离子色谱法测定鹿瓜多肽注射剂中钾离子和草酸根离子的含量

马 冰，苏 喆，韩晓捷

（天津市药品检验研究院，天津 300070）

钾离子是人体内的重要阳离子，血清中的钾离子对维持体液酸碱平衡和渗透压稳定起着至关重要的作用，而细胞中的钾离子是稳定神经、肌肉及细胞生物电活动的主要离子［1-4］。若细胞内钾离子减少则内液渗透压降低，并出现心肌自动节律异常；若钾离子增加，则会出现心肌过度舒张，还会引起严重的心脏传导、收缩异常，甚至导致死亡。泌尿系结石是生活中常见且多发性的疾病，发病率高达10%~15%，我国泌尿系结石的成分90%以上的是草酸钙结石［5-9］。而引起此结石的元凶就是在人体内无法降解的草酸盐，当人体处理草酸盐的能力受损时，多余的草酸盐与钙形成草酸钙晶体沉积在关节处，造成身体的机械磨损；其还可与镁、锌、铁等金属离子结合形成沉淀，引起人体内的必需矿物质缺乏。

鹿瓜多肽注射剂中含有中药成分甜瓜子，根据《中国药典》2020年版四部通则2400注射剂有关物质检查法［10］中规定：“注射剂有关物质系指中药材经提取、纯化制成注射剂后，残留在注射剂中可能含有并需要控制的物质。除另有规定外，一般应检查蛋白质、鞣质、树脂等，静脉注射液还应检查草酸盐、钾离子等。”但在《中国药典》中检查草酸盐采用的是与氯化钙生成沉淀法，检查钾离子采用的是与碱性甲醛反应生成浑浊的浊度法，这些方法都具有灵敏度低、专属性差、易受注射剂中辅料成分干扰而造成假阴性结果等特点。离子色谱法具有灵敏度高及专属性强等多重特点，因此，本文分别建立了离子色谱法分别测定鹿瓜多肽注射剂中钾离子和草酸根离子，并用该方法测定了不同企业样品中的钾离子和草酸根离子含量，为进一步提高含中药成分的多组分生化药的质量标准提供了依据。

1 仪器与试药

钾离子：Thermo DIONEX ICS-5000+离子色谱仪，配有CERS-500（4 mm）阳离子抑制器，Chromeleon色谱工作站；草酸根离子：Thermo DIONEX ICS-5000+离子色谱仪，配有AERS 500（4 mm）阴离子抑制器，Chromeleon色谱工作站；XS205电子天平（METTLER TOLEDO）。钾离子标准溶液［四川中测标物科技有限公司国家标准物质，批号GBW（E）082043，质量浓度1 000μg/ml］；草酸钠基准物［四川中测标物科技有限公司国家标准物质，批号GBW（E）060312，纯度为99.98%］；鹿瓜多肽注射液（A企业5批次，批号181113、181206、181202、180628、181010），注射用鹿瓜多肽（B企业5批次，批号120180321、220180309、220190104、220180118、120180606；C企业5批次，批号1801301、1812306、1804302、1902302、1803303）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 钾离子色谱条件：色谱柱为Dionex IonPac CS12A（250 mm×4 mm，8μm）；保护柱为Dionex IonPacTM CG12A（50 mm×4 mm，8μm）；淋洗液为20 mmol/L MSA溶液；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；进样25μl。草酸根离子色谱条件：色谱柱为Dionex IonPac AS11-HC（250 mm×4 mm，9μm）；保护柱为Dionex IonPac AG11-HC（50 mm×4 mm，9μm）；淋洗液为30 mmol/L KOH溶液；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；进样25μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

2.2.1.1 钾离子对照品溶液的制备 精密量取钾离子标准溶液（1 000μg/ml）1 ml，置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为钾离子对照品溶液（40μg/ml）。

2.2.1.2 草酸根离子对照品溶液的制备 精密称取草酸钠基准物152.57 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为草酸根离子对照品贮备液（约1 000μg/ml）；精密量取上述溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取上述溶液1 ml，置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为草酸根离子对照品溶液（约1μg/ml）。

2.2.2 供试品溶液的制备 取鹿瓜多肽注射液（A企业，2 mg/ml以多肽计），精密量取样品溶液1 ml，置5 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取注射用鹿瓜多肽（B、C企业），用水溶解并稀释制成2 mg/ml的溶液（以多肽计），精密量取此溶液1 ml，置5 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 空白溶剂的制备 取超纯水作为空白溶剂。

2.3 系统适用性试验 钾离子测定：取钾离子对照品溶液、供试品溶液及空白溶剂各25μl进样分析，空白溶剂在钾离子对照品出峰处无干扰，见图1（C）；钾离子理论塔板数为7 107，见图1（A）。草酸根离子测定：取草酸根离子对照品溶液、供试品溶液及空白溶剂各25μl进样分析，空白溶剂在草酸根离子对照品出峰处无干扰，见图2（C）；草酸根离子理论塔板数为6 630，见图2（A）。以A企业批号为181113的鹿瓜多肽注射液所制备的供试品溶液为例，钾离子与相邻峰的分离度为3.8，见图1（B），以B企业批号为220180309的注射用鹿瓜多肽所制备的供试品溶液为例，草酸根离子与相邻峰的分离度为2.9，见图2（B），均大于1.5，符合要求。

图1 对照品（A）供试品（B）空白溶剂（C）离子色谱图

图2 对照品（A）供试品（B）空白溶剂（C）离子色谱图

2.4 线性关系试验

2.4.1 钾离子 精密量取钾离子标准溶液（1 000μg/ml）适量，加水稀释制成每1 ml中约含钾离子0.004、8、16、32、40、60和80μg的系列溶液，分别精密取上述溶液各25μl进样分析。以钾离子浓度为横坐标（C），以峰面积为纵坐标（A），进行线性回归计算。结果钾离子在0.004～80μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性方程为A=6.456 1C－0.099 7（r=0.999 9，n=7）。

2.4.2 草酸根离子 精密量取草酸根离子对照品贮备液（约1 000μg/ml）适量，加水稀释制成每1 ml中约含草酸根离子0.024 1、0.401、0.802、1.604、2.004和2.606μg的系列溶液，分别精密取上述溶液各25μl进样分析。以草酸根离子浓度为横坐标（C），以峰面积为纵坐标（A），进行线性回归计算。结果草酸根离子在0.024 1～2.606μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性方程为A=0.290 5C－0.002 9（r=0.999 9，n=6）。

2.5 精密度试验 钾离子：取钾离子对照品溶液（40μg/ml），连续进样6次，峰面积RSD为0.14%，保留时间RSD为0.06%。草酸根离子：取草酸根离子对照品溶液（约1μg/ml），连续进样6次，峰面积RSD为0.62%，保留时间RSD为0.05%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取B企业批号为220180309的注射用鹿瓜多肽，加水溶解并制成含2 mg/ml的样品溶液（以多肽计），平行制备6份供试品溶液，进样分析。结果供试品溶液（2 mg/ml以多肽计）平均钾离子含量为0.26 mg/ml，RSD为0.20%；平均草酸根离子含量为0.012 mg/ml，RSD为0.76%，表明该方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

2.7.1 钾离子 取B企业批号为220180309的注射用鹿瓜多肽，加水溶解并制成含2 mg/ml的样品溶液（以多肽计）作为样品回收溶液。分别精密量取此溶液1 ml置10 ml量瓶中，制备9份待用；分别精密量取钾离子标准溶液（1 000μg/ml）0.176、0.220和0.264 ml置上述10 ml量瓶中，每个质量浓度重复3份，将此9个量瓶加水稀释至度，摇匀，作为加样回收率试验溶液。取上述溶液进样分析，结果钾离子平均回收率为100.57%，RSD为1.70%。见表1。

表1 钾离子加样回收率试验结果（n=9）

2.7.2 草酸根离子 分别精密量取“2.7.1”项下样品回收溶液1 ml置10 ml量瓶中，制备9份待用；精密量取草酸根离子对照品贮备液（约1 000μg/ml）1 ml置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别量取此溶液0.096、0.120和0.144 ml置上述10 ml量瓶中，每个质量浓度重复3份，加水稀释至刻度，摇匀，作为加样回收率试验溶液。取上述溶液进样分析，结果草酸根离子平均回收率为96.38%，RSD为0.22%。见表2。

表2 草酸根离子加样回收率试验结果（n=9）

2.8 定量限与检测限

2.8.1 钾离子 取钾离子质量浓度为4 ng/ml的对照品溶液进样分析，信噪比约为10，钾离子定量限为0.10 ng；取钾离子质量浓度约为1 ng/ml的对照品溶液进样分析，信噪比约为3，检测限为0.03 ng。

2.8.2 草酸根离子 取草酸根离子质量浓度约为24.1 ng/ml的对照品溶液进样分析，信噪比约为10，草酸根离子定量限为0.60 ng；取草酸根离子质量浓度约为7.2 ng/ml的对照品溶液进样分析，信噪比约为3，检测限为0.18 ng。

2.9 样品测定 照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别选取了3个厂家共15批样品进行钾离子和草酸根离子的含量测定，样品溶液均以2 mg/ml多肽计，钾离子含量和草酸根离子含量结果见表3。

表3 样品溶液钾离子和草酸根含量测定结果

3 讨论

3.1 样品测定情况 为了便于在不同企业间横向比较，样品均制备成企业A样品标示的多肽浓度水平，即2 mg/ml（以多肽计）。企业B和C不同规格的冻干粉加水溶解并制成2 mg/ml（以多肽计）的样品溶液。由表3显示，3个企业样品溶液中钾离子含量介于0.10～0.34 mg/ml之间，整体趋势为企业B>企业A>企业C；草酸根离子含量介于0.002～0.012 mg/ml之间，企业B含量明显高于企业A和C，结果约为其他两家企业的2倍。3个企业数据离散程度较小，表明样品均一性良好。

3.2 限度讨论 根据《中国药典》有关规定计算得出静脉注射的含中药成分注射剂钾离子限度为不得过1 mg/ml，草酸根离子限度为不得过24 mg/ml，将样品按含鹿瓜多肽2 mg/ml的浓度计，检测的3个企业样品的钾离子和草酸根离子含量均符合规定。在临床上补钾一般依据血钾的情况使用口服制剂或者静脉滴注的方式。钾离子经静脉注射量过高则会引起严重后果，因此我们应更多关注病人每日由静脉所摄入的总钾量，如果病人已经在补钾，更要关注中药注射剂所带来的“隐性钾源”。而草酸盐亦是如此，我们每天摄取草酸的途径主要来源于食物，有些食物本身含草酸量很高，因此更需注意人体每日从不同渠道摄取的草酸盐总量。