.5∶1.0∶0.5);流速:0.5ml/min;检测波长:279 nm;进样量:10 μl;柱温 30℃。理论塔板数不低于3 000,主峰与相邻色谱峰的分离度不小于 1.5。色谱图见图 2。

图2 空白洗剂与盐酸达克罗宁对照品及样品色谱图A.空白洗剂 B.盐酸达克罗宁对照品 C.样品

2.4 标准曲线 精密量盐酸达克罗宁对照品溶液 1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml,分别置 10 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。分别取 10μl进样,各浓度进样 3次,以浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归。得回归方程:A=65692.96C—40105.4,r=0.999 5(n=6)。结果表明,盐酸达克罗宁浓度在 20.13-120.78μg/ml范围内与吸收度呈现良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取同一对照品溶液,连续进样 5次,每次 10μl,记录峰面积,计算 RSD=1.4%(n=5)表明方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 取含量测定项下的样品溶液,在 12 h内每 2 h测定一次,峰面积分别为 3 239 821,3 108 705,3 219 240,3 192 567,3 157 254,3 109 251,平均为 3 171 140,RSD为 1.8%,结果表明该方法在 12 h内稳定。

2.7 加样回收率试验 精密量取已知含量的同一批供试品溶液 5 ml各 6份,置 10 ml量瓶中,分别加入 60%、100%、140%的盐酸达克罗宁,加流动相稀释至刻度(相当于 80%、100%、120%),按“含量测定”项下的方法,依法测定,按上述回归方程计算含量,计算加样回收率,结果见表 1。

表1 回收率试验结果(n=6)

2.8 样品测定 精密量取1 ml,置 100 ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,取稀释液 10μl注入高效液相色谱仪,记录色谱图;另精密秤取盐酸达克罗宁对照品适量,用流动相溶解并稀释成约 50 μg/ml,同法测定。按外标法以峰面积计算出样品中盐酸达克罗宁的含量,结果见表 2。

表2 含量测定结果(n=2)

2.9 空白试验 按处方秤取除达克罗宁外的其他成份,依法制成空白洗剂,按“含量测定”项下的方法,依法测定,结果峰面积为 0,表明其他成份不会对试验结果产生干扰。

3 讨 论

本实验色谱条件设定流速为 0.5 ml/min,保留时间可达到7.363min,如设定为.0 ml/min,则保留时间小于 5 min;进样量如为 20μl,则样品峰太高,进样量为 10 μl,峰高适宜。在本实验条件下,理论塔板数为9305,拖尾因子为 1.2(采用峰面积法),满足分析要求。实验表明,采用高效液相色谱法测定复方达克罗宁薄荷脑润肤止痒水中达克罗宁的含量,方法简便、快速、准确,适用于制剂的快速分析。

[1] 杨跃龙.RP-HPLC法测定复方达克罗宁软膏中主药的含量[J].中国药房,2008,19(4)∶294.

[2] 郭宇鹏,赵 青.HPLC法测定芩宁软膏中黄芩苷及盐酸达克罗宁的含量[J].齐鲁药事,2007,26(10)∶597-599.

[3] 龚士学,王 勇,周 琳.达克罗宁氯己定硫软膏中盐酸达克罗宁的含量测定[J].中国药业,2007,16(17)∶20-21.

[4] 郭 珉,李珠华,赵远征,等.反相高效液相色谱法测定复方达克罗宁搽剂中二组分的含量[J].医药导报,2006,25(5)∶469.

[5] 王泽明.当代结构药物全集[M].北京:科学技术出版社,1993∶1 777-1 778.