卵巢癌中核因子－κB与血管内皮生长因子及IL-2的表达

罗浩，刘四清

（川北医学院附属第二医院妇产科，绵阳 621000）

卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，卵巢癌的病死率在各类妇科肿瘤中较高。核因子－κB（NF-κB）是核转录调节因子，它在调控细胞增殖与凋亡的过程中发挥着重要作用，一般情况下，NF-κB在细胞胞浆中没有活性，当化疗药物、射线等因素刺激时，即发生磷酸化、泛素化，NF-κB随之活化并转位入核，调节靶基因的转录。目前，已有学者［1，2］提出 NF-κB及其信号通路是肿瘤治疗的一个策略。为此，本研究拟探讨NF－κB通道的激活及其与肿瘤血管形成的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集本院2008年～2014年卵巢癌患者47例，年龄25～75岁。患者均接受了卵巢切除术，且均为首次发病，未接受过化疗、放疗及药物治疗。患者术后行病理检测，Ⅰ期组12例，Ⅱ期组20例，Ⅲ/Ⅳ期组15例，另选正常卵巢20例为对照组。所有患者在我院手术室切取标本后，立即在肿瘤组织处取1 cm×1cm×1cm大小组织块。

1.2 实验试剂与器材

NF-κB抗体、IL-2抗体、血管内皮生长因子（VEGF）抗体、SABC免疫组化染色试剂盒和DAB显色试剂盒等（所有试剂均购于上海研卉生物科技有限公司），Olympus光学显微镜、光学显微镜照相系统和Image-Pro Plus图像分析系统等。

1.3 免疫组织化学方法（SABC）测定 NF－κB、IL-2和VEGF的表达

采用SABC法，步骤简述如下：1）切片常规脱蜡至水，3%H2O2室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶的活性；2）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min；3）用山羊血清封闭液封闭，室温孵育10min，倒去血清，0.02%PBS漂洗5min×3次；4）滴加一抗，其中P-JAK2（1∶500）、P-STAT3（1∶350）于4℃冰箱过夜，0.02%PBS漂洗5min×3次，再用PBS取代一抗用作空白对照；5）加入二抗，室温孵育20min，0.02%PBS漂洗5min×3次；6）滴加试剂SABC（1∶100），室温孵育2h，0.02%PBS漂洗5min×3次；7）DAB染色；8）自来水冲洗，苏木素轻度复染，然后进行脱水、透明和封片。

1.4 统计学方法

采用Image-Pro Plus 5.0软件分析 NF－κB、IL-2和VEGF蛋白阳性表达的累积光密度值（IOD），并计算平均值，以均数±标准差（±s）表示。采用SPSS 19.0统计软件进行统计分析，组间均数两两比较采用独立样本的t检验，取检验水准α＝0.05。

2 结果

2.1 卵巢癌组织中 NF－κB、VEGF和IL-2蛋白的表达

对照组可见少量NF－κB、VEGF和IL-2蛋白的表达；与对照组比较，Ⅰ期组、Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF-κB、VEGF和IL-2表达均增多（P＜0.05）；与Ⅰ期组比较，Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF－κB、VEGF表达均增多（P＜0.05），IL-2表达均减少（P＜0.05）；与Ⅱ期组比较，Ⅲ/Ⅳ期组NF－κB、VEGF表达增多（P＜0.05），IL-2表达均减少（P＜0.05）（见表1、图1）。

表1 各组NF-κB、VEGF和IL-2蛋白的表达（±s）

与对照组比较，▲P＜0.05；与Ⅰ期组比较，★P＜0.05；与Ⅱ期组比较，●P＜0.05

20 0.75±0.14 1.47±0.69 0.62±0.29Ⅰ期组 12 35.79±1.99▲ 30.92±2.07▲ 54.39±2.63▲Ⅱ期组 20 64.94±1.09▲★ 48.20±4.31▲★ 41.84±2.29▲★Ⅲ/Ⅳ期组 15 85.08±1.39▲★● 65.67±3.12▲★● 20.51±1.65 B VEGF IL-2对照组分组 n NF-κ▲★●

2.2 Ⅰ期组、Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF-κB与VEGF、IL-2表达的相关分析

Ⅰ期组、Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF-κB与VEGF呈正相关（r＝0.845，r＝0.763，r＝0.819，P＜0.05），与IL-2呈负相关（r＝-0.634，r＝-0.781，r＝-0.598，P＜0.05）。

3 讨论

NF-κB是由大鼠B淋巴细胞核提取的一种能与免疫球蛋白K轻链增强子κB序列（GGGACTTTCC）特异性结合的核蛋白因子，它由NF-κB1（p50）、NF-κB2（p52）、RelB、RelA（p65）和c-Rel（Rel）组 成，其 中 NF－κB1 基 因 编 码 NF－κB1（p50），NF-κB2基因编码 NF-κB2（p52），RelA 基因编码 RelA（p65），REL基因编码c-Rel。NF-κB家族可分为两类：1）含转录激活的区域，它可正向调节基因的表达，包括p65（RelA）、c-Rel（Rel）、RelB；2）不含转录激活的区域，它的二聚体可抑制转录，包括NF-κB1（p50）、NF-κB2（p52）。NF-κB 转录调节因子在细胞的生存、增殖、分化和凋亡，蛋白酶的降解，免疫反应、炎症反应和应激反应以及氧化还原反应等方面 有转录 调节作 用［3－6］。通 常情况下，NF-κB与IκB或DNA结合为二聚体而存在，当多种因素刺激时，如细胞因子、病毒、双链ANA、氧化剂、细菌脂多糖、多种抗原和紫外线照射等，通过信号转导途径使IκB磷酸化，然后通过蛋白水解酶作用发生降解，使NF－κB活化发挥调控作用［7］。本实验研究结果显示：Ⅰ期组、Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF－κB的表达均较对照组增多（P＜0.05），说明卵巢癌患者瘤组织内NF－κB通道被激活；Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF－κB的表达均较Ⅰ期组增多（P＜0.05），Ⅲ/Ⅳ期组NF-κB的表达较Ⅱ期组增多（P＜0.05），说明卵巢癌患者越到后期，NF-κB通道的表达越活跃。

图1 免疫组化法检测 NF-κB、VEGF、IL-2蛋白的表达

国内外学 者［8，9］研究表 明，NF-κB 对血管 的 形成有重要调节作用。常见的血管生长因子有碱性成纤维母细胞生长因子（bFGF）、酸性成纤维母细胞生长因子、VEGF、血管生成素、转化生长因子α和β、肿瘤坏死因子α、血小板来源的内皮细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子、胎盘生长因子、白细胞介素-8、肝细胞生长因子和增殖素等。血管抑制因子有血管抑素、内皮抑素、血小板因子-4、凝血栓蛋白、金属蛋白酶组织抑制剂、转化生长因子β、干扰素、胎盘增殖素相关蛋白、催乳素、bFGF溶解性受体蛋白、IL-2和可容性 VEGF受体（flt-1）等［10］。本实验研究表明：1）Ⅰ期组、Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组的VEGF、IL-2表达较对照组均增多（P＜0.05），说明卵巢癌组织中有血管的形成。2）Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组VEGF的表达均较Ⅰ期组增多（P＜0.05），IL-2的表达较Ⅰ期组均减少（P＜0.05）；Ⅲ/Ⅳ期组VEGF的表达较Ⅱ期组增多（P＜0.05），IL-2的表达较Ⅱ期组均减少（P＜0.05），说明卵巢癌组织中血管生长因子越到后期表达越多，而血管抑制因子越到后期表达越少。3）Ⅰ期组、Ⅱ期组和Ⅲ/Ⅳ期组NF－κB与 VEGF呈正相关（P＜0.05），与IL-2呈负相关（P＜0.05），说明卵巢癌相关蛋白 NF-κB可通过上调VEGF的表达及下调IL-2的表达共同调节肿瘤血管的生成。

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