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老年食管癌组织CARLo-5表达及预后价值

2022-10-09郝立群

中国老年学杂志 2022年19期
关键词:引物食管癌淋巴结

郝立群

(吉林省肿瘤医院,吉林 长春 130000)

食管癌病理分型90%以上为鳞癌,具有较高的病死率,严重危害人们生命健康及影响患者生存质量〔1,2〕。食管癌患者主要采用根治性切除术治疗,但5年总体生存率仍较低〔3〕。目前,随着分子生物学研究已发现食管癌发生、发展中大量异常出现的分子事件,但关于食管癌早期诊断及预后判断分子标志物仍有限〔4,5〕。因此,早期诊断食管癌及预后判断分子标志物更深入研究有重要意义。肿瘤相关长链非编码RNA(CARLo)-5是新发现的一种具有2 628个碱基对长度的lncRNA,发现其在多种癌症中异常表达〔6〕。目前临床上关于CARLo-5与食管癌尚无报道,缺乏可靠的临床依据。本文探讨老年食管癌组织CARLo-5表达意义及预后价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取吉林省肿瘤医院2018年1月至2021年1月手术切除的老年食管癌组织和癌旁正常组织(距离癌组织≥5 cm)97例,男54例,女43例;年龄65~83〔平均(74.87±6.56)〕岁;体重指数17~29〔平均(23.24±2.17)〕kg/m2。纳入标准:①经病理学证实为食管癌;②年龄≥65岁;③具有完整的临床资料和随访资料。排除标准:①合并其他部位恶性肿瘤;②合并严重基础疾病;③重要脏器严重异常者。

1.2主要试剂与仪器 主要试剂:Trizol试剂(由美国Invitrogen公司提供),反转录试剂盒(由美国Thermo公司提供)。主要仪器:微量分光光度计(由美国赛默飞公司提供),聚合酶链反应(PCR)仪(由美国ABI公司提供),高速低温离心机(由德国Heraeus公司提供)。

1.3CARLo-5表达测定 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR),取癌组织及癌旁组织各50 mg,按照Trizol法提取组织RNA,采用微量分光光度计鉴定RNA浓度及纯度。以RNA为模板反转录为cDNA,再行qRT-PCR。反应体系:1 μl的模板cDNA,5 μl的2×SYBR Green Mix,0.2 μl的ROX Ⅱ,0.5 μl的上游引物,0.5 μl的下游引物,2.6 μl的无RNA酶水。反应条件:采用94℃预变性4 min,采用94℃变性30 s,采用60℃退火34 s,采用72℃延伸34 s,共40个循环。结果采用2-△△Ct法表示,每个样本重复3次。引物序列为CARLo-5上游引物:5′-GCCACAAATCAACAACAACAACAACAA-3′、下游:5′-AGAGTGATGCCAAGGCTGTTATTGTGAA-3′;GAPDH上游:5′-CGGATTTGGTCGTATTGGG-3′、下游:5′-TGCTGGAAGATGGTGATGGGATT-3′。

1.4预后评价 记录患者总生存期(OS),OS指从诊断日起至任何原因的死亡或随访末。所有食管癌患者随访至2021年10月,主要采取门诊复诊、电话、微信、上门随访等多种方式随访。

1.5统计学方法 采用统计学软件SPSS25.0,计量资料采用t检验,多组计量资料采用方差分析,计数资料采用χ2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法,组间生存情况比较采用Log-rank检验。采用Logistic回归分析影响食管癌预后独立危险因素。

2 结 果

2.1癌组织与癌旁组织CARLo-5 mRNA表达比较 癌组织CARLo-5 mRNA表达(2.73±0.46)显著高于癌旁组织(1.00±0.02;t=37.005,P<0.05)。

2.2不同病理特征CARLo-5 mRNA表达比较 不同性别、年龄、体重指数和肿瘤直径CARLo-5 mRNA表达无明显差异(P>0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期CARLo-5 mRNA表达显著高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);淋巴结转移CARLo-5 mRNA表达显著高于无淋巴结转移(P<0.05)。见表1。

2.3CARLo-5 mRNA表达与预后关系 随访9~75(平均36)个月。以CARLo-5 mRNA表达2.73为界,分为低表达(n=51)和高表达(n=46)。CARLo-5高表达OS(27个月)短于CARLo-5低表达(43个月)。见图1。

表1 不同病理特征食管癌患者 CARLo-5 mRNA表达比较

图1 CARLo-5 mRNA表达与食管癌患者预后关系

2.4采用多因素Logistic回归分析影响食管癌预后独立危险因素 临床分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移和CARLo-5高表达为影响食管癌预后独立危险因素。见表2。

表2 采用多因素Logistic回归分析影响食管癌患者预后独立危险因素

3 讨 论

食管癌是世界上第八大常见的一种恶性肿瘤,而其中我国是发病率较高的一个地区〔7〕。 食管癌早期症状不明显,大部分食管癌就诊时已属中晚期而错失了最佳根治时机〔8,9〕。食管癌目前仍以手术治疗为主,虽近年来治疗技术日臻成熟,但调查显示5年生存率仍较低〔10,11〕。随着研究的深入,虽对食管癌的形成及进展机制有部分研究,但现有知识仍存在诸多不足,且单单遗传因素无法解释其发生缘由。大量研究证实,表观遗传学在癌症发生发展中具有关键作用〔12〕。故而,探究食管癌发生、发展机制及其表观遗传学及寻找食管癌早期高特异性和灵敏性诊断及治疗靶点,为提高食管癌患者生存率及降低食管癌发病率奠定基础〔13〕。

Lnc-RNA是长度为200 nt的一类非编码RNA,大部分有多聚腺苷酸尾结构,由于缺乏明显的开放阅读框架而无蛋白质编码的潜力〔14〕。Lnc-RNA可通过多种机制调节肿瘤组织细胞,可通过与某些特定的蛋白质相互作用,以此发挥作用〔15~17〕。CARLo-5是新发现的一种lncRNA,位于染色体8q24.21,主要是从c-MYC基因上游515 kb的远端增强子转录的增强子衍生的RNA,其中癌基因的Myc增强子区域和CARLo-5启动子区域能够相互作用,并且Myc增强子区域上的癌症相关变异点能够通过调节CARLo-5启动子区域,以此调节CARLo-5表达〔18〕。刘艳红等〔19〕研究表明,与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织LncRNACARLo-5表达升高,且与临床分期、淋巴结转移和肌层浸润深度相关;子宫内膜癌组织CARLo-5高表达较低表达患者生存预后差。杨海霞等〔20〕研究表明,子宫内膜癌组织CARLo-5蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织,且CARLo-5阴性患者平均生存时间长于阳性,CARLo-5表达是影响子宫内膜癌独立危险因素。本文研究表明,老年食管癌患者CARLo-5呈高表达;CARLo-5表达与临床分期和淋巴结转移相关。

综上,老年食管癌组织CARLo-5高表达,且与预后密切相关,CARLo-5表达越高预后越差,具有重要临床研究价值。但本研究仍存在一些不足,随访时间短,样本量小,故而还需延长随访时间及增加样本量深入研究,以此为食管癌诊断、治疗及预后提供参考依据。

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