NUCB-2 在Ⅰ型子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

王慧慧 李红雨

（郑州大学第三附属医院妇科 河南郑州 450000）

子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma）是一组上皮恶性肿瘤，起源于子宫内膜，发病率逐年上升，2020 年中国子宫内膜癌新发病例81 964 例，死亡病例16 607 例[1]。一般认为子宫内膜癌根据发病机制和生物学行为特点可分为雌激素依赖型（Ⅰ型）和非雌激素依赖型（Ⅱ型），雌激素依赖型子宫内膜癌，即Ⅰ型子宫内膜癌绝大部分为子宫内膜样癌，预后较好，占子宫内膜癌的75%～90%；非雌激素依赖型子宫内膜癌，即Ⅱ型子宫内膜癌，包括透明细胞癌、癌肉瘤、浆液性癌等，预后较差[2]。子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，好发于围绝经期和绝经后女性，在子宫内膜癌患者病程中肿瘤细胞侵袭与转移是导致患者死亡及预后不良的重要因素[3]。子宫内膜癌约占女性生殖道恶性肿瘤22%，是常见女性生殖系统的三大恶性肿瘤之一[4]，在欧美发达国家居首位，在中国女性生殖系统恶性肿瘤的第二位，超过90%的子宫内膜癌病例发生在围绝经期妇女，约25%发生在绝经前[2]。

Ⅰ型子宫内膜癌的发生发展与DNA 错配修复基因的异常有关，包括基因静止、基因启动子超甲基化、基因失活[5]；肥胖、糖尿病、高血压并称为子宫内膜癌三联征[6]。临床研究表明，子宫内膜癌患者的发病年龄、病理学类型、病理分期等均与其预后有关，其中高龄、病情重的患者预后普遍更差[7]。因此，尽早明确诊断和给予有效治疗是提高子宫内膜癌患者生活质量、延长生存周期的有效手段。随着临床研究进展，靶向治疗和免疫治疗在子宫内膜癌的诊断、治疗中表现出明显的优势。NUCB-2（Nucleoprotein-2）是一种富含酸性氨基酸的EF-手型钙结合蛋白，于1994 年在急性淋巴母细胞白血病细胞系中首次被发现[8]。NUCB-2 是一种癌症相关基因，NUCB-2 高表达是癌症发生和进展的一个重要因素，NUCB-2的高表达促进细胞增殖、迁移和侵袭，与乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、神经胶质母细胞瘤的不良结局相关[9]。Ⅰ型子宫内膜癌发病率高，疾病负担重。本研究通过组织病理及定量检测Ⅰ型子宫内膜癌中NUCB-2 的表达，并对其临床意义进行探究。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取郑州大学第三附属医院妇科2021 年12 月至2022 年6 月收治的156 例患者为研究对象，依据子宫内膜的病理结果分为四组，其中正常子宫内膜组38 例、不伴有不典型增生性内膜组30 例、不典型增生性内膜组32 例、Ⅰ型子宫内膜癌56 例。本研究符合《赫尔辛基宣言》的相关要求，入组患者及家属均知情同意，并签署知情同意书。所有新鲜病理组织均于无菌条件下获得，然后置于液氮中进行低温冷冻保存备用。收集入组患者的对应子宫内膜组织石蜡标本进行研究。所有病理组织阅片由2 位资深病理学专家独立完成。本研究经医院医学伦理委员会审核通过（伦理编号：202300103）。依据国际妇产科联盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO）的FIGO 分 期（2009 年版）标准对子宫内膜癌患者进行临床分期。见表1。

表1 子宫内膜癌2009 年FIGO 手术-病理分期

1.2 入组标准 纳入标准：（1）年龄＞18 岁；（2）无临床病历资料缺失；（3）研究前未接受其他相关肿瘤治疗；（4）预期生存时间不少于3 个月。排除标准：（1）正参与其他研究者；（2）合并神经系统病变者；（3）合并心、肝、肾等其他脏器严重病变者；（4）合并严重感染性疾病或免疫性疾病者；（5）伴有血液性疾病；（6）合并急性、慢性炎症者；（7）研究过程中因各种原因退出或者失访者。

1.3 检测方法 应用免疫组化SP 法检测Ⅰ型子宫内膜癌组织中NUCB-2 蛋白表达，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。NUCB-2 染色以细胞浆内出现棕褐色颗粒或棕黄色为染色阳性。根据每张切片的阳性细胞率和阳性细胞的染色深度分别进行分级计分：阳性细胞数＜5%计0 分，阳性细胞数为6%～25%计1 分，阳性细胞数为26%～50%计2 分，阳性细胞数为51%～75%计3 分，阳性细胞数＞75%计4分；阳性细胞不着色计0 分，浅棕黄色计1 分，棕黄色计2 分，深棕色计3 分。将阳性细胞数和染色深度二者得分相乘，≥1 分为阳性（+），0 分为阴性（－）。NUCB-2 在上皮细胞膜顶点表达为A 模式；在整个细胞膜表面或细胞质中的表达为A/C 模式。

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0 软件处理数据，计数资料用%描述，进行χ2检验；计量资料用（）描述，进行t检验；采用Kaplan-Meier 法分析子宫内膜癌患者NUCB2 表达与生存期的关系。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NUCB-2 在非子宫内膜癌组织及Ⅰ型子宫内膜癌组织中的表达 NUCB-2 在非子宫内膜癌患者组织中不表达。见图1。在Ⅰ型子宫内膜癌患者中，NUCB-2 主要表达于Ⅰ型子宫内膜癌组织细胞浆内，呈棕黄色至棕褐色。见图2。非子宫内膜癌组织NUCB-2 阳性表达率为8%，Ⅰ型子宫内膜癌组NUCB-2 阳性表达率为75%（P＜0.05）。NUCB-2 在不典型增生性内膜组和不伴有不典型增生性内膜组表达为A 模式，NUCB-2 在不典型增生性内膜组和Ⅰ型子宫内膜癌组表达为A/C 模式，组间差异显著（P＜0.05）。见表2。

图1 NUCB-2 在非子宫内膜癌组织中阴性（×200）

图2 NUCB-2 在子宫内膜癌组织中阳性（×200）

表2 NUCB-2 的表达比较[例（%）]

2.2 四组患者NUCB-2 蛋白阳性率比较 正常子宫内膜组、不伴不典型增生性内膜组、不典型增生性内膜组和Ⅰ型子宫内膜癌组患者子宫内膜病理组织的NUCB-2 蛋白表达情况比较差异有统计学意义，NUCB-2 蛋白在子宫内膜癌患者组织中高表达（P＜0.05）。见表3。

表3 四组患者NUCB-2 蛋白阳性率比较

2.3 Ⅰ型子宫内膜癌组不同临床病理特征的NUCB-2 蛋白表达情况 NUCB-2 蛋白阳性表达情况与年龄、月经状态、肿瘤发生部位无关，与体质量指数（BMI）、肿瘤分化程度、FIGO 分期有关（P＜0.05）。见表4。

表4 Ⅰ型子宫内膜癌组不同临床病理特征的NUCB-2 蛋白表达情况（例）

2.4 NUCB-2 蛋白阳性表达与Ⅰ型子宫内膜癌患者生存曲线 NUCB-2 蛋白阳性表达患者生存时间与阴性表达患者比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图3。

图3 NUCB-2 蛋白阳性表达与Ⅰ型子宫内膜癌患者生存曲线

3 讨论

子宫内膜癌是临床常见的恶性肿瘤，随着人们饮食习惯、生活习惯的不断改变，子宫内膜癌发病人群呈现出年轻化趋势，严重威胁女性健康[10～11]。肿瘤的发生发展是多因素相互作用和多基因变异积累的复杂过程，癌基因的过度激活、抑癌基因的灭活使大量遗传和表观遗传学改变，导致正常细胞恶性转化，促进肿瘤细胞恶性发展[12]。因此，进一步明确子宫内膜癌的发生机制，研究疾病演变病理生理过程，已成为亟待解决的问题。基因检测的广泛应用为子宫内膜癌诊断和治疗提供了新的方向，尤其是对中晚期局部及全身转移的子宫内膜癌患者，具有很大的潜在优势。

近年来，识别新的癌症生物标志物及其特征已成为癌症研究的主要目标。生物标志物检测有助于肿瘤明确诊断、监测肿瘤疾病进展、预测疾病复发和提高治疗效率，可以在规范诊治肿瘤性疾病的基础上为患者定制个体化的治疗措施。肿瘤免疫治疗是近年来继手术治疗、化学治疗和放射治疗后的第4种肿瘤治疗模式[13]。临床研究发现，NUCB-2 是一种新的肿瘤相关蛋白，参与了许多细胞内过程的调节，包括食物摄入、葡萄糖代谢以及免疫、心血管和内分泌系统的调节[14]，有助于肿瘤疾病的诊断、监测肿瘤疾病进展、预测疾病复发和评估治疗效果[9]。增殖是所有恶性肿瘤细胞最终的特性之一，研究发现，在786-O（人肾透明细胞腺癌细胞）肾癌细胞系中下调NUCB-2 蛋白基因表达，可停止在细胞分裂周期的S 期，从而抑制细胞增殖[15]。本研究数据显示，从正常子宫内膜→不伴不典型增生→不典型增生→Ⅰ型子宫内膜癌，NUCB-2 表达A/C 模式逐渐增多，且表达信号有逐渐增强表现。NUCB-2 表达A/C 模式在不典型增生性内膜组中表达相较于正常子宫内膜组、不伴不典型增生性内膜组中更高，在Ⅰ型子宫内膜癌组中高于不伴不典型增生性内膜组、不典型增生性内膜组。表明NUCB-2 在促进Ⅰ型子宫内膜癌病情发生发展过程中存在一定作用，可能参与子宫内膜组织癌变进程中的早期事件。

为了评价NUCB-2 在胶质母细胞瘤生长和转移中的作用，有研究将NUCB-2 敲除细胞注射到裸鼠中，结果显示注射NUCB-2 敲除细胞组的肿瘤体积明显小于对照组[14]。另有研究研究发现，22%的子宫内膜癌中检测到NUCB-2，且显著高于非肿瘤性子宫内膜腺体，该蛋白与增殖的Ki-67 标记物呈正相关，单因素分析研究显示，NUCB-2 状态是无病生存和癌症特异性生存的独立预后因素。以上研究均表明，NUCB-2 的表达与肿瘤发生、发展密切相关，可以作为恶性肿瘤性疾病潜在的治疗靶点，为恶性肿瘤疾病的治疗提供新的方法和途径。

本研究通过免疫组化法检测了NUCB-2 在不同子宫内膜组织中的表达，并通过统计学方法进行数据分析，结果发现Ⅰ型子宫内膜癌患者的NUCB-2 表达率显著高于非子宫内膜癌（P＜0.05），且BMI 高的患者NUCB-2 表达率更高，病理提示为中低分化患者的NUCB-2 的表达率高于高分化的患者，FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者NUCB-2 表达率显著高于FIGO 分期为Ⅰ、Ⅱ期的患者，NUCB-2 阳性表达的Ⅰ型子宫内膜癌患者生存期小于NUCB-2阴性表达的子宫内膜癌患者（P＜0.05）。该结果进一步提示Ⅰ型子宫内膜癌组织中NUCB-2 的表达与Ⅰ型子宫内膜癌的发生以及恶性进展相关，可以用于Ⅰ型子宫内膜癌的监测疾病进展及治疗效果的评估。

综上所述，NUCB-2 具有独特的结构及相应的功能，是一种新近发现的、与恶性肿瘤发生发展密切相关的生物学标记物。NUCB-2 的表达在与Ⅰ型子宫内膜癌的发生、发展密切相关，其表达水平对Ⅰ型子宫内膜癌的前期预防、诊断和鉴别诊断、治疗效果监测和预后评估都有一定帮助，可对早期Ⅰ型子宫内膜癌患者进行更加明确的诊断，可作为Ⅰ型子宫内膜癌新的潜在治疗靶点，为Ⅰ型子宫内膜癌的治疗提供新的思路和途径。但是目前关于NUCB-2 在Ⅰ型子宫内膜癌发生发展过程中的具体机制，仍需要进一步详细的研究。本研究因条件限制入组的病例数相对较少，缺少随访数据以及与相关肿瘤标记物的相关性研究，因此研究结果有待在进一步深入探究及在多中心大规模研究中完善。