阴道分泌物五联检试剂盒临床应用评价

莫宗平

摘要：目的 评价硕世阴道炎五联检试剂盒的临床应用价值。方法 收集169 例妇科门诊患者阴道分泌物标本同时用阴道炎五联检试剂盒与显微镜镜检，用Kappa检验比较两种方法的一致性。结果 五联检试剂盒与镜检结果比较：过氧化氢与细菌性阴道病（BV）与镜检一致性良好，κ分别为0.61、0.74，总符合率分别为89.90%、92.90%；白细胞酯酶两方法一致性中等，κ=0.58，总符合率为78.70%；真菌两方法一致性差，κ=0.21，总符合率为68.00%，假阳性率为30.50%，假阴性率为39.30%；169例样本中镜检出滴虫1例，而五联检试剂盒未检出。结论 阴道炎五联检试剂盒检测真菌、滴虫结果假阴性、假阳性率较高，需显微镜镜检确认；白细胞酯酶与镜检一直性中等，需结合镜检；过氧化氢和BV与镜检一致性较好，可以满足基层医院临床使用要求。

关键词：阴道分泌物；过氧化氢；白细胞酯酶；真菌；细菌性阴道病

中图分类号：R711.31；R446.1 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）18-0067-03

Abstract：Objective To evaluate the clinical application value of the master vaginitis five inspection kit.Methods 169 cases of gynecological patients with vaginitis vaginal secretion and five inspection kit with microscopy，consistent with Kappa test to compare the two methods.Results Five inspection kit and microscopic examination results：Hydrogen peroxide and bacterial vaginosis（BV）and microscopic consistency is good，κ were 0.61，0.74，the total coincidence rate were 89.90%，92.90%；leukocyte esterase two method medium consistency，κ=0.58，the total coincidence rate was 78.70%；Fungi two methods of poor consistency，κ=0.21，the total coincidence rate was 68.00%，the false positive rate was 30.50%，the false negative rate was 39.30%；A total of 1 case of trichomoniasis was detected in 169 samples，while the five test kit was not detected.Conclusion The five inspection kit for detection of fungal vaginitis，trichomonas and false negative results，high false positive rate，need microscope to confirm；Leukocyte esterase and microscopic examination are always moderate，and need to be combined with microscopic examination.The consistency of hydrogen peroxide and BV is better than that of microscopic examination，which can meet the requirements of clinical application in primary hospitals.

Key words：Vaginal secretions；Hydrogen peroxide；Leukocyte esterase；Fungi；Bacterial vaginosis

阴道分泌物常规检测（俗称“白带常规”）是妇科门诊检查中应用最普遍的一项，是评判女性是否患有阴道炎症的重要诊断依据。传统的检测手段为湿片显微镜检法，主要检测项目包括上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌数量、查找真菌、滴虫及线索细胞。该方法简单直接、特异性高，也一直被作为金标准来推崇，但因是手工操作与人工判读结果，对人员的技术要求高，可能存在不同人員在结果判读上的差异，且随着人们对健康关注度的提高，目前各大医院的妇科门诊患者越来越多，因手工操作繁琐不利于检测报告的及时发放。近几年来，应用干化学酶法联合检测白带中的过氧化氢（H2O2）、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶活性及pH值来分别对应白带中的乳酸杆菌数量及功能、白细胞、细菌性阴道病（BV）、霉菌及滴虫感染已逐渐成为白带检测中的热点。本文旨在比较干化学酶法联合检测试剂盒中的这几项检测指标与显微镜镜检的一致性，为实验室正确的应用该检测试剂盒提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料

收集本院2016年7月妇科门诊主诉白带增多、有异味、外阴瘙痒为主的患者分泌物169份，分泌物均用无菌棉试子取于阴道后穹窿。

1.2试剂

阴道炎五联检试剂及仪器由硕世生物科技有限公司提供。革兰染液由珠海贝索公司提供。

1.3方法

取阴道后穹窿分泌物，分别用湿片显微镜常规镜检和阴道分泌物五联检试剂进行检测，同时涂一张干片革兰染色进行乳酸杆菌检测。五联检检测项目包括过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶及pH。endprint

1.3.1五联检结果的判断 过氧化氢孔不显色提示阴道菌群失调结果判断（+），对应镜检结果为乳酸杆菌异常（+）；白细胞酯酶（+），对应镜检白细胞（+）；唾液酸苷酶（+），对应镜检线索细胞（+）；乙酰氨基葡萄糖苷酶（+）且pH≥4.8对应镜检查见滴虫；乙酰氨基葡萄糖苷酶（+）且pH≤4.6对应镜检查见真菌。

1.3.2显微镜结果的判断标准 参照判断标准，乳酸杆菌以查见≥6个/HP革兰阳性长杆菌判为正常及镜检（-），<6个/HP判为异常镜检（+）；白细胞以≤15个/HP判为（-），≥15个/HP判为（+）， BV以查见线索细胞≥20%/HP判为（+），< 20%/HP判为（-）；真菌和滴虫以湿片高倍镜下查见判为（+），未查见判为（-）[1]。

1.4统计学分析

采用应用SPSS19.0软件进行？字2检验及U检验，比较两方法的阳性及阴性率。Kappa（常写成κ）值评估标准：当 κ>0.80，说明两方法一致性优，0.60<κ≤0.80，说明一致性良好； 0.40<κ≤0.60说明一致性中等；若κ≤0.40，说明一致性差。U值95%标准正态分位数为1.96，U>1.96，则 P<0.05表示有统计学差异。

2结果

2.1过氧化氢检测结果

169例样本中五联检阳性147例，阳性率87.00%；镜检阳性140例，阳性率82.80%，两方法阳性符合率96.40%，阴性符合率58.60%，诊断总符合率为89.90%，κ=0.61，U=6.79，P<0.05，两方法一致性良好，见表1。

2.2细菌性阴道病（BV）检测结果

169例样本中五联检阳性31例，阳性率18.30%，显微镜检查见线索细胞25例，阳性率14.80%，两方法阳性符合率为88.00%，阴性符合率为93.80%，诊断总符合率为92.90%；κ=0.74，U=10.42，P<0.05，两法一致性良好，见表2。

2.3白细胞酯酶检测结果

169例标本中五联检白细胞酯酶阳性结果75例，阳性率44.40%，显微镜检阳性结果95例，阳性率56.20%。两方法阳性符合率为70.50%，阴性符合率89.20%，诊断总符合率为78.70%，κ=0.58，U=5.58，P<0.05，两方法的一致性中等，见表3。

2.4真菌检测结果

在169例样本中五联检真菌阳性60例，阳性率35.50%，显微镜检阳性28例，阳性率16.60%；两方法阳性符合率为60.70%，阴性符合率为69.50%，总符合率为68.00%；κ=0.21，U=2.36，P<0.05，两法一致性差；假阳性率为30.50%，假阴性率为39.30%，见表4。

2.5滴虫检测结果

169例样本中五联检滴虫阳性14例，阳性率8.28%，镜检阳性1例，阳性率0.60%，总符合率91.10%；假阳性8.33%，见表5。

3讨论

阴道分泌物检查是评价女性是否患有阴道炎的最常用的检测方法，传统检测方法为湿片显微镜直接镜检，通过观察分泌物中的上皮细胞、白细胞、杆菌、线索细胞数量以及查看是否有真菌、滴虫等来判断阴道炎的程度及类型，诊断的特异性较高，但对检验技术人员的要求较高，不能自动化。硕世生物将过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶（BV）、乙酰氨基葡萄糖苷酶、pH值整合在同一试剂板条上，通过与硕士生物的阴道炎五联检仪器配套使用，只需简单的向标本内加入稀释液，仪器可自动完成后续的加样、结果判读与数据上传LIS，完成了多项目的同时检测与自动化。

女性阴道是一个复杂的微生态体系，正常育龄女性阴道内有超过200种微生物，其中以乳酸杆菌为主占95%，其余5%是条件致病菌及过路菌；阴道乳酸杆菌分为产H2O2和不产H2O2两类，产H2O2乳杆菌在健康女性阴道内大量存在。H2O2是细菌间发生拮抗作用的自净物质，产H2O2乳杆菌的缺乏将诱发致病菌的过度生长，阴道内微生态平衡被打破，导致阴道菌群失调，极易引起阴道感染性疾病。阴道分泌物五联检试剂盒将检测H2O2活力用于评价阴道内乳酸杆菌的多少，间接反应阴道微生态是否平衡，本研究通过与镜检比较，两方法一致性良好，诊断总符合率为89.9%。对于H2O2与镜检乳酸杆菌的数量的相关性问题，不同的研究者或使用不同厂家的试剂得到的结果存在一定的差异。冷娇[1]等通过对908例妇科门诊患者阴道分泌物应用显微镜镜检与珠海丽拓五联检仪器及试剂进行临床应用评价，发现五联检通过检测H2O2来间接反映乳酸杆菌浓度，其结果与显微镜镜检一致性良好、差异无统计學意义。章静[2]对334例、温立娟[3]对982例妇科门诊患者阴道分泌物应用郑州安图禄科的五联检试剂与镜检法比较，发现五联检试剂结果与显微镜镜检比较差异均有统计学意义，五联检检出率低于镜检法，分析原因可能与部分乳酸杆菌不产H2O2以及部分患者存在菌群正常而功能下降有关。乳酸杆菌功能试验与镜检比较不同的试剂厂家得到不同的结论，所以建议在试剂应用前均应做性能评价。

白细胞酯酶为白细胞中的中性粒细胞释放的酶，在健康状态下含量极低，当机体发生炎症时，白细胞在炎性病灶聚集并大量释放白细胞酯酶，因此检测白细胞酯酶可反映阴道炎症的程度。硕士五联检试剂盒通过检测吞噬了足量细菌并被细菌产生的毒素分解后才释放出来的存在于粒细胞内的白细胞酯酶活性（即处于战斗状态的白细胞）来反映阴道炎症的程度；传统的湿片法显微镜检阴道分泌物主要通过观察每个高倍镜视野下白细胞的数量来判断炎症的程度。通过该试剂盒与显微镜检法比较，发现两方法的一致性中等，诊断总符合率为78.70%。分析原因可能为两方法检测原理不同所致。基于镜检法与五联检中的白细胞酯酶存在差异，笔者认为应对每一份标本同时进行镜检与五联检以达到相互取长补短，减少漏检。endprint

目前白带中真菌和滴虫的主要检测手段为直接涂片镜检。显微镜检对人员经验要求高，且因冬季气温较低影响滴虫活动以及部分真菌形态不典型易造成漏检。乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）为白色念珠菌、光滑念珠菌和滴虫分泌的特异性酶，正常阴道分泌物不含此酶，只有在此类病原菌感染时才能检测到此酶的存在。正常阴道分泌物pH值为3.8～4.5，念珠菌性阴道炎的分泌物pH值不>4.6，而滴虫性阴道炎分泌物的pH值>4.8。因此通过NAG结合pH值能将二者区分开来[4-5]。五联检试剂盒应用此原理，当检测结果NAG（+）且pH≥4.8判断为滴虫感染（TV）， NAG（+）且pH≤4.6判断为真菌感染（VVC）。通过显微镜检与五联检比较发现：两法检测真菌一致性差，κ=0.21，假阳性率为30.50%，假阴性率为39.30%，在检测滴虫上镜检发现1例滴虫，而五联检试剂未检测。分析原因为NAG检测真菌和滴虫目前存在两个问题：①真菌性阴道炎的病原体中仅白色念珠菌和光滑念珠菌有NAG，而热带念珠菌和克柔念珠菌则无该酶，唐振华[6]等对96例真菌性阴道炎患者阴道分泌物行真菌鉴定发现临床分离菌中白色念珠菌与光滑念珠菌共占88.6%、其余11.4%为不产NAG的真菌。臧嘉[7]等对妇科阴道分泌物中的631例真菌进行了鉴定，发现以白色假丝酵母菌最为多见，占阳性标本的82.09%，其次是光滑假丝酵母菌占12.36%，其余占5.55%。陈小红[8]等对妇科阴道分泌物中分离出的124例真菌性阴道炎样本进行了真菌鉴定，发现白色念珠菌与光滑念珠菌共占91.05%，其余占8.95%。因此，以NAG诊断真菌性阴道炎原理上存在部分真菌不能检出的缺陷。②理论上滴虫和真菌通过pH值能把两者区分开来，但在实际操作中，由于加样未加到、标本浑浊、带血标本等因素常导致仪器pH检测结果与实际有较大偏差，可能会出现无法准确区分滴虫与真菌的情况，从而造成NAG结果与镜检结果一致性差，所以综上笔者认为无论是NAG阴性还是阳性样本，均应进行镜检。

细菌性阴道病（bacterial vaginosis，BV）诊断是按世界卫生组织推荐的Amsel法，查找线索细胞则是诊断BV的最具特征性的指标，但由于操作复杂，主观性强，阳性标准难以统一，所以应用于常规诊断存在一定的困难。BV致病菌加德纳菌、游动弯曲杆菌等可产生大量唾液酸苷酶，较正常人高出100～1000倍。报道唾液酸苷酶试验诊断BV与Amsel金标准有很好的相关性。本研究发现在BV检测上两方法的一致性良好，κ=0.74，诊断总符合率为92.90%。

综上所述，该厂家五联检试剂盒中的BV及H2O2与镜检一致性良好，白细胞酯酶与与镜检白细胞一致性中等；霉菌、滴虫与镜检的符合程度低、一致性差，存在较高的假阴性与假阳性。在滴虫、霉菌、白细胞项目上不能替代显微镜检。

参考文献：

[1]冷娇，戴燕.珠海丽拓五联检仪器及试剂临床应用评价[J].检验医学与临床，2013，10（4）：400-403.

[2]章静.阴道分泌物常规检测与五联检试剂检测的比对分析[J].实验与检验医学，2012，30（3）：308-309.

[3]温立娟.阴道分泌物常规镜检与五联检法联合应用的分析评价[J].实验与检验医学，2014，32（5）：598-600.

[4]凌秀凤，童华.外阴阴道念珠菌感染研究进展[J].国外医学妇幼保健分册，2003，14（3）：153.

[5]张登霞，戴荫梅.滴虫性阴道炎的临床研究进展[J].中华临床医学研究杂志，2003，6（9）：11494.

[6]唐振华，陆庭嫣，潘卫民.真菌性阴道炎的病原菌特点及药敏分析[J].上海检验医学杂志，2002，17（3）：173-174.

[7]臧嘉，吴高雄，张晨辉.真菌性阴道炎的病原菌分布及药敏分析[J].中国妇幼保健，2008，23（3）：425-426.

[8]陈小红，邱先桃，鲍俊杰，等.婦科门诊患者阴道真菌感染和抗真菌药物敏感性分析[J].广东医学，2010，31（16）：2119-2121.

编辑/成森endprint