柴芍乳增胶囊抗炎镇痛作用研究

杨 铭 肖丹丹 于德伟 赫 慧 杨 明*

1.吉林省中医药科学院，长春 130012；2.长春中医药大学药学院，长春 130117

乳腺增生病，又称乳腺小叶增生病，属中医乳癖范畴。是临床上最常见的乳房疾病。其发病率占乳房疾病的首位[1]。中医认为本病是由于情志不遂忧郁不解，久郁伤肝，导致肝气郁结，气机瘀滞，蕴结于乳房胃络，乳络经脉阻塞不通，不通则痛而引起乳房疼痛；肝气郁久化热，热灼津液为痰，气滞痰凝，即可形成乳房肿块。乳痛和乳房肿块等两大主症为主要临床表现。柴芍乳增胶囊处方是本课题组根据我院临床应用多年的内部制剂处方，经对各方药配伍临床观察，结合临床辨病与辨证，确立的治疗乳腺增生病的处方，具有疏肝理气、调冲和血，化痰散结之功效。本研究通过大鼠肉芽肿实验、小鼠热板实验和醋酸扭体实验，观察其抗炎、镇痛作用及其机制，为其临床应用提供药理学依据。

1 材料与方法

1.1 动物 Wistar大鼠SPF级，雄性，体重180～200 g；KM小鼠，SPF级，雌雄兼用，19～21 g。购自辽宁长生生物技术有限公司，生产许可证号：SCXK(辽)2020-0001。饲料：大小鼠维持饲料均购自北京(天津)科奥协力饲料有限公司，许可证号：津饲证(2020)01005。动物适应性饲养4 d，正常饮食。饲养环境：屏障环境动物观察室，温度：20～24 ℃，相对湿度：40%～70%，换气次数 10～15次/h，照明时间每日12/12 h交替照明。

1.2 药物 柴芍乳增胶囊，规格：0.4 g/粒(3.875生药/g)，批号：200601，由吉林省中医药科学院提供。阿司匹林，规格：100 mg/片，批号：BJ54292，由拜耳医药保健有限公司生产。

1.3 试剂 前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、ELISA 试剂盒，长春晶美生物科技有限公司产品；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所生产。

1.4 仪器 电子天平(d=0.1 mg)，上海精密科学仪器有限公司；GJ-8402型热板测痛仪，浙江宁海白石电子医疗仪器厂产品；酶标仪ST-360，上海科华实验系统有限公司；T6紫外可见分光光度计，北京普利生有限公司；TGL-16B高速离心机，上海安亭科学仪器厂。

1.5 方法

1.5.1 对大鼠棉球肉芽肿及血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影响 取大鼠50只，腹腔注射戊巴比妥钠30 mg/kg，麻醉，消毒，于腋下左右两侧埋入重量20 mg的无菌棉球(青霉素 0.2 mg/0.2 mL，浸泡，烘干)各一个。于术后 2 h 分随机分为5组，分别为柴芍乳增胶囊(胶囊粉)高、中、低(1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg)三个剂量组、阳性药组(乳康片1.0 g/kg)及模型对照组(蒸馏水)，每日灌胃给药一次(10 mL/kg)。连续给药7 d后，戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉，使用眼科剪剪开腹腔，腹主动脉取血3 mL，室温放置 20 min，离心20 min(速度3000 r/min，半径 10 cm)分离血清。取血清按照试剂盒说明书方法操作，检测PGE2、TNF-α、NO、SOD含量。处死动物，将两侧腋下棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，在60 ℃烘箱中放置12 h后称重。将称得的重量减去棉球的重量即得肉芽肿重量。

1.5.2 对小鼠热板的影响 取预先筛选合格(凡舔足时间小于5 s或大于30 s或跳跃者弃之不用)雌性小鼠50只，随机分为5组，分别为柴芍乳增胶囊高、中、低(1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg)三个剂量组、阳性药组(阿司匹林20 mg/kg)及溶剂对照组(蒸馏水)，灌胃给药一次(20 mL/kg)。于给药后2 h，将小鼠分别置于热板上[温度控制在(55±0.5)℃]，记录小鼠自放在热板上出现舔足所需时间(秒)作为该鼠的痛阈值。如痛阈值超过 60 s，即停止测试而按60 s计。观察小鼠60 s内痛阈值。

1.5.3 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 取雌性小鼠50只，按体重随机分为5组，分别为柴芍乳增胶囊高、中、低(1.2、0.6、0.3 g/kg)三个剂量组、阳性药组(阿司匹林20 mg/kg)及溶剂对照组(蒸馏水)，灌胃给药一次(20 mL/kg)。于给药后2 h，腹腔注射0.8%醋酸溶液 0.1 mL/10 g，观察小鼠15 min内出现扭体反应的时间及扭体反应次数。

2 结果

2.1 对大鼠棉球肉芽肿的的影响 柴芍乳增胶囊高、中、低剂量组及阳性药组肉芽肿重量明显低于模型对照组，有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。表明柴芍乳增胶囊能够明显抑制棉球肉芽肿重量。结果见表1。

表1 柴芍乳增胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响表

2.2 对棉球肉芽肿大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影响 柴芍乳增胶囊高、中剂量组及阳性药组能明降低PGE2、TNF-α含量，高、中、低剂量组及阳性药组能明显降低NO含量，增加SOD活性，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果见表2。

表2 柴芍乳增胶囊对棉球肉芽肿大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影响表

2.3 对小鼠热板的影响 柴芍乳增胶囊高、中、低剂量组及阳性药组能明显延长小鼠舔足出现时间提高痛阈值，与溶剂对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果见表3。

表3 柴芍乳增胶囊对小鼠热板的影响表

2.4 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 柴芍乳增胶囊高、中、低剂量组和阳性药组能减少化学刺激所引起的小鼠扭体次数，高剂量组和阳性药组能延长小鼠出现扭体时间，与溶剂对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果见表4。

表4 柴芍乳增胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应的影响表

3 讨论

柴芍乳增胶囊由柴胡、郁金、赤芍、夏枯草、香附、鹿角胶、橘核、玄参、浙贝母、海藻组成。疏肝理气，调冲和血，化痰散结。用于肝郁气滞，冲任失调，痰凝血瘀所致的乳房肿块、乳房胀痛、烦躁易怒，西医之乳腺小叶增生见上述证候者。方中柴胡具有和解少阳、疏肝解郁、升阳举陷的功效，柴胡皂苷具有良好的抗炎、抗病毒作用[2]；郁金具有行气化瘀止痛、清心解郁、利胆退黄凉血之功，能通过促炎性细胞因子的释放发挥镇痛作用[3]；赤芍清热凉血，散瘀止痛，有抗炎和解痉镇痛的作用[4-5]；夏枯草清肝泻火、明目、散结消肿，对乳腺炎及乳腺增生症有治疗作用[6]；香附具有行气解郁、调经止痛的功效，具有明显的抗炎镇痛作用[7]；鹿角胶具有温补肝肾、益精血、止血的功效，有明显的抗炎、镇痛作用[8]；橘核具有理气、散结、止痛的功效，有较好的镇痛抗炎作用[9]；玄参清热凉血，滋阴降火，解毒散结，对炎症因子的释放具有抑制作用[10]；浙贝母具有镇痛止咳、抗炎抑菌和抗癌抗肿瘤等功效[11]，海藻软坚、消痰、利水、退肿。研究结果表明，柴芍乳增胶囊能明显减轻大鼠棉球肉芽肿的重量，显示对炎症有明显的抑制作用；能明显提高小鼠热板痛阈值，减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，显示有明显的镇痛作用。

炎症是在致炎因素的作用下，由炎症细胞及其释放的炎症介质参与引起的一系列病理生理过程。炎症介质中PGE2能增强血管通透性，从而吸引中性粒细胞引起发热，诱导疼痛引发炎症损伤。TNF-α能介导炎性细胞向炎症局部聚集，最终造成组织损伤、炎症等病理变化。NO可导致发生炎症部位的渗出和水肿[12-14]。研究发现，柴芍乳增胶囊能降低棉球肉芽肿大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO含量，同时能刺激机体产生大量的SOD，减轻氧自由基的损害。提示，其通过抑制炎症介质PGE2、TNF-α、NO释放及增高SOD活性发挥抗炎镇痛作用。上述抗炎镇痛实验研究为柴芍乳增胶囊临床治疗乳腺增生病提供了药理学依据。