新癀片外用制剂镇痛模型的溶媒筛选及研究

侯红平，关斌，詹志学，张广平，陈西翌，高云航，宋玲，李晗，陈晓琳，陈腾飞，南淑华，叶祖光

新癀片是厦门中药厂有限公司生产的现代研制方，为国家中药保护品种，主要由三七、人工牛黄、珍珠层粉、肿节风、水牛角浓缩粉、红粬、猪胆汁膏、肖梵天花、吲哚美辛等药物组成。其中三七可活血化瘀、消肿止痛，人工牛黄具有清热解毒之功效，珍珠层粉燥湿敛疮，肿节风具有消肿止痛的作用，水牛角可清热消肿、凉血，红粬可起到化瘀的作用，猪胆汁可清热解毒、消肿止痛，肖梵天花具有活血消肿、清热解毒之功效，其中的西药成分吲哚美辛具有清热止痛、活血消肿的作用[1-2]。新癀片具有清热止痛、活血消肿作用。目前，临床发现新癀片除口服外，外用于骨性关节炎、带状疱疹、糖尿病足等方面亦具有明显的疗效[3-4]，但对于溶媒的使用临床医师往往根据其用药习惯，无统一的要求，不同溶媒对药效的影响缺乏研究数据的支撑。本研究采用2种镇痛模型，对新癀片目前在临床外用制剂常用的溶媒冷开水、醋和酒进行平行比较研究，为临床合理应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)实验动物：ICR小鼠，体质量18～22 g。(2)试剂试药：药品：新癀片，为淡棕灰色至棕色的片剂，每片含吲哚美辛6.8 mg，由厦门中药厂有限公司提供，批号：180327。扶他林凝胶，每克药膏含双氯芬酸二乙胺0.01 g，白色或淡黄色乳脂样乳膏，规格20 g/支，由北京诺华制药有限公司生产，批号：VP2012。溶媒：冷开水：实验动物饮用水，由易神州(北京)科技有限公司生产的RO-300型反渗透制水机制得，烧开后冷却待用。醋：海天白醋，5度，购于佛山市海天调味食品股份有限公司，生产日期：20190428，批号：HB082415C。酒：老即墨酒，酒精度：11.5 %VOL，常温、干燥保存，山东即墨黄酒厂有限公司生产，生产日期：201811198。不同溶媒溶解的新癀片配制：一定量的新癀片用研钵研成细末状，加入不同的溶剂冷开水、醋、酒溶媒混匀配置成膏状，4 ℃待用。(3)仪器：RCY-2热板测痛仪(上海益联医学仪器发展有限公司)，Sartorius BSA 3202S-CW天平(德国)，Sartorius BSA 8201-CW天平(德国)。

1.2 实验方法

1.2.1 给药剂量及方法：分组及给药剂量：(1)生理盐水组：给予生理盐水0.15 ml/只；(2)阳性对照组：给予扶他林凝胶0.15 ml/只；(3)溶媒水组：用冷开水溶解新癀片，1 片/ml，0.32 g/ml，0.2 ml/只，相当于3.2 g/kg；(4)溶媒醋组：用海天白醋溶解新癀片，1 片/ml，0.32 g/ml，0.2 ml/只，相当于3.2 g/kg；(5)溶媒酒组：用老即墨酒溶解新癀片，1 片/ml，0.32 g/ml，0.2 ml/只，相当于3.2 g/kg。给药面积：3 cm×2 cm。给药方法：所有组别小鼠均背部脱毛，将相应药物均匀涂抹在小鼠背部，按摩40周，促进吸收，覆盖纱布，医用胶带固定，动物单笼饲养，给药后4 h拆除固定纱布，用沾有纯净水的纱布擦拭残留在皮肤上的药物，连续给药3 d。

1.2.2 扭体实验：ICR小鼠60只，雌雄各半，18～22 g，动物适应性喂养2 d，根据小鼠体质量随机分为5组：生理盐水组、阳性对照组、溶媒水组、溶媒醋组、溶媒酒组，每组12只，雌雄各半。各组小鼠均按1.2.1项下给药剂量和给药方法给药3 d，第3天给药后40 min腹腔注射1%冰醋酸生理盐水溶液0.1 ml/10 g，比较各组小鼠首次出现扭体反应的时间(潜伏期)及20 min内发生扭体反应的次数。20 min内未出现扭体的小鼠，其潜伏期记为20 min。

1.2.3 舔足实验：ICR小鼠，雌性，18～22 g，适应性喂养2 d，给药前将小鼠放在预热至55 ℃的热板测痛仪上，以小鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈值，测定基础痛阈值，将反应潜伏期小于5 s、大于40 s和出现跳跃反应者剔除后选择小鼠60只，测定2次基础痛阈值，根据2次痛阈值的平均值并结合小鼠体质量随机分为生理盐水组、阳性对照组、溶媒水组、溶媒醋组、溶媒酒组，每组12只，给药剂量和给药方法按1.2.1项下，连续给药3 d，测定小鼠末次给药后30、60、120、180和240 min的痛阈值，大于60 s记为60 s。

2 结 果

2.1 扭体实验 阳性对照组、溶媒水组和溶媒酒组的潜伏期长于生理盐水组(P<0.05或P<0.01)，且溶媒水组和溶媒酒组的潜伏期长于溶媒醋组(P<0.05)。阳性对照组、溶媒水组、溶媒醋组和溶媒酒组扭体次数均少于生理盐水组(P<0.01)；溶媒水组、溶媒醋组和溶媒酒组小鼠的扭体反应次数比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同溶媒溶解的新癀片对醋酸导致疼痛模型的影响

2.2 舔足实验 各组动物基础痛阈值比较差异无统计学意义(P>0.05)。溶媒水组、溶媒醋组小鼠给药30、60、120、180和240 min痛阈值高于生理盐水组(P<0.05或P<0.01)，起效时间为给药后30 min，维持时间大于给药后240 min。阳性对照组、溶媒酒组小鼠给药后60、120、180和240 min痛阈值高于生理盐水组(P<0.05或P<0.01)，起效时间为给药后60 min，维持时间大于给药后240 min。见表2。

表2 不同溶媒溶解的新癀片对小鼠热板舔足时间影响

3 讨 论

新癀片具有活血化瘀、消肿止痛、镇痛抗炎、缓解肌肉痉挛等作用，临床应用较为普遍[5-6]。现代药理研究显示，新癀片外涂给药对大、小鼠水浴甩尾、小鼠醋酸扭体等温热刺激、化学刺激引起的疼痛有非常显著的镇痛作用，对小鼠耳肿、大鼠角叉菜胶足肿、棉球肉芽肿等急慢性炎性反应有非常显著的抑制作用[7]。临床研究表明，新癀片外用制剂可明显改善急性痛风性关节炎或者的症状和疼痛，具有确切的疗效[3,8]。

外用制剂的溶媒众多，包括冷开水、醋、酒等，效果不同。酒一般用高梁、大麦、米、甘薯、玉米、葡萄等为原料酿制而成，具有通血脉、行药势之功效[9-10]，常用于风寒痹痛、筋脉挛急、胸痹、心痛、脘腹冷痛，在临床上应用较为广泛。

本研究结果显示，在醋酸致小鼠疼痛模型上，除溶媒醋组小鼠的潜伏期与生理盐水组比较未见显著性差异外，水、酒溶媒组均显示出明显的镇痛作用。3组溶媒组扭体次数未见显著性差异，但从数据上可看出镇痛作用强弱顺序分别为：溶媒酒≥溶媒水>溶媒醋。在热刺激致小鼠疼痛模型上，3组溶媒组均显示出明显的镇痛作用，均可维持到给药后240 min。但起效时间存在差异，溶媒水组和溶媒醋组的起效时间为给药后30 min，溶媒酒组的起效时间为给药后60 min。从整体数据上可看出镇痛作用强弱顺序分别为：溶媒水>溶媒醋>溶媒酒。在两种疼痛模型上，溶媒导致的镇痛作用有所差异问题，我们又重复进行了热刺激致痛模型上三种溶媒的比较实验，结果显示，两次实验结果相近，三种溶媒的作用趋势相同。对结果进行分析，我们认为存在以下几种可能：(1)对于钝痛型疼痛，即化学刺激致痛模型，溶媒酒≥溶媒水>溶媒醋；(2)对于锐痛型疼痛，即热刺激致痛模型，溶媒水>溶媒醋>溶媒酒。鉴于溶媒水在两种疼痛模型上均作用显著，因此水应为最佳溶媒；(3)传统观念认为，酒或醋均具有一定的活血作用，但在该实验条件下未观察到与溶媒水比较的优势作用。具体原因有待进一步研究。

综上所述，新癀片外用制剂的溶媒中溶媒水的镇痛效果较佳，但不同溶媒的药效特点可能有所不同，需进一步研究和探索。