银杏叶提取物对MK-801致精神分裂症小鼠模型的影响*

张红丽,丁永康,王艳芳,郭 叶

(包头医学院，内蒙古 包头 014040 )

精神分裂症(schizophrenia，SZ)是一种病因不明的精神疾病。根据临床上的症状主要可分为认知功能障碍(学习、记忆、解决问题能力障碍等)、阳性症状(幻听、妄想、幻觉)、 阴性症状(情感淡漠、快感缺失、社交退缩等)。近现代以来，精神分裂症的发病机制仍然没有明确，在临床上对于精神分裂症的治疗手段多采用对症治疗，不能根除，这严重影响着患者的生活质量和社会安全。以人作为实验对象进行实验在各方面受制约且进展缓慢，以动物模型进行实验研究可以更直观、便捷地模拟人的疾病症状，从而推进医药的发展进步。

银杏叶提取物(ginkgo biloba extract，GBE)是以银杏的叶为原料利用现代科技研发出的非常成功的中药。有大量研究表明银杏叶提取物成分多样，近几年已发现含有两百多种化合物，其中主要活性成分为黄酮和内酯等天然化合物[1]。研究表明，GBE对神经系统疾病有显著的治疗作用，对痴呆小鼠模型有治疗作用[2]，对抑郁症小鼠模型有明显改善作用[3]，但其对精神分裂症动物模型研究甚少。MK-801诱导的精神分裂症大鼠模型，是目前公认的理想动物模型之一，本研究采用此方法探讨银杏叶提取物对精神分裂症小鼠模型行为学的影响，为其临床应用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1主要仪器 小鼠自发活动箱自制(规格：40 cm长，40 cm高，40 cm宽)；Morris水迷宫(上海欣软信息科技有限公司，型号：XR-XM101)；行为学分析软件(上海欣软信息科技有限公司，型号：SuperMaze)；电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司，型号00000246。)

1.2试剂与药品 地卓西平马来酸盐(Dizocilpine maleate, MK-801，Sigma，批号：105M4606V)；生理盐水(陕西圣奥动物药业有限公司，批号：20200525)；银杏叶提取物片(德国威玛舒培博士药厂，批号：6880419)；利培酮片(西安杨森制药有限公司，批号：KDJ2TPH)；吐温80(天津市凯通化学试剂有限公司，批号：P1612688)。

1.3实验动物SPF级 ICR雄性小鼠，体质量25～30 g，均由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2019-0010。将小鼠饲养于温度适宜的环境中，使其自由饮水、摄食。

1.4实验方法

1.4.1分组和造模 实验前将 SPF 级雄性小鼠随机分为空白组(NS 组))、模型组、阳性药组、银杏叶提取物低、中、高剂量组共 6 组，每组 11 只，并把小鼠饲养于温度适宜的环境中，使其自由饮水、摄食。对 NS 组小鼠进行腹腔注射生理盐水；对其余各组小鼠进行腹腔注射 MK-801 0.3 mg/kg，给药容量为0.1mL/10g；对阳性药组小鼠腹腔注射利培酮0.1mg/kg；对银杏叶提取物低、中、高剂量组分别灌胃给药银杏叶提取物 50、100、50 mg/kg，给药容量为 0.2 mL/10g。1次/d，造模和给药同时进行，连续 15 d。连续给药第 9～13 d完成morris 水迷宫训练，通过对小鼠测试 Morris 水迷宫实验(14 d)、旷场实验(15 d)、强迫游泳实验(16 d)进行小鼠的行为学检测。

1.4.2行为学检测

1.4.2.1银杏叶提取物及MK-801对Morris水迷宫实验的影响 连续给药9～13 d将实验小鼠放入Morris水迷宫内作为正式测试前的训练，使小鼠熟悉水迷宫中平台的位置。实验开始前利用SuperMaze动物行为视频分析系统将水迷宫平均分为1、2、3、4四个象限并将平台固定于第一象限使其淹没于水下1cm处。小鼠从第一象限开始依次从4个不同象限分别进入，训练60 s，若小鼠没有找到平台则将小鼠引导到平台处停留15 s，连续训练5 d，记录训练第5 d的小鼠逃避潜伏期。连续给药第14 d正式开始测Morris水迷宫实验，将小鼠一次1只从第一象限的同一位置放入，使其在60 s内寻找平台(此时平台已经撤走)的位置，记录小鼠穿越平台位置的次数[4]。

1.4.2.2银杏叶提取物及MK-801对小鼠旷场实验的影响 造模及给药共15 d，末次给药后1 h，测旷场实验。用黑色开口的箱子作为旷场，利用uperMaze动物行为视频分析系统将旷场分成9个等面积的格子(3*3)，将小鼠从旷场同一位置放入，使其自由活动300 s，记录小鼠在5 min内的运动总路程。实验结束后将小鼠取出并用75 %乙醇清洁旷场，避免小鼠排泄物及气味对下一只待测小鼠造成干扰[5]。

1.4.2.3银杏叶提取物及MK-801 对小鼠强迫游泳的影响 NS组(0.1 mg/kg)、MK-801(0.3 mg/kg)、银杏叶提取物(50 mg/kg,100 mg/kg,150 mg/kg)造模15 d，末次给药后24 h进行强迫游泳测试。把小鼠单独放在装有25 ℃温水的强迫游泳烧杯内先适应2 min，测试小鼠6 min内的后4 min累计不动时间(不动的标准为在水中的小鼠停止挣扎，身体和鼻子浮出水面且身体保持不动)[6]。

2 结果

2.1银杏叶提取物对精神分裂症小鼠morris 水迷宫逃避潜伏期和穿越平台次数的影响 Morris 水迷宫实验小鼠逃避潜伏期数据分析显示：模型组小鼠逃避潜伏期明显延长， 穿越平台次数明显减少，与对照组比较具有显著性差异 (P< 0.01)，说明模型组小鼠的学习记忆功能受损；银杏叶提取物中、高剂量组小鼠和阳性药组小鼠逃避潜伏期明显减少，与模型组比较有显著性差异 (P< 0.05)，银杏叶提取物中剂量组和阳性药组小鼠穿越平台次数明显增多，与模型组比较有显著性差异 (P< 0.01)。见表1。

表1 银杏叶提取物对精神分裂症小鼠morris水迷宫实验的影响(n=11)

2.2银杏叶提取物对精神分裂症小鼠自主活动的影响 旷场实验小鼠运动总路程数据分析显示：模型组小鼠运动总路程明显增多，与对照组比较具有显著性差异 (P<0.05)，说明小鼠的自主活动增强；银杏叶提取物中、高剂量组小鼠运动总路程与模型组相比有显著差异性(P<0.01)，能显著提高小鼠的运动总路程。阳性药组与模型组比较小鼠运动总路程明显降低，具有显著性差异(P<0.05)，说明阳性药对治疗精神分裂症小鼠模型的自主活动增强有效果。见表2。

表2 银杏叶提取物对精神分裂症小鼠自主活动的影响(n=11)

2.3银杏叶提取物对精神分裂症小鼠强迫游泳的影响 强迫游泳实验小鼠不动时间数据分析显示：模型组小鼠不动时间明显延长，与对照组比较具有显著性差异(P<0.001)，说明小鼠的阴性症状造模成功；银杏叶提取物低、中、高剂量组小鼠不动时间明显缩短，与模型组比较有显著性差异(P<0.001)；阳性药组小鼠不动时间明显缩短，与模型组比较有显著性差异(P<0.001)，说明小鼠阴性症状经过治疗以后获得改善。见表3。

表3 银杏叶提取物对精神分裂症小鼠强迫游泳的影响(n=11)

3 讨论

精神分裂症(schizophrenia)是严重危害人类健康的精神性疾病，其病理过程十分复杂，彻底治愈难度较大，且易反复发作，目前以长期药物治疗为主要手段。但现有的抗精神分裂症的化学药物，临床治愈率低，不良反应多，治疗期长，迫切需要寻找更为经济、安全、有效的抗精神分裂症药物。通过动物实验对其机制进行深入研究尤为重要，可为临床药物的使用提供理论参考。

MK-801诱导的精神分裂症小鼠模型是公认的理想动物模型之一，操作方便，且有大量相关文献报道。NMDA受体拮抗剂能使健康小鼠出现精神分裂症中认知功能损害、阴性和阳性症状三大核心症状，小鼠腹腔注射0.5 mg/kg MK-801能制备精神分裂症小鼠模型，可使小鼠感觉运动门控受损害和认知功能损害[7]，使用0.3 mg/kg MK-801制造出记忆损坏的精神分裂症小鼠模型[8]。故本研究应用NMDA受体拮抗剂MK-801 0.3 mg/kg来制备精神分裂症小鼠模型，用旷场实验模拟阳性症状，Morris水迷宫模拟认知障碍损害，强迫游泳实验模拟阴性症状。

精神分裂症多属中医“癫狂”范畴，其病因病机与机体阴阳失衡或功能失调，导致气滞、痰结、血瘀，日久蒙蔽心窍或扰乱神明，引发神志异常，出现癫狂状态，常用理气解郁、化瘀通窍、豁痰泻火等法，银杏具有理气化痰、活血化瘀、化浊通络的作用，已有大量的银杏制剂用于精神分裂症的临床报道，银杏叶提取物(GBE)与其他药物合用在精神疾病的治疗中取得了较好的效果。银杏叶片能有效提高奥氮平治疗慢性精神分裂症的疗效，促进患者记忆能力的改善，且GEB对精神分裂症患者有治疗作用，以阴性症状和记忆障碍效果较好[9]，但银杏叶提取物对精神分裂症小鼠的相关实验研究甚少，故本实验通过考察银杏叶提取物对精神分裂症小鼠模型的影响，为银杏叶提取物的临床应用提供理论基础。

本实验中三种动物行为学检测方法morris水迷宫实验、旷场实验、强迫游泳分别检测精神分裂症小鼠模型的认知功能障碍、阳性症状、阴性症状。采用NMDA拮抗剂MK-8010.3 mg/kg制造精神分裂症小鼠模型，连续造模15 d，1次/d，检测结果均显示模型组具有显著性差异，说明精神分裂症小鼠模型造模成功。银杏叶提取物中高剂量组对精神分裂症小鼠模型的学习记忆能力(Morris水迷宫)和阴性症状(强迫游泳不动时间)有改善作用，且具有统计学意义。但本实验却对阳性症状(自主活动升高)没有改善作用，且使精神分裂症小鼠模型的自主活动升高，这可能与银杏叶提取物对小鼠脑内递质的影响有关。刘进等[10]发现银杏叶提取物能改善抑郁症小鼠模型的抑郁行为，银杏叶提取物能够增加多巴胺(dopamine, DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)、 5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)等多种神经递质水平，从而发挥抗抑郁作用，猜测银杏叶提取物对精神分裂症的作用亦与该机制相关，但精神分裂症的发病机制是多种且复杂的，对于银杏叶提取物对精神分裂症不同症状的治疗作用的机制，还需要进一步的实验验证，以期更好地为临床用药服务。