胶体层析法与酶联免疫吸附试验筛查人类免疫缺陷病毒抗体在艾滋病诊断中应用价值分析

袁小多 宋冬梅 谢海珍 袁珊珊 饶海琴

【摘要】 目的 分析对比胶体层析法与酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）筛查人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗体在艾滋病中的诊断价值。方法 选取2019年1月—2022年12月于高安市疾病预防控制中心行艾滋病筛查的13 777人为研究对象，采集研究对象的空腹静脉血，对空腹静脉血均施以胶体层析法、ELISA與免疫印迹法行HIV抗体检测，以免疫印迹法为检查的“金标准”，统计对比胶体层析法、ELISA在艾滋病中的诊断效能。结果 13 777名行艾滋病筛查检测人员中，免疫印迹法共检测出37例HIV抗体阳性，ELISA共检测出36例HIV抗体阳性，胶体层析法共检查出29例HIV抗体阳性;以免疫印迹法为检查的“金标准”，ELISA检测的灵敏度为94.59%（35/37）、准确度为99.98%[（35+13 739）/13 777]、阴性预测值为99.99%（13 739/13 741），高于胶体层析法的72.97%（27/37）、99.91%[（27+13 738）/13 777]、99.93%（13 738/13 748），差异有统计学意义（P<0.05）;二者的特异度、阳性预测值相比，差异无统计学意义（P>0.05）。Kappa检验显示，ELISA检查艾滋病的结果与“金标准”检查结果的一致性极好（Kappa值=0.959，P<0.001）。结论 与胶体层析法相比，酶联免疫吸附试验能够更有效

地检查出阳性HIV抗体，进而提高艾滋病的早期诊断率，临床应用价值较高，值得推广应用。

【关键词】 艾滋病;人类免疫缺陷病毒抗体;胶体层析法;酶联免疫吸附试验

文章编号：1672-1721（2024）05-0107-03     文献标志码：A     中国图书分类号：R446

艾滋病是因HIV感染而诱发的机体免疫功能缺陷。未经治疗的患者在疾病晚期易并发各种严重感染与恶性肿瘤，最终导致死亡[1-2]。艾滋病为临床常见的传染病，该病的传播途径以性接触传播较为多见，尤其是男性与男性之间的同性性传播[3-4]。现阶段，临床对于艾滋病尚无有效的治疗措施，病死率较高，严重阻碍人类社会的发展。因此，对高危群体施以及时筛查，尽早判断他们是否出现HIV感染，以指导临床施以个体化的治疗措施，对于控制艾滋病患者的病情进展、延长其生存周期与控制艾滋病流行态势至关重要[5]。HIV抗体测定结果为艾滋病患者的重要诊断依据，现阶段临床检测HIV抗体的措施具有多样性，如胶体层析法、ELISA等，但何种方法对HIV抗体检查诊断效果更好还需进一步探究。基于此，本研究以2019年1月—2022年12月于高安市疾病预防控制中心行艾滋病筛查的13 777人为研究对象，以免疫印迹法为检查的“金标准”，分析对比胶体层析法、ELISA的具体诊断效能，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月—2022年12月于高安市疾病预防控制中心行艾滋病筛查的13 777人为研究对象，所有研究对象中男性7 964人，女性5 813人;年龄31～62岁，平均年龄（48.75±2.49）岁;文化程度，小学2 789人，中学8 637人，专科及以上2 351人;体质量指数18.4～27.1 kg/m2，平均体质量指数（25.16±0.48）kg/m2。研究对象均对本研究知晓，并自愿签订知情同意书。

纳入标准：娱乐场所从业人员;无肺结核等其他传染性疾病;研究对象均具有较为优良的依从性;性伴侣较多。

排除标准：存在精神疾病者;合并全身性感染者;伴有凝血功能、免疫系统异常者;存在血液系统疾病者;肝肾等脏器功能重度受损者;意识障碍，无法行正常交流者;已在进行免疫治疗者;合并严重的脑器质性疾病者。

1.2 方法

标本采集：所有研究对象入院后，采集研究对象次日清晨晨起时的5 mL静脉血储存于无菌试管中，对血液标本行离心处理，速率为3 000 r/min，离心10 min，取得分离血清后，即刻送检或者放于-80 ℃环境下待检。

检测方法：（1）ELISA。选择抗原为HIV1-2抗原包被的96孔微孔板，并对标本行编号存储以选取与之相对的加样孔开展检测;每份标本在复溶后加样100 μL;封板后在37 ℃条件下行1 h的孵育;以自动洗板机（深圳市汇松科技有限公司，型号为P10-960，出厂编号A22004004）行洗板，连续开展6次，在标本干燥后于每个反应孔中放入100 μL底物，行避光反应15 min，然后在各反应孔中放入50 μL终止液以终止反应;以自动酶标仪[安图实验仪器（郑州）有限公司，型号PHOMO，出厂编号3011002410]行吸光度检测，波长设定为450 mm。检测人员以ELISA相关参考值作为参照，对测定结果进行评判。将空白孔数据调节为0，测定每孔的吸光度（optical density，OD）值，以OD值作为抗体水平，OD值>截断值≥1判定为阳性，相反则为阴性。（2）胶体层析法。将50 μL复溶后的血液标本放入试剂卡加样处，以免疫层析原理开展测定;加样之后放置15 min，待标本中存在HIV1+2抗体时，鼠胶体-抗原会同HIV1+2抗体结合，出现抗原重组情况，且会被固相包被，以此产生红线;待1 h后由检测医师读取结果。检测区、对照区均存在紫红色条带为阳性，仅对照区存在紫红色条带为阴性。（3）免疫印迹法。复溶后对血清以1∶100占比行稀释处理，将稀释后样本加入到硝酸纤维素膜上，于37 ℃条件下震荡。当血清与膜条包被的HIV1+2条带相互结合时，表明血清内具有HIV1+2抗体。此时检测医师再加入BCIP/NBT底物，发生紫褐色产色反应。至少2条膜带与p24带同时出现为阳性，未见HIV抗体特异性条带为阴性。全部检测操作均严格依据相应说明书开展，持续进行7次，以保障检测结果的可信度。

1.3 观察指标

分析对比胶体层析法、ELISA在艾滋病中的诊断效能，以免疫印迹法为检查“金标准”。阴性预测值=真阴性/（假阴性+真阴性）×100%。特异度=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%。准确度=（真阳性+真阴性）例数/总例数×100%。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%。阳性预测值=真阳性/（真阳性+假阳性）×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对本次研究数据进行分析，计数资料以百分比表示，行χ2检验，计量资料以x±s表示，行t检验，一致性以Kappa检验（Kappa值>0.75表明一致性极好，Kappa值0.40～0.75表明一致性较为理想，Kappa值<0.40表明一致性差），P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

13 777名研究对象内，免疫印迹法共检测出37例HIV抗体阳性，ELISA共检测出36例HIV抗体阳性，胶体层析法共检测出29例HIV抗体阳性;以免疫印迹法为检查的“金标准”，ELISA检测的灵敏度、准确度、阴性预测值高于胶体层析法法，差异有统计学意义（P<0.05）;二者的特异度、阳性预测值相比，差异无统计学意义（P>0.05）。Kappa检验显示，ELISA检查艾滋病的结果与“金标准”检查结果的一致性极好（Kappa值=0.959，P<0.001）。胶体层析法、ELISA在艾滋病中的检出情况和诊断效能见表1、表2。

3 讨论

艾滋病为临床常见的传染病之一[6]。近年来，因人们性观念的开放，艾滋病的患病人数呈逐年上升趋势。该病的病死率较高，艾滋病是15～49岁人群的主要致死疾病之一[7]。HIV感染是艾滋病的唯一病因。HIV感染者可数年不出现特异性表现，而一旦出现明显临床症状则极可能已处在伴发严重感染与肿瘤时期，进而对患者的生命安全造成威胁[8-9]。因此，对艾滋病高危人群进行定期的HIV抗体检查，对于控制患者病情、病毒传播具有重要作用。

HIV抗体检测结果的准确与否与患者的治疗和预后具有紧密联系，选取迅速有效的HIV抗体检测方法提升HIV抗体的检出精准度至关重要。免疫印迹法为目前临床检查HIV抗体的“金标准”，存在较高的检测准确度、灵敏度，但该方法检查所需费用较高，无法作为大范围的HIV抗体筛查常规措施，故临床运用较为受限。因此，寻找一种更为快速、简便的检查措施成为临床HIV抗体检测的重点。胶体层析法为HIV抗体初筛的常用检测手段，是一种运用HIV抗体与硒胶体-抗原结合后被合成肽、重组抗原捕捉固定、显色的原理，以测定HIV抗体的检查方法，具有检查费用低、操作简便等优势，然而这种方法对于脂血、溶血标本的测定会影响结果的判读，故无法满足临床所需。

本研究结果显示，13 777名行艾滋病筛查检测人员内，免疫印迹法共检测出37例HIV抗体阳性，ELISA共检测出36例HIV抗体阳性，胶体层析法共检查出29例HIV抗体阳性。以免疫印迹法为检查的“金标准”，ELISA检测的灵敏度为94.59%（35/37）、准确度为99.98%[（35+13 739）/13 777]、阴性预测值为99.99%（13 739/13 741），高于胶体层析法法的72.97%（27/37）、99.91%[（27+13 738）/13 777]、99.93%（13 738/13 748）。Kappa检验显示，ELISA检查艾滋病的结果与“金标准”检查结果的一致性极好（Kappa值=0.959，P<0.001），提示ELISA在HIV抗体筛查中效果显著，可提高疾病的检出准确度。分析原因为ELISA可通过酶催化底物反应的放大效应提高抗原抗体反应的灵敏度，进而提升HIV抗体阳性检出精准性[10-11]。ELISA具有优良的稳定性，不受标本的脂血、溶血等干扰，无需采取特殊设备开展检查，于室温下即可操作，且一次性能够测定多份样本，并经酶标仪读取数据，尽可能减小温度、标本处理等对检查结果的影响。ELISA不仅可用于少量的HIV抗体检查，还可运用于批量样本检查，其检查结果更为客观、准确[12]。ELISA检查的窗口期较短，有助于临床及时发现HIV早期感染。

综上所述，相较于胶体層析法，ELISA在HIV抗体的筛查中效果更为显著，可有效提高HIV抗体阳性检出率，有利于指导临床及时制定针对性的治疗措施，继而更有效控制艾滋病进程，抑制疾病的传播，临床应用价值较高。

参考文献

[1] MOMENZADEH A，SHUMWAY M，DONG B J，et al.Patterns of prescribing antiretroviral therapy upon discharge to psychiatry inpatients with HIV/AIDS at a large urban hospital[J].Ann Pharmacother，2021，55（4）：452-458.

[2] BASOULIS D，KOSTAKI E G，PARASKEVIS D，et al.Tracking missed opportunities for an early HIV diagnosis in a population of people living with HIV with known time of infection[J].Sex Transm Infect，2022，98（2）：79-84.

[3] 李虹泽，刘盼，唐莹，等.2例HIV抗体免疫印迹法确证阴性结果分析[J].武汉大学学报（医学版），2021，42（5）：841-845.

[4] 尤佳女，陈兵，许珂，等.疑似HIV感染者样本抗体筛查蛋白印迹试验及核酸检测结果分析[J].中国艾滋病性病，2021，27（7）：741-744.

[5] 叶晓芳，林小菊，黄妹，等.胶体层析法与酶联免疫吸附试验在HIV抗体检测中的应用价值分析[J].牡丹江医学院学报，2021，42（6）：79-81.

[6] MARTíNEZ L E，LENSING S，CHANG D，et al.Immune activation and microbial translocation as prognostic biomarkers for AIDS-related non-hodgkin lymphoma in the AMC-034 study[J].Clin Cancer Res，2021，27（16）：4642-4651.

[7] WAN T，LIU X，SU Y，et al.Biological differentiation of traditional Chinese medicine from excessive to deficient syndromes in AIDS：comparative microRNA microarray profiling and syndrome-specific biomarker identification[J].J Med Virol，2021，93（6）：3634-3646.

[8] 王万海，孟真，杨若男，等.免疫印迹法检测HIV抗体条带常见模式分析及在随访中的价值[J].检验医学，2020，35（2）：95-99.

[9] 马洁琼，邢文革，蒋岩.干血斑样本用于梅毒酶联免疫吸附试验检测方法的初步评价及应用研究[J].中国艾滋病性病，2020，26（5）：517-521.

[10] 石朝辉，薛秀娟，鄭艳丽，等.1 265例HIV快检可疑样本的酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验结果分析[J].中国卫生检验杂志，2022，32（15）：1891-1893，1897.

[11] 刘学政.酶联免疫吸附试验与胶体金法检测梅毒螺旋体抗体的结果比较[J].检验医学与临床，2022，19（23）：3283-3285.

[12] 钟秀琴.酶联免疫吸附法与胶体金法在筛查HIV感染中的意义[J].中国国境卫生检疫杂志，2020，43（6）：430-431.

（编辑：肖宇琦）

作者简介：袁小多，女，本科，主管技师。