TNF—α在强直性脊柱炎患者血清中的表达水平及临床意义探讨

彭琪彦

摘要：目的 通过检测强直性脊柱炎（AS）患者血清中TNF-α的表达水平，探讨其在AS发病中的临床意义。方法 分别测定AS活动期患者、AS非活动期患者及健康人血清TNF-α、CRP、ESR水平。结果 AS活动期患者、AS非活动期患者血清TNF-α水平均显著高于健康人，其差异有统计学意义（P<0.01）；AS活动期患者血清TNF-α水平显著高于AS非活动期患者，其差异有统计学意义（P<0.05），且TNF-α的表达与CRP呈正相关，与ESR无明显相关性。结论 TNF-α是与AS发病相关的细胞因子，可作为AS的实验室诊断指标以及AS活动期临床疗效的监测指标。

关键词：强直性脊柱炎；TNF-α ；酶联免疫吸附试验

The Expression of TNF-α in Patients Serum with Ankylosing Spondylitis and Clinical Significance

PENG Qi-yan

（Department of Clinical Laboratory，Wuhan University of Science and Technology Hospital， Wuhan 430070，Hubei，China）

Abstract：Objective To discuss the clinical significance of TNF-α by detecting the expression of TNF-α in patients with ankylosing spondylitis. Methods The levels of serum TNF-α， CRP， ESR were determined respectively in the AS active patients， the AS inactive patients and the healthy people. Results The contents of TNF-α in the AS active patients and the AS inactive patients were obviously higher compared with healthy people with statistical significanc（P<0.01）；TNF-α in the AS active patients were obviously higher than the AS inactive patients with statistical significanc（P<0.05）；the expression of TNF-αand CRP were positively correlated， but no obvious correlated with ESR. Conclusion The TNF-αis a cytokine associated with the occurrence of the AS， and it can be used as the laboratory diagnosis indicators， as well as the monitoring indicator of clinical curative effect in AS activity.

Key words：Ankylosing spondylitis；TNF-α；Enzyme-linked immunosorbent assay

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis， AS）是一种慢性进行性炎性疾病，主要累及中轴关节[1]，其主要症状表现为反复发作的腰痛、腰骶部僵硬、脊柱强直或畸形，该病起病隐匿且病程较长，容易误诊[2]。其具体发病机制目前仍未明确，可能与遗传、环境及免疫因素等有关，且临床上尚缺乏特异性治疗，仅依靠日常锻炼和一些药物缓解急性发作[3]。因此，探讨AS发病机制、早期诊断和及时治疗成为研究热点。肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）是体内炎症反应和一系列病理生理过程的重要递质，有学者认为，TNF-α是AS中介导炎症反应的重要细胞因子[4]，因此，本研究通过检测AS患者血清TNF-α水平，探讨其在AS病程中的临床意义，旨在为AS的发病机制和治疗提供实验依据。

1资料与方法

1.1一般资料 选取2015年3月～2016年6月在我院就诊的门诊及住院AS患者共62例，其中AS活动期患者32例，包括男22例，女10例，年龄20～49岁；AS非活动期患者30例，包括男21例，女9例，年龄21～54岁；62例AS患者中，HLA-B27阳性者59例，HLA-B27阴性者3例；另选取同期健康体检者40例作为正常对照，其中男28例，女12例，年龄20～55岁。三组受试对象性别构成及年龄比较差异无统计学意义，本研究经患者知情同意，该试验方案已经我院伦理委员会批准。

1.2纳入标准 根据1984年美国风湿病学会修订的纽约诊断标准[5]，确诊为AS。病情活动判断标准为强直性脊柱炎疾病活动指数（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index， BASDAI），BASDAI≥4为活动期，BASDAI<4为非活动期[6]。

1.3排除标准 排除妊娠或哺乳期女性、自身免疫性疾病、严重肝、肾、心血管疾病、恶性肿瘤、血液系统疾病、骶髂关节结核、致密性骨炎等。

1.4样本采集与处理 采样前所有对象均未进行生物治疗、关节内治疗及糖皮质激素治疗。三组对象均于清晨空腹抽取静脉血各4 ml于两支无添加剂真空采血管以及血沉管中，分别用于TNF-α、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）检测，待血液自行凝固，3000 rpm离心10 min，分离血清，于-70℃低温冰箱保存待测，ESR无需离心，混匀后直接检测。

1.5仪器与试剂 使用美国R&D公司TNF-α检测试剂盒（ELISA法），具体操作过程严格遵循实际说明书进行。反应终止后，在Rayto RT-6100酶标分析仪上分别于450 nm和570 nm处测OD值，并根据标准曲线计算出样本中TNF-α含量。CRP采用免疫比浊法，在日立7180全自动生化分析仪上检测；ESR在赛科希德S-100血沉仪上采用魏氏法检测。

1.6统计学处理 收集所有检测数据，计量数据以用x±s表示，采用SPSS13.0软件对数据进行处理，两两比较采用t检验，相关性采用Pearson直线相关分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1三组研究对象检验结果比较分析 与健康组比较，AS活动期与AS非活动期患者的TNF-α、CRP、ESR明显升高，差异有显著统计学意义（P<0.01）；与AS非活动期组比较，AS活动期患者的TNF-α、CRP、ESR明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2血清中TNF-α的表达与CRP、ESR的相关性分析 AS活动期患者、AS非活动期患者血清中TNF-α含量与CRP（r=0.624，0.612，P<0.05）呈正相关，而与ESR（r=0.125，0.128，P>0.05）无相关性。

3讨论

强直性脊柱炎是复杂的多基因遗传病，多种辅助性T淋巴细胞及细胞因子参与其发病[7]，现已明确的诊断指标是人类白细胞抗原B27（HLA-B27），调查显示，HLA-B27阳性者患AS的几率是HLA-B27阴性者的200-300倍[8]，但在少数AS患者HLA-B27仍呈阴性，因此对于AS发病机制的探讨，依然是广大学者的研究热点。

细胞因子是一类由免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的低分子量可溶性蛋白，具有免疫调节功能。有研究表明，不同自身免疫性疾病患者体内，细胞因子表达异常，各种细胞因子在疾病中互相联系，共同作用，形成十分复杂的细胞因子调节网[9]， TNF-α是由单核细胞和巨噬细胞所产生的一种小分子多肽，通过结合其相应受体发挥生物学作用。适量TNF-α可以调节适应性免疫、杀伤靶细胞、诱导细胞凋亡，对机体起保护作用，而过量表达则会对机体造成损伤。研究发现，TNF-α也是一种重要的炎症因子，当机体受到感染、损伤等刺激后，体内的TNF-α能激活中性粒细胞，改变血管内皮细胞通透性，调节其他组织代谢活性[10]。TNF-α也可以作用于纤维母细胞和骨细胞，与关节僵硬有关[11]，而AS正是以慢性炎症和异常骨化为病理特点的一类自身免疫性疾病。

本研究通过采用酶联免疫吸附试验，检测不同病程AS患者血清TNF-α的含量，并与常见的指标CRP、ESR做一個相关性分析，结果发现，与健康组相比，AS患者的TNF-α、CRP、ESR均有增高，且AS活动期患者高于AS非活动期患者，说明TNF-α参与了AS活动期的炎症反应；AS患者TNF-α的表达与CRP呈正相关，而与ESR无相关性。而且，62例AS患者中，有3例HLA-B27阴性患者，但其TNF-α有不同程度的增高。由此可以推测TNF-α在AS发病中扮演着重要作用，而且有动物实验证实，TNF-α转基因鼠可产生自发性关节炎，而抗TNF-α单克隆抗体可以抑制其发病[9]。

综上所述，AS患者血清TNF-α升高，表明TNF-α可能参与了AS发病过程，且通过TNF-α水平可以对AS病程活动度进行评价，但TNF-α具体作用机制尚待进一步研究，本研究拟通过检测AS患者血TNF-α的含量，为揭示其在AS发病机制中的作用提供新思路，也为以细胞因子靶向治疗提供实验依据。

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编辑/申磊