采用HPLC-RID 法评估市售注射用奥美拉唑钠专用溶媒中PEG400 含量

刘晓强，付金凤，鲁 涓

（常州市食品药品纤维质量监督检验中心，江苏 213102）

注射用奥美拉唑临床多作为当口服疗法不适用时十二指肠溃疡、胃溃疡、反流性食管炎及Zollinger-Ellison 综合征的替代疗法，临床效果显著，应用十分广泛［1-3］。注射用奥美拉唑（推注型）配有专用溶媒，溶媒中含有聚乙二醇400（PEG400）以及pH 调节剂等。PEG400 与生物膜具有良好的组织相容性和亲和性，可显著提高药物在体内的血药浓度，是一种常用的保湿剂增溶剂，多用于口服液、滴眼液、注射液液体制剂等［4］。但静脉注射PEG400 可导致溶血反应，因此明确该溶媒中PEG400 含量对药物安全性研究具有重要意义。

1 仪器与试药

1.1 试药 PEG400 对照品（批号20191009，南京威尔化工有限公司）；实验用水：去离子纯净水（自制）；注射用奥美拉唑（推注型）来源于4 个厂家：批号A102541、A102542、A102543 来源生产企业A（原研厂家），批号B114837、B114838、B114839 来源于生产企业B，批号V137625、V137626、V137627 来源于生产企业C，批号X342684、X342685、X342686 来源于生产企业D。

1.2 仪器 电子天平：METTLER TOLEDO XS105DU；高效液相色谱仪：岛津LC-20A+示差检测器；Milli-Q 纯水机（美国Merck）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为PL aquagel OH 20（300 mm×7.5 mm，5 μm）色谱柱1 及PL aquagel OH 20（300 mm×7.5 mm，8 μm）色谱柱2，流动相为水，柱温为45 ℃，流速为1.0 ml/min，进样量为10 μl，检测器温度为40 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照溶液的制备

2.2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取PEG400 对照品约40 mg，置10 ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为4 mg/ml 的对照品溶液。

2.2.1.2 线性溶液的制备 精密称取PEG400 对照品约10 g，置100 ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为100 mg/ml 的对照品储备溶液。依次取上述对照品储备液适量2、3.2、2、4.8 和3 ml，分别置100、100、50、100 和50 ml 量瓶中，加水逐级稀释配制成含PEG400 浓度分别为2、3.2、4、4.8 和6 mg/ml 的系列溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品2 ml，置200 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得。

2.2.3 系统适用性溶液的制备 同对照品溶液的制备方法制备。

2.3 专属性试验 取空白溶剂水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同样品溶液）、对照品溶液以及样品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样，采集色谱图。结果表明，空白溶剂水、不含PEG400 的溶媒溶液均未在待测成分PEG400 处出峰，未干扰检测。见图1。

图1 空白溶剂（A）溶媒（B）对照品（C）供试品（D）色谱图

2.4 线性试验 按“2.2.1.2”项下方法制备溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，制备标准曲线。以对照品峰面积（Y）对浓度（X）作权重回归计算，结果如下：Y=58 875X+3 069（r=0.999 99）。结果表明：PEG400在2.0～6.0 mg/ml 的范围内线性关系良好，符合要求。

2.5 检测限与定量限 定量限溶液的制备方法：精密量取标准曲线1 溶液5 ml，置50 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得（0.2 mg/ml）。取上述溶液按“2.1”项下色谱条件进样。结果表明PEG400 的信噪比为17.7，定量限为0.2 mg/m（l进样量为10 μl），满足检测要求。检测限溶液的制备方法：精密量取标准曲线1 溶液4 ml，置100 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得（0.08 mg/ml）。取上述溶液按“2.1”项下色谱条件进样。结果表明PEG400 的信噪比为6.9，检测限为0.08 mg/m（l进样量为10 μl），满足检测要求。

2.6 重复性试验 按“2.2.2”项下方法平行制备供试品（批号为B114839）溶液6 份，按“2.1”项下色谱条件进样，测得含量依次为402.46、400.12、402.60、400.49、401.64 和399.66 mg/ml，均值为401.16 mg/ml，RSD 为0.7%，重复性良好。

2.7 中间精密度试验 由3 位实验人员分别于3 d按“2.2.1.1”及“2.2.2”项下方法制备对照品溶液各1 份以及供试品（批号为B114839）溶液各6 份，分别采用仪器1、2、3 按“2.1”项下色谱条件进样分析，测得含量依次为402.46、400.12、402.60、400.49、401.64、399.66、418.82、414.52、409.51、414.51、417.74、409.26、406.44、406.22、408.95、405.88、406.94 和406.25 mg/ml，均值为407.33 mg/ml，计算得RSD 为1.5%，该检测方法中间精密度良好。

2.8 准确度（回收率）试验 依次精密称取PEG400对照品320、400 和480 mg，分别置100 ml 量瓶中，精密加入不含PEG400 的溶媒1 ml，摇匀，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，平行制备3 份。依次取上述溶液按“2.1”项下色谱条件进样，结果PEG400 低、中、高不同浓度溶液准确度均在100%左右，均值为100.33%，RSD 为0.4%。平行性良好，该方法准确度良好。见表1。

表1 准确度试验结果（n=9）

2.9 耐用性试验

2.9.1 柱温耐用性 依次改变柱温（40 和50 ℃），取空白溶剂水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同样品溶液）、对照品溶液以及样品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样，采集色谱图。PEG400 与相邻色谱峰之间的分离度符合要求。

2.9.2 流速耐用性 依次改变流速为0.8 和1.2 ml/min，取空白溶剂水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同样品溶液）、对照品溶液以及样品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样，采集色谱图。PEG400 与相邻色谱峰之间的分离度符合要求。

2.9.3 仪器耐用性 依次采用waters2695+2414 示差检测器旧款、waters2695+2414 示差检测器新款，均使用色谱柱1，取空白溶剂水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同样品溶液）、对照品溶液以及样品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样，采集色谱图。PEG400 与相邻色谱峰之间的分离度符合要求。

2.9.4 色谱柱耐用性 依次采用色谱柱1、色谱柱2、色谱柱1 和色谱柱2 串联，采用仪器3 取空白溶剂水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同样品溶液）、对照品溶液以及样品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样，采集色谱图。PEG400 与相邻色谱峰之间的分离度符合要求。

2.10 样品测定 取4 个厂家12 个批次注射用奥美拉唑钠样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果各厂家注射用奥美拉唑钠专用溶媒中PEG400 含量均在390 mg/ml 左右。见表2。

表2 4 家生产企业样品测定结果（n=2） mg/ml

3 讨论

仿制药一致性评价要求仿制药与原研制剂质量一致，即处方无差异［5-8］。处方无差异即处方成分和含量均无差异。就注射用奥美拉唑钠（推注型）这个品种，其专用溶媒中的PEG400 就是一致性评价关注的重点和难点之一。

PEG400 属于大分子化合物，日常使用的C18、C8柱等均无法用于分析该化合物，目前尚无适用性较强的液相色谱检验方法。本试验采用的是凝胶渗透色谱（GPC）/体积排阻色谱（SEC）柱，结合高效液相色谱法及示差检测器，建立了可以用于定量分析注射用奥美拉唑钠（推注型）专用溶媒中PEG400 含量的方法。试验发现，使用中国食品药品检定研究院的PEG400对照品（供分子量与分子分布测定用）在现有试验条件下进样，可以出3 个色谱峰（分别对应3 个分子量的PEG400），推测该方法可以用于PEG400 的分子量与分子分布测定。

关于色谱柱的冲洗和存放，本试验用的色谱柱最高仅能耐受50%甲醇水溶液，故在使用完色谱柱冲洗时，请避免使用常规柱冲洗方法，避免对色谱柱造成不可逆损害。官方建议的色谱柱保存条件是0.02%叠氮化钠溶液，若无法满足，也可保存在10%甲醇溶液中，若保存在10%甲醇溶液中，再次使用时需用足量的水冲洗该色谱柱以充分恢复柱效。

综上所述，本试验建立了注射用奥美拉唑溶媒中PEG400 的HPLC-RID 测定方法，并考查了其专属性、线性、重复性、中间精密度、回收率、耐用性等，考查项目均符合检测要求，可用于注射用奥美拉唑溶媒中PEG400 的含量测定。