液相色谱法测定食品中合成着色剂

朱肖磊

摘 要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二极管阵列检测器）测定，外标法定量。结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。

关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取

Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid Chromatography

ZHU Xiaolei

（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were

1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.

Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction

着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。本文用乙醇氨水溶液提取11种食品中合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用高效液相色谱仪测定（配有二极管阵列检测器），使用外标法定量[1-2]。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器），安捷伦；天平、固相萃取装置、氮气浓缩装置、天平、pH计。

1.2 材料与试剂

柠檬黄、喹啉黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红、亮蓝标准物质，

1 000 μg·mL-1；靛蓝标准物质，1 000 μg·mL-1；甲醇，色谱纯；石油醚，沸程30～60 ℃；无水乙醇；氨水，含量20%～25%；乙酸铵，色谱纯；甲酸，含量98%。

1.3 实验方法

1.3.1 溶液配制

氨水乙醇溶液：700 mL乙醇、4 mL氨水，溶于1 L水。5%甲醇水溶液：一定量甲醇用水稀释定容至1 L。

1.3.2 样品处理

称取2 g充分混匀的液体试样于50 mL离心管中，加入50 mL氨水乙醇溶液，涡旋1 min，5 000 r·min-1离心5 min，取上清液10 mL，50 ℃氮吹至3 mL左右，分3次加入10 mL的5%甲醇水溶液，得到待净化液。

1.3.3 试样净化

活化固相萃取柱的活化方法用甲醇和水各

6 mL，依次活化，将柱体保持湿润。立即将待净化液以2～3 s/滴的流速加载到固相萃取柱上。用

6 mL 2%甲酸水溶液和甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽2 min至柱体近千。用2%氨化甲醇溶液6 mL洗脱，分两次加入，每次3mL，流速低于

2～3 s/滴，收集洗脱液，于50 ℃氮气浓缩至近千，准确加入pH=9.0的乙酸铵缓冲溶液2 mL溶解，溶液用针筒过滤器，孔径0.45 μm的滤膜过滤，将最初的2～5滴滤液舍弃，待测液为续滤液。

1.3.4 标准系列工作液的配制

靛蓝标准储备液（1.0 mg·mL-1）：准确移取一定量靛蓝标准物质于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，得到浓度为1.0 mg·mL-1的靛蓝标准储备液，现用现配。

混合标准中间液（50.0 μg·mL-1）：吸取柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄和赤藓红标准物质溶液

1 000 μg·mL-1以及靛蓝标准储备液（1.0 mg·mL-1）各5.00 mL于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液（各合成着色剂浓度均为

50.0 μg·mL-1），现用现配。

标准系列工作液：精密移取一定量混合标准中间液（50.0 μg·mL-1），配制成浓度分别为0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1和10.0 μg·mL-1的工作液。以标准系列工作液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

1.3.5 仪器条件

色谱柱：BetasilTM C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），

设置柱温箱温度为30 ℃，进样体积10 μL，二极管阵列检测器波长范围（400～800 nm），其中柠檬黄、喹啉黄检测波长为415 nm，新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红检测波长为520 nm，靛蓝、亮蓝检测波长为610 nm。洗脱条件见表1。

1.3.6 样品测试

将试样注入液相色谱中，按上述仪器条件检测，待测液中各物质浓度的计算公式为

（1）

式中：X为试样中合成着色剂的含量，g·kg-1；c为由曲线计算得到的待测液中合成着色剂浓度，μg·mL-1；V1为净化洗脱后的样品最终定容体积，mL；V2为提取液体积，mL；V3为用于净化分取的样品提取液的体积，mL；m为试样的取样量，g；1 000为换算系数。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

11种着色剂的标准曲线方程、线性范围、相关系数见表2。

2.2 检出限和定量限

称取空白样品2 g，加入一定量混合标准物质，得到浓度分别为0.3 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的苋菜红、诱惑红、亮蓝1、亮蓝2、酸性红、靛蓝，浓度分别为0.5 mg·kg-1和1.5 mg·kg-1的柠檬黄、新红、胭脂红、日落黄、喹啉黄1、喹啉黄2、喹啉黄3、喹啉黄4、赤藓红[3-4]。

按照前处理过程制备样液，上机进行实测，分别验证不同着色剂的信噪比是否满足方法要求，验证结果见表3、表4。由表3、表4可知，柠檬黄、新红、胭脂红、日落黄、喹啉黄1、喹啉黄2、喹啉黄3、喹啉黄4、赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝1、亮蓝2、酸性红、靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。

2.3 加标回收率及精密度

为了评价方法的正确度和重复性，在空白样品中进行3个浓度水平（2.5 mg·kg-1、5.0 mg·kg-1、

50.0 mg·kg-1）的加标回收实验，每个浓度水平进行6次重复实验，按照标准方法进行前处理和测定，得出加标回收率及相对标准偏差[5]（见表5）。由表5可知，11种着色剂的回收率和相对标准偏差均满足方法分析要求。

2.4 实际样品分析

以配制酒作为实际样品进行检测，实际样品中11种着色剂均未检出。

3 结论

本文建立了一种使用液相色谱同时测定食品中的11种合成着色剂含量的方法。该方法简化了样品预处理步骤，重复性好、检出限低，加标回收率也满足分析方法的测定要求，证明本方法可用于食品中合成着色剂的检测。

参考文献

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[2]张海神，周瑞铮，莫淑梅.高效液相色谱法测定巧克力食品中7种合成着色剂的研究[J].农产品加工，2022（11）：59-61.

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