羊肚菌菌株筛选比较试验

刘 玥 梁 珍 赵 坤 李林辉

（西华师范大学生命科学学院“西南野生动植物资源保护”教育部重点实验室，四川南充 637000）

羊肚菌Morchellaspp.，属子囊菌，菌盖表面呈蜂窝状，因具有极高的食药用价值而深受消费者喜爱。野生羊肚菌资源有限，因此，人工栽培的羊肚菌将成为市场供应主力[1-3]。相较于平菇、木耳、香菇等食用菌，羊肚菌菌株退化速度更快，同时菌株的性状直接影响羊肚菌的产量[4]。因此，不断筛选优势羊肚菌菌株以获得较好的栽培效益具有现实意义。

笔者比较六妹羊肚菌原始母种、子囊孢子单孢菌株及其组织分离菌株的菌丝培养性状、产量，以期筛选出优良的羊肚菌栽培菌株。

1 材料与方法

1.1 试验材料

（1）羊肚菌菌株：六妹羊肚菌原母种F1，由南充世顺农业有限公司提供。

以六妹羊肚菌母种F1为出发菌株栽培羊肚菌，选取一健壮子囊果，通过单孢分离技术获得子囊孢子单胞菌株Fa2、Fa67；栽培Fa2、Fa67获得健壮子囊果，组织分离获得菌株Ft2、Ft67。

（2）供试培养基

PDA 培养基：土豆200 g，葡萄糖20 g，琼脂18 g，蒸馏水1 000 mL。基础培养基：葡萄糖20 g，硝酸钾2 g，硫酸镁0.5 g，磷酸二氢钾0.5 g，氯化钠0.5 g，琼脂粉20 g，蒸馏水1 000 mL，pH7.0。

碳源试验培养基：分别以等量的蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉代替基础培养基中的葡萄糖，其他成分不变。

氮源试验培养基：分别以等量的尿素、蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵代替基础培养基中的硝酸钾，其他成分不变。

1.2 试验方法

1.2.1 供试菌株菌丝培养基适宜碳氮源试验

制备表面覆盖无菌赛璐玢膜的PDA 平板，将供试羊肚菌菌株分别接种于平板中央，20 ℃培养5 d后，于无菌环境下将覆满菌丝体的赛璐玢膜剪成直径约5 mm 的圆片。将供试菌株膜片分别接种在铺有无菌赛璐玢膜的含不同碳氮源培养基平板中心，每个菌株3次重复。

20 ℃培养菌丝，每24 h测1次菌落直径，并计算菌丝生长速度，菌丝生长速度=（菌落直径-菌块直径）/培养时间。结束培养后从赛璐玢膜上刮取所有菌丝，于55 ℃烘干至恒重后，称量记录菌丝生物量。

1.2.2 供试菌株菌核产生能力比较

将供试羊肚菌菌株分别接种在PDA 培养基上，每个菌株3 次重复，于20 ℃恒温培养。待菌核产生且变黄时结束培养，收集气生菌核，于55 ℃烘干至恒重后称量并记录，基面菌核采用Photoshop CS 计算其面积。

1.2.3 供试菌株产量比较

试验地位于四川省广安市武胜县礼安镇观音坝村，海拔约249.2 m，土壤为沙质土，土壤疏松透气。

播种前清除地面杂草、乱石，撒生石灰消毒。采用厢式栽培方式，厢长10 m、宽1 m，沟宽0.3 m，深0.2 m。播种时按照300 g/m2用种量将菌种均匀撒播在厢面，并覆盖细土。播种后的管理参照文献[5]。待子囊果颜色变为棕黑色即可采收，记录鲜菇产量。

供试羊肚菌菌株各栽培3 个小区，每小区10 m2。

1.3 数据分析

用Excel 2019 处理试验数据，通过Spss 26.0 软件进行统计学分析，采用Origin 2023 软件对数据进行绘图。

2 结果与分析

2.1 供试菌株菌丝培养基碳源试验结果

由表1可知，含不同碳源培养基中，羊肚菌子囊孢子单胞菌株（Fa）和母本菌株（F1）的菌丝长速（日均生长速度，下同）均占优势。子囊孢子单胞菌株菌丝生物量优于母本菌株，但组织分离菌株（Ft）菌丝生物量少于母本菌株。在以葡萄糖为碳源培养基上，子囊孢子单胞菌株及母本菌株菌丝生物量多于另外三种碳源培养基。可见葡萄糖为供试菌株菌丝培养基最适碳源，且母本F1 菌株、子囊孢子单胞菌株Fa菌丝生长优势更明显（图1）。

表1 供试菌株在不同碳源培养基中的菌丝长速

图1 供试菌株在不同碳源培养基中的菌丝生物量

2.2 供试菌株菌丝培养基氮源试验结果

在以尿素为氮源的培养基中，供试羊肚菌菌株菌丝生物量及生长速度明显慢于其他氮源培养基，说明羊肚菌菌丝对尿素利用差。相反，在蛋白胨为氮源培养基中供试菌株的菌丝生物量及生长速度较其他氮源培养基中更高、快，表明蛋白胨可作为羊肚菌菌丝扩繁培养基的氮源。以硝酸钾为氮源的培养基中供试菌株生物量均差异显著，说明以硝酸钾为氮源培养基可以作为菌丝生长优势菌株的培养基。综合表2、图2 结果，母本F1 与两子囊孢子单胞菌株（Fa2、Fa67）在供试氮源培养基中菌丝生物量较高、菌丝生长较快，为优良菌株。

表2 供试菌株在不同氮源培养基中的菌丝长速

图2 不同氮源培养基中供试菌株菌丝生物量

2.3 供试菌株产菌核能力

羊肚菌菌株生产性能一定程度上与其产菌核能力相关，产菌核越多的菌株一般越容易获得较多子实体[6]。试验结果，供试菌株Ft2、Ft67 只产生气生菌核，而其他菌株除气生菌核外还会产生大量基面菌核（图3）。由表3可知，子囊孢子单胞菌株菌核数较多，其中Fa2菌核最多，Ft2最少。由此，可初步判断菌核数较多的子囊孢子单孢菌株Fa2、Fa67 为优良菌株。

表3 供试菌株产菌核情况

图3 供试羊肚菌菌株产生的菌核

2.4 供试菌株产量比较

供试羊肚菌菌株播种两个月后开始陆续出菇，由图4 可知，菌株Fa2 产量最高，较适宜于人工栽培；相反，菌株Ft2 产量最低，不宜作为栽培菌株。出菇场景见图5。

图4 供试羊肚菌菌株产量比较

图5 试验羊肚菌出菇场景

3 小结与讨论

食用菌优良菌株随着传代次数的增加，其性状的退化是必然的[5-7]，因此筛选优势菌株维持种性稳定是一项永恒的工作。试验比较羊肚菌亲本菌株、子囊孢子单孢菌株、组织分离菌株的产量、碳氮源利用、产菌核能力。结果表明，子囊孢子单孢菌株的生产特性不仅远优于组织分离菌株，比亲本菌株也略胜一筹，这说明子囊孢子单孢菌株适宜作为优势菌株人工栽培及保种。

试验表明，从子囊孢子中筛选羊肚菌优良菌株是可行的，而组织分离因为每个组织中存在潜在的遗传差异，这些差异在继代培养及制备菌种时会被扩大，因此应用组织分离的菌株风险较大。

试验只是以六妹系列菌株为研究对象，其他系列羊肚菌菌株是否能获得同样效果，有待验证，另外今后还需要从羊肚菌发育的机理上进一步寻找菌株退化的原因。