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天丹通络胶囊中总黄酮的含量测定

2015-11-03江苏省苏北人民医院225001卢善亮

首都食品与医药 2015年18期
关键词:乙醇溶液锥形瓶量瓶

江苏省苏北人民医院(225001)卢善亮

天丹通络胶囊是用于脑血管疾病的一种中成药,具有活血通络,熄风化痰的功效。药理学试验结果显示,天丹通络胶囊具有抑制血液凝血系统、提高血液纤活性、抑制血栓形成、促进血栓溶解、抗脑缺血作用,主要用于中风中经络,风痰淤血痹阻脉络证,症见半身不遂、偏身麻木、口眼歪斜、语言蹇塞;脑梗死急性期、恢复早期见上述证候者。天丹通络胶囊主要含川芎、槐花、豨莶草、丹参、水蛭、天麻、石菖蒲、人工牛黄、黄芪、牛膝等10味中草药。其中主味药槐花的主要成分为黄酮,本文采用分光光度法测定天丹通络胶囊中总黄酮的含量,方法操作简便,快速可靠,完全可以用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Cary50型紫外可见分光光度计(美国瓦里安中国有限公司);JA2003电子天平(上海精科天平厂);KQ-400KDB型高功率数控超声器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 芦丁对照品(厂家提供,批号20090508),天丹通络胶囊(山东凤凰制药,批号0912221,1003205,1005209);其余试剂均为分析纯。

附表1 提取方法考察(The test of extraction way)

附表2 提取时间的考察(The test of extraction time)

附表3 加样回收率实验(The determination of recovery rate)

附表4 样品测定(The assay of the samples)

2 实验方法与结果

2.1 对照品溶液的制备[1]精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品100mg,置50mL量瓶中,加甲醇30mL,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密吸取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,得芦丁对照品溶液。

2.2 线性关系的考察 精密量取芦丁对照品溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL,分别置25mL量瓶中,各加水6mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL,使混匀,放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10mL,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,在500nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,得回归方程为y=0.011x-0.0194 (r=0.9999),表明在8~48μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.3 提取方法的考察[2]

2.3.1 取胶囊内容物1.5g,于60℃干燥1小时,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚120ml,加热回流至提取液无色,放冷,弃去乙醚液。再加甲醇9 0 m L,加热回流至提取液无色,移置100mL量瓶中,用甲醇少量洗涤容器,洗液并入量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀[1]。精密量取10mL,置2 5 m L 量瓶中,加水至刻度,摇匀即得。精密量取1mL置2 5 m L 量瓶中,按2.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。

2.3.2 取胶囊内容物1g,于60℃干燥1小时,精密称定,置于50mL锥形瓶中,分别加入60%,70%,80%的乙醇溶液,超声波振荡1小时后,取续滤液10ml,置100mL量瓶中精密量取3mL置25mL量瓶中,按2.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。结果见附表1。结果为70%的乙醇超声波振荡提取的方法提取率最高。

2.4 提取时间的考察 取胶囊内容物1g,于60℃干燥1小时,精密称定,置于50mL锥形瓶中,分别加入50mL70%的乙醇溶液,分别超声波振荡10min、20min、30min、45min、1h、2h、3h小时,用水补足,过滤,取续滤液10ml,置100ml量瓶中。精密量取3ml置25ml量瓶中,按2.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。结果见附表2。由附表2可知,超声波振荡1h提取率最高。

2.5 重复性实验 取本品粗粉5份,每份约1g,精密称定,置于50ml锥形瓶中,分别加入50mL 70%的乙醇溶液,分别超声波振荡1h,用水补足,过滤,取续滤液10ml,置100ml量瓶中。精密量取3ml置25ml量瓶中,按2.1.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。RSD=0.4%(n=5),表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性实验 取样品适量,精密称定,置于50mL锥形瓶中,加入70%的乙醇溶液,超声波振荡1h,取续滤液10mL,置100mL量瓶中,精密量取3mL置25mL量瓶中,按2.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。每隔1h测定一次,连续测定5h,RSD=0.8%,表明样品溶液在5h内稳定。

2.7 加样回收率实验 精密称取天丹通络胶囊胶囊内容物约0.8g(6份),分别加入对照品约0.10g,于50mL锥形瓶中,加入70%的乙醇溶液,超声波振荡1h,取续滤液10mL,置100mL量瓶中,精密量取3mL置25mL量瓶中,按2.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。结果见附表3。

2.8 样品测定 精密称取天丹通络胶囊内容物约1.0g(3份,3个批号),置于50ml锥形瓶中,加入70%的乙醇溶液,超声波振荡1h,取续滤液10ml,置100ml量瓶中精密量取3ml,置25ml量瓶中,按2.2项下方法,在500nm的波长处测定吸收度。按标准曲线计算总黄酮的含量,结果见附表4。

3 讨论

3.1 天丹通络胶囊是脑疾病患者常用药物。目前尚未有对其进行质量控制的报道。本方法采用分光光度法,测其所含总黄酮的量,方法简便易行,结果准确,是对天丹通络胶囊进行质控的良好的方法。

3.2 笔者对总黄酮提取条件进行考察,索氏提取法是药典中所记载对槐花中异黄酮进行提取的方法。但实验过程中发现,索氏提取法方法繁琐,提取率不高,故采用超声波提取法进行提取,方法简便高效。

3.3 本文采用的硝酸铝显色法是药典中所记载的对总黄酮测定的方法。该方法用于各类中药的总黄酮测定中,准确可靠。

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