天丹通络胶囊中总黄酮的含量测定

江苏省苏北人民医院（225001）卢善亮

天丹通络胶囊是用于脑血管疾病的一种中成药，具有活血通络，熄风化痰的功效。药理学试验结果显示，天丹通络胶囊具有抑制血液凝血系统、提高血液纤活性、抑制血栓形成、促进血栓溶解、抗脑缺血作用，主要用于中风中经络，风痰淤血痹阻脉络证，症见半身不遂、偏身麻木、口眼歪斜、语言蹇塞；脑梗死急性期、恢复早期见上述证候者。天丹通络胶囊主要含川芎、槐花、豨莶草、丹参、水蛭、天麻、石菖蒲、人工牛黄、黄芪、牛膝等10味中草药。其中主味药槐花的主要成分为黄酮，本文采用分光光度法测定天丹通络胶囊中总黄酮的含量，方法操作简便，快速可靠，完全可以用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Cary50型紫外可见分光光度计(美国瓦里安中国有限公司)；JA2003电子天平（上海精科天平厂）；KQ-400KDB型高功率数控超声器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药 芦丁对照品（厂家提供，批号20090508），天丹通络胶囊（山东凤凰制药，批号0912221，1003205，1005209）；其余试剂均为分析纯。

附表1 提取方法考察（The test of extraction way）

附表2 提取时间的考察（The test of extraction time）

附表3 加样回收率实验（The determination of recovery rate）

附表4 样品测定（The assay of the samples）

2 实验方法与结果

2.1 对照品溶液的制备[1]精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置50mL量瓶中，加甲醇30mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，得芦丁对照品溶液。

2.2 线性关系的考察 精密量取芦丁对照品溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL，分别置25mL量瓶中，各加水6mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，使混匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，得回归方程为y=0.011x-0.0194 (r=0.9999)，表明在8～48μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.3 提取方法的考察[2]

2.3.1 取胶囊内容物1.5g，于60℃干燥1小时，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚120ml，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇9 0 m L，加热回流至提取液无色，移置100mL量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀[1]。精密量取10mL，置2 5 m L 量瓶中，加水至刻度，摇匀即得。精密量取1mL置2 5 m L 量瓶中，按2.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。

2.3.2 取胶囊内容物1g，于60℃干燥1小时，精密称定，置于50mL锥形瓶中，分别加入60%，70%，80%的乙醇溶液，超声波振荡1小时后，取续滤液10ml，置100mL量瓶中精密量取3mL置25mL量瓶中，按2.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。结果见附表1。结果为70%的乙醇超声波振荡提取的方法提取率最高。

2.4 提取时间的考察 取胶囊内容物1g，于60℃干燥1小时，精密称定，置于50mL锥形瓶中，分别加入50mL70%的乙醇溶液，分别超声波振荡10min、20min、30min、45min、1h、2h、3h小时，用水补足，过滤，取续滤液10ml，置100ml量瓶中。精密量取3ml置25ml量瓶中，按2.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。结果见附表2。由附表2可知，超声波振荡1h提取率最高。

2.5 重复性实验 取本品粗粉5份，每份约1g，精密称定，置于50ml锥形瓶中，分别加入50mL 70%的乙醇溶液，分别超声波振荡1h，用水补足，过滤，取续滤液10ml，置100ml量瓶中。精密量取3ml置25ml量瓶中，按2.1.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。RSD=0.4%(n=5)，表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性实验 取样品适量，精密称定，置于50mL锥形瓶中，加入70%的乙醇溶液，超声波振荡1h，取续滤液10mL，置100mL量瓶中，精密量取3mL置25mL量瓶中，按2.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。每隔1h测定一次，连续测定5h，RSD=0.8%，表明样品溶液在5h内稳定。

2.7 加样回收率实验 精密称取天丹通络胶囊胶囊内容物约0.8g（6份），分别加入对照品约0.10g，于50mL锥形瓶中，加入70%的乙醇溶液，超声波振荡1h，取续滤液10mL，置100mL量瓶中，精密量取3mL置25mL量瓶中，按2.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。结果见附表3。

2.8 样品测定 精密称取天丹通络胶囊内容物约1.0g（3份，3个批号），置于50ml锥形瓶中，加入70%的乙醇溶液，超声波振荡1h，取续滤液10ml，置100ml量瓶中精密量取3ml，置25ml量瓶中，按2.2项下方法，在500nm的波长处测定吸收度。按标准曲线计算总黄酮的含量，结果见附表4。

3 讨论

3.1 天丹通络胶囊是脑疾病患者常用药物。目前尚未有对其进行质量控制的报道。本方法采用分光光度法，测其所含总黄酮的量，方法简便易行，结果准确，是对天丹通络胶囊进行质控的良好的方法。

3.2 笔者对总黄酮提取条件进行考察，索氏提取法是药典中所记载对槐花中异黄酮进行提取的方法。但实验过程中发现，索氏提取法方法繁琐，提取率不高，故采用超声波提取法进行提取，方法简便高效。

3.3 本文采用的硝酸铝显色法是药典中所记载的对总黄酮测定的方法。该方法用于各类中药的总黄酮测定中，准确可靠。