哮喘患儿外周血T淋巴细胞亚群、IL-5、IL-25水平变化及其与ACT评分的相关性研究

罗婷婷，胡梦娇，赵静利，程雨嘉，李青

宝鸡市人民医院儿科，陕西 宝鸡 721000

支气管哮喘属于儿童慢性呼吸系统多发病，可对人体健康造成严重损害。有调查显示，全球哮喘者有3亿多，其中我国临床发病率约为16%[1]。相关研究表明，Th1/Th2型免疫失衡(其中Th2优势应答)为导致哮喘气道炎症反应的基础[2]。而人体白介素25(IL-25)属于Th2细胞因子，主要由肥大细胞以及Th2细胞分泌。当前研究指出，IL-25能够协同Th2类有关细胞因子，与机体免疫反应中发挥重要作用[3]。亦有研究指出，白介素-5(IL-5)驱动的相应嗜酸性粒细胞(EOS)计数增多性呼吸道炎症为大部分哮喘患者共同特征[4]。近年来随着临床研究不断深入，已证实人体T淋巴细胞亚群(包括Th17细胞以及调节性T细胞等)能够参与气道炎症反应，其数量及功能失衡与哮喘的出现、病程进展存在紧密联系[5]。当前研究主要集中在对哮喘患者淋巴细胞亚群与相关细胞因子变化方面，关于其与哮喘病情控制关系的研究较少。为此，本文旨在探究哮喘患儿外周血T淋巴细胞亚群、IL-5、IL-25水平与哮喘控制测试(ACT)评分的相关性，希望为临床提供一定指导依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年5月至2020年6月宝鸡市人民医院收治的115例哮喘患儿作为观察组。纳入标准：(1)符合《支气管哮喘防治指南》[6]中有关诊断标准；(2)4～14周岁；(3)住院患儿；(4)家属对本次研究知情，自愿签署知情同意书。排除标准：(1)合并呼吸衰竭、肺部感染或者先天性心脏病等；(2)支气管畸形或者异物吸入者；(3)合并免疫系统疾病或者内分泌疾病等；(4)肿瘤患者。另选取同期在我院体检的50例健康儿童作为对照组。观察组中男性64例，女性51例；年龄4～14岁，平均(7.65±1.28)岁；体质量(22.78±4.06)kg。对照组中男性28例，女性22例；年龄4～14岁，平均(7.39±1.26)岁；体质量(22.95±4.13)kg。两组儿童的性别、年龄及体质量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。哮喘患儿依据临床表现分为缓解期组47例和急性发作期组68例。本研究经我院医学伦理委员会批注。

1.2 方法(1)检测方法：抽取对照组儿童入院检查时、观察组入院后空腹静脉血5 mL，采取3 000 r/min速率予以离心处理，取血清。通过八色流式细胞仪(型号：MACSQuant，购自德国Miltenyi Biotec)完成T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)的检测。通过Thermo Multiskan MK3酶标仪，使用酶联免疫吸附试验——双抗体夹心法进行IL-5与IL-25水平检测，相关试剂盒来自美国R&D公司，严格依据说明书完成操作过程。(2)采取哮喘控制测试评分表(ACT)[7]评估患儿哮喘控制情况，总分25分，控制良好：25分；基本控制：20～24分；未得到控制：＜20分。

1.3 观察指标比较缓解期组、急性发作期组与对照组儿童外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、IL-5、IL-25水平；比较缓解期组、急性发作期组儿童ACT评分。

1.4 统计学方法应用SPSS22.0统计软件分析数据。计数资料组间比较采用χ2检验；计量资料符合正态分布，以均数±标准差(±s)表示，组间两两比较采用独立样本t检验，多组比较采用单因素方差分析法，多组两两比较采用LSD-t检验法；采取Pearson相关性检验法分析T淋巴细胞亚群、IL-5、IL-25与ACT评分的相关性。检验水准α(双侧)=0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 缓解期组、急性发作期组与对照组儿童的T淋巴细胞亚群比较三组儿童的CD3+比较差异无统计学意义(P＞0.05)；急性发作期组儿童的CD8+明显低于缓解期组和对照组，且缓解期组明显低于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；急性发作期组儿童的CD4+、CD4+/CD8+明显高于解期组和对照组，且缓解期组明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 缓解期组、急性发作期组与对照组儿童的T淋巴细胞亚群比较(±s)Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

表1 缓解期组、急性发作期组与对照组儿童的T淋巴细胞亚群比较(±s)Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

注：与对照组比较，a P＜0.05；与缓解期组比较，b P＜0.05。Note:Compared with the control group,a P＜0.05;compared with the remission stage group,b P＜0.05.

组别急性发作期组缓解期组对照组F值P值例数68 47 50 CD3+(%)65.01±10.57 65.24±10.62 65.92±10.73 0.109 0.897 CD4+(%)54.78±7.06ab 51.16±7.75a 47.61±5.02 16.478 0.001 CD8+(%)37.02±5.24ab 40.19±6.23a 43.05±5.03 17.656 0.001 CD4+/CD8+1.57±0.28ab 1.40±0.25a 1.18±0.17 37.201 0.001

2.2 缓解期组、急性发作期组与对照组儿童的IL-5、IL-25水平比较急性发作期组儿童的IL-5、IL-25水平明显高于缓解期组和对照组，且缓解期组明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 缓解期组、急性发作期组与对照组儿童的IL-5、IL-25水平比较(±s)Table 2 Comparison of IL-5 and IL-25 levels among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

表2 缓解期组、急性发作期组与对照组儿童的IL-5、IL-25水平比较(±s)Table 2 Comparison of IL-5 and IL-25 levels among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

注：与对照组比较，a P＜0.05；与缓解期组比较，b P＜0.05。Note:Compared with the control group,a P＜0.05;compared with the remission stage group,b P＜0.05.

组别急性发作期组缓解期组对照组F值P值IL-25(pg/mL)57.24±8.96ab 48.73±8.05a 44.68±7.12 36.505 0.001例数68 47 50 IL-5(pg/mL)74.92±12.13ab 67.38±10.54a 50.86±9.85 69.476 0.001

2.3 缓解期组、急性发作期组儿童的ACT评分比较急性发作期组儿童的ACT评分为(16.15±2.76)分，明显低于缓解期组的(20.84±2.37)分，差异有统计学意义(t=9.479，P＜0.05)。

2.4 T淋巴细胞亚群、IL-5、IL-25水平与ACT评分相关性经Pearson相关性分析结果显示，CD8+与ACT评分呈显著正相关(P＜0.05)，CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25与ACT评分呈显著负相关(P＜0.05)，见表3。

表3 T淋巴细胞亚群、IL-5、IL-25水平与ACT评分相关性Table 3 Correlation of T lymphocyte subsets,IL-5,and IL-25 levels with ACT score

3 讨论

当前，临床尚未明确哮喘详细发病机制。近年来，免疫机制成为了哮喘患者发病中的一个研究热点，希望为哮喘诊治提供可靠指导。相关研究指出，哮喘发病以及发展和细胞免疫失衡具有紧密联系[8]。人体T淋巴细胞是细胞免疫反应主要执行者，其在受刺激信号影响之后，能够分化为各种亚群，T淋巴细胞亚群失衡于人体哮喘发生中发挥着重要作用[9]。通常情况下，T淋巴细胞依据功能分为抑制性T细胞(Ts)、辅助性T细胞(Th)以及杀伤T细胞(Tc)等，依据表面标志可以分为CD4+以及CD8+两大亚群，其中CD4+属于Th，CD8+属于Ts/Tc。现阶段，大部分学者认可的观点是哮喘患者处于Th1/Th2亚群失衡以及Th2功能亢状态，机体免疫平衡受损，导致哮喘发生[10]。当前亦有研究表明，CD8+T细胞以及CD8+CD28-T细胞均可参与哮喘患者免疫调节[11]。然而相关临床资料非常少。CD4+/CD8+值平衡为保持机体免疫平衡主要环节，当人体受到外界变应原刺激后，可使外周T淋巴细胞亚群产生异常变化，其中速发性哮喘患者以CD8+降低较为常见，迟发性哮喘则以CD4+升高较为多见[12]。本研究中CD8+为：急性发作期组＜缓解期组＜对照组，CD4+、CD4+/CD8+为：急性发作期组＞缓解期组＞对照组，组间比较差异有统计学意义，与上述研究观点基本一致。说明哮喘患儿外周血T淋巴细胞亚群失衡，其中以急性发作期患儿CD8+减少、CD4+与CD4+/CD8+异常升高更明显。以往研究表明，CD8+细胞能够通过抑制免疫球蛋白E(IgE)分泌、纠正Th1/Th2失衡以及抑制气道炎症等方式对哮喘起到保护作用[13]。本研究中CD8+在不同临床表现患儿中比较结果反向支持了上述研究理论。

IL-25为目前新发现的一种Th2细胞因子，能够导致Th2细胞因子于人体气道中增多、上皮细胞增生以及嗜酸性粒细胞(EOS)浸润，使得黏液分泌增多，造成气道高反应性[14]。相关研究指出，哮喘患者血清里面IL-25表达水平升高，其能对气道内部平滑肌细胞增殖起到促进作用，为引起气道重塑重要影响因素[15-16]。本研究中，哮喘患儿IL-25水平明显高于对照组，且急性发作期组明显高于缓解期组，表明哮喘患儿出现了IL-25表达水平异常升高表现，且急性发作期患儿升高更显著。主要由于Th2细胞大量增生、亢进造成正调节因子IL-25表达上调，而哮喘进入缓解期后，Th1/Th2失衡有所改善。有研究对小鼠采取抗IL-5抗体，发现可有效抑制抗原所致呼吸道EOS浸润，同时该变化具有剂量依赖性[17]。亦有研究表明，IL-5可对EOS分化、成熟以及大量聚集起到促进作用，参与哮喘患者的呼吸道重塑[18]。本研究中IL-5为：急性发作期组＞缓解期组＞对照组，组间差异有统计学意义，与刘函晔等[19]研究观点一致。说明哮喘患儿IL-5水平呈现异常升高变化，其中急性发作期患儿表现更严重。分析原因：EOS属于哮喘发生重要炎性细胞，IL-5为其特异分化因子，而哮喘急性发作期EOS炎症更严重，因此IL-5水平更高[20]。本研究相关性分析发现，CD8+、CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25均和患儿ACT评分显著相关，哮喘控制越好，CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25水平越低，CD8+升高，临床可通过其检测评估哮喘患儿病情控制情况。

综上，哮喘患儿出现了T淋巴细胞亚群失衡改变，且IL-5、IL-25呈现异常升高趋势，其中以急性发作期更严重，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25表达水平和患儿ACT评分存在显著相关性，临床可根据其检测有效评估患儿病情。本研究具有样本量较少、为单中心研究等局限性，有待后续大样本与多中心研究进一步补充、完善。