常规检测法与革兰染色法在阴道分泌物检测中的应用价值探讨

施竞超

[摘要] 目的 探讨常规检测法（湿片镜检法和五联检测法）与革兰染色法在阴道分泌物检测中的应用价值。方法 选取2021年1月至2021年12月浙江大学医学院附属金华医院就诊的479例女性阴道炎患者作为研究对象，分别采用常规检测法与革兰染色法对阴道分泌物标本进行检测，对检测结果进行比较分析。结果 常规检测法和革兰染色法的Kappa值为0.793，具有较高的一致性（P<0.05）。在白细胞的检出率上，常规检测法高于革兰染色法，差异有统计学意义（P<0.05）。在致病性细菌、乳酸杆菌的检出率上，革兰染色法远高于常规检测法，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在日常工作中，常规检测法能较好的完成日常阴道分泌物筛查工作，时间快，效率高，而革兰染色法能提高可疑性感染的阳性检出率。临床检验中可灵活应用两种方法，使报告更加准确。

[关键词] 阴道分泌物；五联检测法；革兰染色；细菌性阴道炎

[中图分类号] R446      [文献标识码] A      [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.02.018

[Abstract] Objective To explore the application value of routine detection methods （wet slice microscopy and quintuple detection method） and Gram staining method in the detection of vaginal discharge. Methods A total of 479 women attending Jinhua Hospital affiliated to Zhejiang University School of Medicine from January 2021 to December 2021 were selected as study subjects， and vaginal secretion specimens were tested by routine detection method and Gram staining method respectively， and the results were compared and analyzed. Results The Kappa value of quintuple detection method and Gram staining method was 0.793， had a high consistency （P<0.05）. In the detection rate of white blood cells， the routine detection method was higher than the Gram staining method， and the difference was statistically significant （P<0.05）. In the detection rate of pathogenic bacterium and lactobacillus， Gram staining method was much better than routine detection method， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion In daily work， routine detection method can better complete the routine vaginal discharge screening work， the time is fast， the efficiency is high， and the Gram staining method can improve the positive detection rate of suspicious infection. The two methods can be flexibly applied in clinical examination to make the report more accurate.

[Key words] Vaginal discharge; Quintuple detection method; Gram staining; Bacterial vaginitis

女性阴道分泌物的主要成分为子宫内膜、前庭大腺、阴道黏膜渗出液、少量白细胞和非致病性阴道细菌，虽然阴道寄生菌群混合在分泌物中，但其通常不致病，处于微生态平衡状态。若陰道环境因某种原因出现紊乱，菌群就会失衡，且伴随着白细胞、pH值和过氧化氢浓度升高等变化，可引起各种类型的阴道炎。准确识别阴道炎的病原菌是治疗阴道炎的关键。由于不同类型阴道炎的临床治疗方法差异较大，盲目用药将大大降低治疗效果，甚至可能引起耐药，导致菌群失衡。目前临床上常规检测法包括湿片镜检法和五联检测法[1]。湿片镜检法能简捷、迅速的检测上皮细胞、白细胞、真菌孢子及阴道毛滴虫，但也存在一些不足之处，如操作人员通过个人经验判断结果，人为因素影响较大、主观性强，并且形态学上较难辨认各类细菌，特别是乳酸杆菌的鉴别，线索细胞在镜下不易观察，有较大的漏诊率。五联检测法相对提高了乳酸杆菌等方面的检出率，革兰染色法可对病原菌进行更全面的定性初筛且成本较低。本研究以479例患者的阴道分泌物标本作为研究对象，采用常规检测法和革兰染色法进行检测和对比分析，为日后临床检验提供参考。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选取2021年1月至2021年12月浙江大学医学院附属金华医院就诊的479例女性阴道炎患者作为研究对象，平均年龄（36.3±4.3）岁。纳入标准：①经临床诊断为阴道炎，存在外阴瘙痒、白带增多、有异味、有灼痛感、排尿困难等症状；②白带标本异常（清洁度为Ⅲ～Ⅳ度）。排除标准：①2h内进行过服药和阴道冲洗治疗的患者；②无法配合研究的患者。本研究经浙江大学医学院附属金华医院伦理委员会审批[伦理审批号：（2022）伦申第（6）号]。

1.2  方法

在妇科检查前，将患者置于截石位，充分暴露宫颈口，由妇科医生用无菌棉拭子在阴道后位或穹窿处旋转10～20s，标准为能清晰看到分泌物附着，一式两份。采样时应避开用药期、经期和绝经期且避免性生活。样品应新鲜且充足，尽量避免使用带血样本。显微镜型号为日本奥林巴斯公司的CX31，白带五联检测仪器与试剂分别为郑州安图生物工程的Autowo MO分析仪以及阴道炎五联检测试剂盒Ⅱ（干化学酶法），革兰染液由珠海贝索生物技术有限公司提供，生理盐水自配。

1.2.1  湿片镜检法  将已取好标本的无菌棉拭子均匀涂抹于载玻片上，用生理盐水稀释后，再用高倍镜观察分泌物中的滴虫、孢子、線索细胞等[2]。

1.2.2  五联检测法  将试剂盒从冷藏环境中取出，室温（18～25℃）放置至少30min。取1支加样试管，将联检Ⅱ稀释液滴在试管底部的两条刻度线之间，将收集到的阴道分泌物拭子放入试管中，彻底冲洗干净后用手指轻轻挤压试管壁，使抵子吸附的液体流回试管，弃拭子，取得样本液（得到的样本液的量不得低于最低刻度线）。分别将联检卡Ⅱ、联检Ⅱ终止液及样本液放置于分析仪相应位置，按照仪器要求进行操作，打印检验报告。

1.2.3  革兰染色法  将白带标本均匀涂抹于载玻片上，厚薄适中，然后依次干燥、固定、初染、媒染、脱色、复染，接着用高倍镜和油镜依次观察多个视野，记录是否存在阴道毛滴虫、念珠菌、线索细胞等[3]。

1.3  观察指标

比较白细胞、乳酸杆菌、念珠菌孢子、阴道毛滴虫等的检出率。联检卡第1孔过氧化氢阳性将说明阴道菌群失调，阴道微生态也处于失调状态，阴性表示有大量乳酸杆菌存在，阴道菌群正常；第2孔白细胞酯酶阳性表明白细胞超过15个/高倍视野（high power field，HPF），阴性表明白细胞少于5个/ HPF；如果第3孔凝固酶阳性，第6孔（乙酰氨基葡萄糖苷酶）或第7孔（葡萄糖苷酶）阳性则提示感染外阴阴道假丝酵母菌病或滴虫阴道炎，然后结合第8孔（pH值）进行区分，外阴阴道假丝酵母菌病一般pH值≤4.6，滴虫阴道炎一般pH值≥4.8；第4孔脯氨酸氨基肽酶阳性或第5孔唾液酸苷酶阳性将提示感染性细菌性阴道炎。

1.4  统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行处理分析。计数资料采用例数（百分比）[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，一致性分析运用Kappa检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  检出率比较

湿片镜检法的滴虫检出率高于五联检测法和革兰染色法，差异无统计学意义（P>0.05）。五联检测法的白细胞检出率高于湿片镜检法和革兰染色法，差异有统计学意义（P<0.05）。革兰染色法的致病性细菌、念珠菌、乳酸杆菌的检出率高于于湿片镜检法和革兰染色法，差异有统计学意义（P<0.05）。五联检测法的白细胞检出率高于革兰染色法，差异有统计学意义（χ2=3.925，P=0.048）。革兰染色法的致病性细菌高于五联检测法，差异有统计学意义（χ2=5.913，P=0.015）。革兰染色法的乳酸杆菌检出率高于五联检测法，差异有统计学意义（χ2=30.041，P<0.001）。五联检测法和革兰染色法的滴虫检出率和念珠菌检出率比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2  常规检测法和革兰染色法的一致性分析

常规检测法和革兰染色法的一致性较好（Kappa=0.793，P<0.05），见表2。

3  讨论

阴道炎是育龄妇女的常见多发病，由于女性在生殖系统生理结构上存在着一定的特殊性，使得女性外阴道处于相对潮湿、温热的环境，在各种因素的刺激下，如自身内分泌系统的紊乱、各种病原微生物的侵袭等，都有可能打破阴道微生态的平衡，导致阴道炎的发生。临床常见阴道炎症包括需氧菌性阴道炎、细菌性阴道炎、外阴阴道假丝酵母菌阴道炎、滴虫阴道炎[4]。需氧菌性阴道炎是乳酸杆菌减少、需氧菌感染引起的阴道炎症，常见病原体为链球菌、葡萄球菌以及大肠埃希菌[5]。细菌性阴道炎是由于阴道内产生过氧化氢的乳酸菌减少或消失，正常阴道内一组微生物（阴道加德纳菌、阴道普雷沃氏菌、消化链球菌、紫色单胞菌、流动弯曲杆菌等）异常增多而引起的阴道微生态紊乱的临床症状，通常表现为白带增多、白带腥臭、外阴瘙痒等[6]。外阴阴道念珠菌性阴道炎是由外阴阴道念珠菌感染引起的一种生殖道疾病。滴虫阴道炎是由阴道毛滴虫感染引起的生殖道炎症。阴道环境pH值为5.5～6.0时，易于病原菌生长繁殖[7]。

阴道内微生态是环境中细菌与细菌、细菌与外环境以及细菌与自身机体之间的一种动态平衡，以抑制各种外源性或内源性菌群的异常增殖，从而降低细菌性阴道病的发生概率[8]。阴道内微生态中的乳酸杆菌对于维持阴道内环境的平衡发挥着极为重要的作用，乳酸杆菌通过分泌乳酸降低阴道内pH值来抑制外源性及内源性致病菌的增殖。同时，乳酸杆菌可通过刺激过氧化氢及嗜酸乳酸菌的分泌来抑制阴道加德纳菌、外阴阴道假丝酵母菌、大肠杆菌以及大肠埃希菌的增殖[9]。目前阴道炎的临床诊断主要依靠患者体征和常规检测，而显微镜诊断主要依靠检验员对细菌形态的鉴定，主观性强，影响诊断结果。此外，某些类型的阴道炎症状不典型，导致临床诊断难度增加[10]。在阴道五项指标联合检测试验中，过氧化氢是阴道乳酸杆菌分泌的物质[11]，其浓度与乳杆菌数量呈正相关，其对维持阴道微环境，防止病原菌的侵袭和增殖有重要作用，不受宫颈黏液和不良药物因素的影响[12]。白细胞酯酶存在于粒细胞中，是反映阴道宿主细胞的主要标记酶，可直接反映阴道炎症的发生。唾液酸酶是细菌性阴道炎细菌分泌的一种胞外酶，与致病菌数量呈正相关。β直半乳糖胺酶是真菌（尤其是白色念珠菌）和阴道毛滴虫分泌的一种酶。结合阴道pH值，可有效提示两种微生物感染，可半乳糖胺酶阳性和pH值≥4.8提示滴虫感染；示滴半乳糖胺酶阳性和pH值≤4.6提示白色念珠菌感染[13]。

革兰染色后滴虫虫体在低倍镜下可呈云雾状，在油镜下可呈圆形，梨形，椭圆形等多形性，胞内可看到细胞核，核较小，位于虫体的前段，可见鞭毛，胞质内可见粗细较均匀的红色颗粒，为其特有的氢化酶体；孢子在革兰染色后呈现革兰阳性，大小明显大于普通细菌，容易观察；乳酸杆菌为无芽孢的革兰阳性大杆菌，单个、成双或短链排列，有长有短，有时呈棒状，细长，但不分枝；革兰染色后可清楚发现，线索细胞为大型鳞状上皮细胞，表面附着大量加特纳菌或者小杆菌，边缘不整齐、粗糙、透明度不高，出现线索细胞，可高度怀疑是细菌性阴道炎[14]。

本研究结果显示，五联检测法在白细胞的检出率上要高于湿片镜检法和革兰染色法。根据五联检测法白细胞的检测原理，湿片镜检法和五联检测法的相关性较差，因为镜检法是计数白细胞的个数，白细胞酯酶与白细胞的个数无直接相关性。在致病性细菌、孢子、乳酸杆菌的检出率上，革兰染色法要高于湿片镜检法和五联检测法，革兰染色法能更明确的鉴定出乳酸杆菌及其他内源性条件致病菌和外源性致病菌，临床用药更加具有针对性，患者也能够及早得到有效的治疗[15]。3种方法的滴虫检出率相近，差异无统计学意义。另外湿片镜检法对滴虫的检出率高，因滴虫动态且典型，革兰染色法更需要有经验的检查者，不然容易漏诊。

本研究结果显示，常规检测法和革兰染色法的kappa值为0.793，具有较高的一致性。在日常临床分析中，常规检测法可以较好的完成阴道分泌物的常规检测工作，但是对于针对性病症的检出，如细菌性阴道炎、真菌性阴道炎的诊断，革兰染色法能进一步明确诊断。对于日益增长的菌群失调症（阴道微生态失调症）上，革兰染色法可以看出在未感染致病性细菌的情况下，乳酸杆菌的减少，能及时帮助患者。

综上所述，常规检测法具有高效、快速的特点，有较好的敏感性，而革兰染色法可以提高临床筛查的特异性，为实际治疗提供帮助，建议在临床分析诊断的时候结合使用两种检测方法，以提高疾病的诊出率。

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（收稿日期：2022–08–25）

（修回日期：2022–12–25）