BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查对甲状腺结节定性诊断的影响

赵路,杨娟,刘春梅,吴涵

甲状腺结节(thyroid nodule,TN)是常见内分泌系统疾病,发病率逐年升高,其中约5%～15%为甲状腺癌,定性诊断对TN临床治疗具有重要作用[1]。超声引导下细针穿刺细胞学(ultrasound-guided fine-needle aspiration biopsy,US-FNAB)检查作为TN术前诊断常规细胞病理学性质检查,具有微创、准确、安全等优势,有利于减少TN的过度诊疗[2]。但US-FNAB诊断TN的准确性受超声科医生操作经验、解读水平等客观因素影响,对于部分滤泡性肿瘤、甲状腺细胞异型性病变的诊断效能有待提高[3]。甲状腺癌基因遗传突变表达机制有关研究[4]指出,鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)基因V600E突变在甲状腺乳头状癌中突变率为29%～83%,是其发生进展的重要基因遗传突变表达机制。基于此,本研究探索BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查对诊断良恶性TN的应用价值,以期为TN临床诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究征得我院医学伦理委员会和家属签字同意,选取2019年1月—2021年12月漯河医专二附院和漯河市中心医院收治的174例TN患者,共181个甲状腺结节,其中男56例,女118例;年龄38～63(48.73±5.21)岁;结节最大直径4.00～32.5(11.59±3.76)mm。

1.2 入选标准 纳入标准:(1)初次行甲状腺手术治疗;(2)经手术病理确诊;(3)术前接受BRAF基因V600E突变检测和US-FNAB检查;(4)凝血功能正常;(5)近3个月未服用抗甲状腺药物。排除标准:(1)存在甲状腺相关遗传缺陷疾病;(2)伴有颈部穿刺部位感染;(3)伴有非甲状腺转移肿瘤;(4)存在重要脏器病变;(5)既往颈部放射线治疗史;(6)妊娠期女性;(7)精神异常者。

1.3 方法

1.3.1 US-FNAB检查 取仰卧位,颈部过伸,采用超声诊断仪(荷兰飞利浦公司,IU22型),选择L12-5高频线阵探头进行常规超声检查(频率设置:5～12 MHz),定位结节,设计穿刺路径。超声引导下穿刺采用超声诊断仪(日本日立公司,HITACHI大二郎神),L75高频线阵探头(频率设置:5～18 MHz),选择23 G穿刺针进入TN,在结节内重复数次进行穿刺针提插取材,涂片固定,确定标本可满足细胞学诊断要求送检。一般每个结节穿刺2针(个别需穿刺3针),根据需要重复穿刺步骤;完成后贴敷料,压迫穿刺点止血,留观20 min。

1.3.2 BRAF基因V600E突变检测 待穿刺涂片存档,将余下涂片湿润状态下刮除细胞涂片上的目标细胞成分(已HE染色),放入Eppendorf管(2 mL),将1 mL生理盐水加入Eppendorf管中,震荡洗涤,进行DNA提取(厦门艾德生物公司DNA提取试剂盒),经荧光定量聚合酶链式反应实验获取样本突变信号阈值循环数(Ct值),突变信号Ct值进行突变判断:Ct值<28为突变型,Ct值≥28为野生型。

1.3.3 TN定性标准 细胞学穿刺结果根据甲状腺细胞病理学Bethesda报告系统分类标准[5]分为6类:(1)Ⅰ类 恶性肿瘤;(2)Ⅱ类 可疑恶性肿瘤;(3)Ⅲ类 滤泡性肿瘤或可疑滤泡性肿瘤;(4)Ⅳ类 意义不明的细胞非典型性病变或意义不明的滤泡性病变;(5)Ⅴ类 良性病变;(6)Ⅵ类 标本无法诊断或不满意。其中(1)～(4)归为细胞学阳性,(5)～(6)归为细胞学阴性。

1.4 观察指标 (1)统计TN术后病理组织学结果。(2)统计BRAF基因V600E突变检测、US-FNAB检查及BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查的诊断结果。(3)分析RAF基因V600E突变检测、US-FNAB检查及BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查的诊断效能。(4)分析BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查诊断TN的符合率。

1.5 统计学方法 采用SPSS 23.0统计学软件分析数据,计数资料以n,%表示,采用χ2检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 TN术后病理组织学结果 174例TN患者均接受手术治疗,术后病理共检出181个结节,其中恶性结节132个,良性结节49个,组织学病理类型见表1。

表1 TN术后病理组织学结果

2.2 BRAF基因V600E突变检测、US-FNAB检查及联合诊断TN结果 BRAF基因V600E突变检测检出117个恶性结节,64个良性结节;US-FNAB检查检出120个恶性结节,61个良性结节;BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查检出135个恶性结节,46个良性结节。见表2。

表2 诊断结果 (个)

2.3 BRAF基因V600E突变检测、US-FNAB检查及联合诊断TN效能 BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查诊断TN的灵敏度为96.97%,准确度为93.92%,阴性预测值91.30%,均高于单独诊断结果,漏诊率为3.03%,低于单独诊断结果,差异有统计学意义(P<0.05)。BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查与单独检测诊断的特异度、误诊率、阳性预测值比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 2种诊断方式诊断效能比较 (%)

2.4 BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查诊断TN类型的符合率 BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查诊断TN恶性肿瘤类型的符合率高于均单独诊断(P<0.05),BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查诊断TN Bethesda分类符合率与单独诊断比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 不同检测方法诊断TN符合率比较

3 讨论

不同类型TN治疗方案不同,良性结节多无明显临床症状,定期随访即可;恶性或有恶性倾向的TN则需进行手术治疗[6]。甲状腺乳头状癌10年生存率约80%～90%,预后较好,但仍有10%～20%患者存在复发、转移等不良预后[7]。因此,提高TN定性诊断的准确率对临床治疗方案的制定具有重要指导作用。US-FNAB检查是目前临床鉴别TN良恶性的常用诊断方案,本研究采用23 G穿刺针穿刺,因其针体较细有利于减少穿刺点周围组织受损,经超声引导进行穿刺操作,可实时观察针尖位置,提高标本取材成功率。但受细胞学本身的局限性影响,穿刺中标本取材不足的发生率较高,即使US-FNAB检查者经验丰富也难低于10%[8]。本研究中,US-FNAB检查诊断TN的漏诊率为14.39(19/132),考虑可能与标本取材不足有关。不同性质TN的内部可能存在退化变性或囊性变,若穿刺到液化部分则准确率降低;滤泡性癌等部分分化良好型癌,由于缺乏明显的异型性,需依靠组织学诊断,若组织切片中发现血管侵犯或包膜方可做出诊断[9]。近年来,分子诊断技术已应用于肺癌、乳腺癌等多学科临床诊疗中,在疾病术前诊断方面发挥辅助作用,且能对疾病预后进行评估[10-11]。

甲状腺癌发生和进展过程复杂,存在多基因参与和多基因突变;BRAF基因V600E突变是甲状腺乳头状癌中常见的突变位点,主要发生于甲状腺未分化癌和甲状腺乳头状癌中,特异度较高[12-13]。BRAF基因V600E突变一方面可激活丝裂原活化蛋白激酶通路,调节肿瘤细胞生长、分裂及增殖;另一方面可持续激活MAPK/细胞外信号调节激酶信号通路,促使甲状腺乳头状癌病情进展[14-15]。为进一步提高TN定性诊断效能,本研究联合应用BRAF基因V600E突变检测和US-FNAB检查诊断TN,结果显示,二者联合诊断的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于单独诊断,且漏诊率较低。提示BRAF基因V600E突变检测可作为US-FNAB检查的补充诊断措施,为评估TN恶性风险提供更多信息。此外,本研究中BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查诊断TN恶性肿瘤类型的符合率高于单独诊断,进一步说明联合检测筛检TN恶性肿瘤的高效能特性,利于临床精准制定治疗方案。

综上所述,TN定性诊断中BRAF基因V600E突变检测联合US-FNAB检查的诊断效能较高,可为不同性质、不同类型的TN患者临床诊疗提供参考,对TN患者预后改善具有积极意义。