终末期肾病血液透析患者血清miR-155和miR-182的表达及意义

赵权,毕伟建,李萍萍,刘阳,袁吉振,朱彬蔚,盛姝洁

终末期肾病是一种肾功能严重受损、无法继续维持正常生理功能的疾病状态。肾透析可通过模拟肾脏的过滤功能而改善患者预后,但并不能治愈肾疾病,患者仍有较高死亡风险[1]。因此,找出终末期肾病的相关指标对临床治疗及改善患者预后具有重要意义。miRNA是一类小而非编码的RNA分子,研究显示miR-155可反映机体炎性反应程度,且miR-155与肾小管上皮细胞分化相关,可参与肾脏疾病的发病过程[2-4]。miR-182与炎性反应性疾病、细胞纤维化等有关[5-6],其可能在肾脏疾病中也发挥重要作用[7]。基于此,本研究通过检测终末期肾病血液透析患者血清miR-155和miR-182表达水平,分析两者与终末期肾病血液透析患者预后的关系,以期为临床治疗和改善患者预后提供一定依据,报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2019年5月—2022年5月海军第九七一医院、青岛市市立医院、青岛市海慈医院接受诊治并进行血液透析的终末期肾病患者112例为终末期肾病组,男57例,女55例,年龄51～78(61.57±8.68)岁。同期体检健康者112例为健康对照组,男53例,女59例,年龄51～75(60.43±8.36)岁。2组人员性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究已经获得医院伦理委员会批准(2019-41209),全部受试者或家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准:①终末期肾病血液透析患者经临床病理确诊,符合《慢性肾衰竭中西医结合诊疗指南》[8]中有关终末期肾病的诊断标准;②在海军第九七一医院、青岛市市立医院、青岛市海慈医院首次进行维持性血液透析;③年龄>18岁,患者随访资料齐全;④患者入院前未进行过手术、放疗、化疗等治疗。(2)排除标准:①恶性肿瘤者;②伴有肝或其他脏器功能严重损伤者;③有自身免疫性疾病、全身感染性疾病者;④进行过肾移植者。

1.3 观测指标与方法

1.3.1 样本收集:患者于入院翌日晨/健康对照组体检当日采集空腹肘静脉血3～4 ml,室温静置30 min,离心留取上清液,分装于无菌EP管中,于-20℃冰箱中保存待检。

1.3.2 血清miR-155和miR-182表达水平检测:采用miRNA试剂盒(19332ES,上海翌圣生物公司)提取血清总miRNA,按逆转录试剂盒(205311,德国Qiagen公司)逆转录合成cDNA,采用M-6000型实时荧光定量PCR(qRT-PCR)仪(苏州雅瑞生物公司)检测血清miR-155和miR-182相对表达水平,内参为U6,引物经设计软件设计后由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表1,所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。为减小实验误差,各样品重复3次,使用2-△△Ct方法计算目的基因miR-155和miR-182的相对表达量。

表1 血清miR-155和miR-182引物序列

1.3.3 随访:患者在首次开始透析后计算随访时间,随访间隔为3个月,随访终点为1年或患者死亡,随访率为100%。生存时间为透析开始日期至患者死亡时间或最终随访截止时间。根据患者生存情况分为生存亚组和死亡亚组。

2 结 果

2.1 2组血清miR-155和miR-182表达水平比较 与健康对照组比较,终末期肾病组患者血清miR-155和miR-182表达水平显著升高(P<0.01),见表2。

表2 终末期肾病组和健康对照组血清miR-155和miR-182表达水平比较

2.2 2亚组终末期肾病患者血清miR-155和miR-182表达及临床资料比较 2亚组患者男女比例、年龄、BMI、原发疾病比例、透析时间及血清P、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与生存亚组比较,死亡亚组患者Hb和Alb显著降低(P<0.01),血Ca、hs-CRP及血清miR-155、miR-182表达升高(P<0.01),见表3。

表3 生存亚组和死亡亚组终末期肾病患者血清miR-155和miR-182表达及临床资料比较

2.3 血清miR-155与miR-182表达水平相关性分析 Pearson相关分析结果表明,终末期肾病血液透析患者血清miR-155与miR-182表达呈正相关(r=0.516,P<0.001)。

2.4 影响终末期肾病透析患者预后的Logistic回归分析 以终末期肾病透析患者预后情况为因变量(赋值:死亡=1,生存=0),Hb、血Ca、hs-CRP、Alb、miR-155和miR-182为自变量,进行Logistic回归分析,结果显示:Hb低、血Ca高、hs-CRP高、Alb低、miR-155高和miR-182高均是终末期肾病透析患者预后的独立危险因素(P<0.05),见表4。

表4 影响终末期肾病血液透析患者预后的Logistic回归分析

2.5 血清miR-155和miR-182表达水平预测终末期肾病血液透析患者预后的价值 绘制血清miR-155、miR-182及二者联合预测终末期肾病血液透析患者预后的ROC曲线,并计算AUC,结果显示:血清miR-155、miR-182及二者联合的AUC分别为0.827、0.793、0.956,二者联合优于血清miR-155、miR-182各自单独预测(Z=2.251、 2.797,P=0.024、0.005),见表5和图1。

图1 血清miR-155和miR-182表达水平预测终末期肾病血液透析患者预后的ROC曲线Fig.1 Serum miR-155 and miR-182 expression levels predict the prognostic ROC curve of hemodialysis patients with end-stage renal disease

表5 血清miR-155、miR-182表达水平对终末期肾病血液透析患者预后的预测价值

3 讨 论

血液透析作为治疗终末期肾病的重要方式,被广泛应用,其通过去除体内废物和水分,恢复体内环境的稳定,从而改善患者的生活和预后[9]。肾透析是一种替代性治疗方法,不能完全恢复肾脏的功能。同时,肾透析也是一种长期连续的治疗过程,引发的炎性反应、感染、心血管疾病等[10-11],使患者预后变差,威胁其生命。因此,寻找终末期肾病血液透析患者预后相关指标,及时干预,对提高患者生存状况有积极意义。

miR-155是一种在人类和其他哺乳动物中广泛表达的重要microRNA,通过结合到mRNA上,抑制其翻译或者导致其降解,从而影响基因的表达。它在许多生理过程中发挥作用,包括细胞增殖、分化和死亡[12]。关昌杰等[13]通过荧光定量PCR检测了糖尿病肾病患者血清miR-155的表达,发现其呈现高表达状态,且与肾脏纤维化相关。Zhang等[14]研究发现,miR-155的过表达促进了细胞凋亡,抑制了细胞增殖,而抑制miR-155的表达起到相反的作用。本研究中终末期肾病血液透析患者血清miR-155水平高于健康对照者,这一结果与关昌杰等[13]结果相似,且死亡亚组miR-155水平高于生存亚组,提示血清miR-155可能在终末期肾病发生中起作用,推测高水平miR-155可能通过促进机体炎性反应或肾小管损伤加重肾病病情[15]。此外,本研究中血清miR-155对终末期肾病血液透析患者预后具有一定的评估价值,提示检测血清miR-155可能是预测终末期肾病血液透析患者预后的辅助指标,当血清miR-155表达>2.31时,临床应及时制定诊疗方案,防止患者病情恶化。

miR-182与多个生物过程和疾病密切相关,已有研究证明其在多种肿瘤组织中表达上调,包括乳腺癌、肺癌、结肠癌等[16]。另外,miR-182也参与肾脏疾病的发生,Li等[17]通过抑制miR-182的表达可缓解肾损伤及细胞凋亡。Sun等[18]研究表明miR-182与肾上皮细胞纤维化呈正相关。本研究中终末期肾病透析患者血清miR-182表达明显高于健康对照者,且死亡亚组miR-182水平高于生存亚组,提示miR-182可能与终末期肾病发生相关,推测miR-182可通过促进肾上皮细胞凋亡及炎性反应,促进肾病发展[19]。进一步研究发现,血清miR-182对终末期肾病血液透析患者预后具有一定的评估价值,当血清miR-182表达高于2.02时,患者预后变差几率较高,提示检测血清miR-182表达可能有助于预测终末期肾病血液透析患者预后。另外,本研究还发现血清miR-155和miR-182联合检测对终末期肾病血液透析患者预后具有更高的预测价值,提示血清miR-155和miR-182联合可更有效地预测终末期肾病血液透析患者预后,有较高的临床参考价值。相关性分析显示血清miR-155和miR-182呈正相关,且Hb、血Ca、Alb、hs-CRP、miR-155和miR-182均为影响终末期肾病血液透析患者预后的因素,与前人研究结果类似[20],提示miR-155和miR-182可能相互影响,共同参与终末期肾病发生,及时确定miR-155和miR-182等水平有助于预测终末期肾病血液透析患者预后,以便及时采取相应治疗策略。但具体机制仍需深入探究。

综上所述,终末期肾病血液透析患者血清miR-155和miR-182表达水平上调,二者联合可较好地预测终末期肾病血液透析患者预后。但miR-155和miR-182在终末期肾病血液透析患者中的作用机制未深入研究,后期将增加样本量进行探究。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

赵权、毕伟建:科研设计、文章撰写;李萍萍、朱彬蔚、盛姝洁:试验实施、数据收集、文章审阅;刘阳、袁吉振:数据分析、文章修改