IFN-γ、IL-4及Tim-3与布鲁菌病病情、治疗效果的相关性研究

李俊娜 韩晓亮 谢东文 赵根成

河南省安阳市第五人民医院综合科 455000

布鲁菌病是一种由布鲁杆菌诱发的人和动物共患的传染疾病，且该疾病在全世界范围内皆存在广泛分布，严重威胁人与动物的公共卫生及食品安全[1]。据相关研究表明，布鲁菌能通过呼吸道、消化道以及皮肤黏膜入侵机体，可侵犯神经、淋巴结、肝脾及骨关节等器官，患者常表现为体温升高、多汗、乏力、关节疼痛、肝脾以及淋巴结肿大等[2]。此外，布鲁菌病有着慢性化的倾向，且具有极高的致残率。相关研究发现，干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)为布鲁菌主要控制的关键因子，可通过与特异性受体结合，增强抵抗增生及病毒等能力；而白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4)是免疫的应答重要因子；可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecules family-3，Tim-3)主要存在于免疫细胞的表面，参与调节T细胞介导的免疫应答，同一些变态反应以及自身免疫性病变的发生、发展存在一定的联系[3-5]。但目前关于IFN-γ、IL-4及Tim-3与布鲁菌病病情、治疗效果的相关性研究甚少。鉴于此，本研究就IFN-γ、IL-4及Tim-3与布鲁菌病病情、治疗效果的相关性进行研究分析，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年4月—2020年4月本院收治的布鲁菌病患者87例，并将其归为研究组。其中男56例，女31例，年龄11～70岁，平均年龄(41.56±11.49)岁；急性46例，慢性41例。纳入标准：(1)所有患者均符合《布鲁杆菌病诊断标准》中关于布鲁菌的诊断标准；(2)试管凝集试验(SAT)滴度≥1∶100++；(3)所有患者家属均知晓并同意本次研究，且签署知情同意书。排除标准：(1)存在自身免疫性疾病、血液疾病者；(2)心、脑、肝、肾等脏器功能严重不全者；(3)存在精神疾患、意识障碍等依从性差的情况；(4)存在药物过敏情况者或药物不耐受者。另选取同期于我院体检的健康志愿者75例，设为对照组，其中男43例，女32例，年龄22～78岁，平均年龄(43.29±12.41)岁。研究组与对照组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，存在可比性。

1.2 方法 所有对象均在医生协助下完善相关检查，研究组在入院第2天、对照组在体检当日抽取空腹静脉血5ml，3 000r/min，离心10min，离心半径10cm，分离血清，置-80℃保存。IFN-γ、IL-4采用微量样本多指标流式蛋白定量技术测定(Cytometric Bead Array，CBA)，试剂盒由德国EUROIMMUN公司生产；Tim-3采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，仪器为美国贝克曼库尔特全自动免疫分析仪，试剂盒由福建太阳生物技术公司生产；皆严格按照试剂盒说明书进行操作。并给予布鲁菌患者利福平、多西环素、利福喷汀胶囊进行治疗，共治疗9周。

1.3 观察指标 (1)观察并对比研究组和对照组IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平。(2)观察并对比急性和慢性布鲁菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平。急性：病程在6个月以内；慢性：病程超过6个月仍未痊愈。(3)观察并对比不同治疗效果的布鲁菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平：根据治疗效果将其分为有效组和无效组，统计并对比两组IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平。有效：经治疗后发热、多汗、肌肉和关节疼痛、乏力等临床表现完全消失或者较前明显改善，行动恢复，各项功能正常。无效：经治疗后发热、多汗、肌肉和关节疼痛、乏力等临床表现未见明显改善，甚至出现加重现象。(4)采用多元Logistic回归分析影响布鲁菌病患者治疗效果的危险因素。

2 结果

2.1 研究组和对照组IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平比较 研究组IFN-γ水平低于对照组,IL-4及Tim-3水平高于对照组(P<0.05)。详情见表1。

表1 研究组和对照组IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平比较

2.2 急性和慢性布鲁菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平比较 急性组IFN-γ水平低于慢性组,而IL-4及Tim-3水平高于慢性组(P<0.05)。详情见表2。

表2 急性和慢性布鲁菌患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平比较

2.3 有效组和无效组IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平比较 87例布鲁菌病患者中，治疗有效67例(77.01%)，治疗无效20例(22.99%)。有效组IFN-γ水平高于无效组，IL-4及Tim-3水平低于无效组(P<0.05)，详情见表3。

表3 有效组和无效组IFN-γ、IL-4及Tim-3表达水平比较

2.4 分析影响布鲁菌病患者治疗效果的危险因素 经Logistic回归模型分析显示，IFN-γ(异常降低)、IL-4(异常升高)、Tim-3(异常升高)是影响布鲁菌病患者治疗效果的独立危险因素(P<0.05)。详情见表4。

表4 影响布鲁菌病患者治疗效果的危险因素分析

3 讨论

布鲁菌是一类细胞内的寄生菌，易于春秋季发病，可于吞噬细胞内存活甚至繁殖[6-8]。布鲁菌病感染患者于早期的急性期常伴有流感样症状，此类症状往往是由细胞毒性免疫反应诱发，若不予以及时治疗，可能会使得病情拖延至慢性期，从而造成无法治愈的情况[9-10]。故对于布鲁菌病应予以及时有效的诊断与治疗。此外，据相关研究表明，对于细胞内细菌的保护性免疫取决于细胞因子间的相互作用以及T细胞亚群，其中最主要的为细胞免疫[11]。亦据Pnioar IO等[12]研究表明，对于布鲁菌的保护性获得免疫关联到巨噬细胞中的T细胞依赖性激活，在T细胞中可使机体避免遭受布鲁氏菌感染的以CD4+与CD8+为主。可见，机体对布鲁菌病的免疫可能包括激活淋巴及巨噬细胞以产生抗布鲁菌活性的细胞因子。

IFN-γ是由Th1细胞分泌的细胞因子，具有调节免疫及抑制肿瘤细胞增殖作用，可通过强化机体适应性免疫及固有免疫，实现其抗肿瘤及抗病毒效应[13-14]。据相关研究指出，IFN-γ能促使Th0向Th1分化，从而抑制Th2分化；IL-4是由T细胞分泌的因子，在免疫应答过程中具有重要作用[15]。亦据相关研究指出，IL-4可促使Th0向Th2分化，从而抑制Th1。Th1/Th2细胞之间相互抑制、调节，协同维持机体的免疫稳态[16]。本研究数据显示，与对照组比较，研究组IFN-γ水平更低，IL-4水平更高，与Soumya等[17]报道结果相符，表明在布鲁菌患者中IL-4水平呈升高趋势，而IFN-γ水平呈下降趋势。进一步比较发现，急性组IFN-γ水平低于慢性组、IL-4水平高于慢性组，且有效组IFN-γ水平高于无效组、IL-4水平低于无效组。由此推测，在机体遭受到布鲁氏菌感染的过程中，可能会存在Th1/Th2细胞的紊乱，形成Th2优势的免疫应答，致使Th1细胞功能下调，从而引起细胞免疫遭到抑制，最终造成机体的持续感染。

Tim-3是第一个被发现的TIM家族的一员，其特定表达于辅助性T细胞上，是Th1型免疫应答的负性调节剂，其通过与其配体半乳凝素-9结合内能够特异性的诱导Th1细胞凋亡，从而下调Th1免疫应答，降低机体的免疫水平，从而促进结核的发展[18-19]。本研究数据显示，布鲁菌病患者血清Tim-3表达水平明显升高，与健康受检者比较差异显著，证实Tim-3可能与布鲁菌病的发生发展有关，同时急性组Tim-3水平高于慢性组，且有效组Tim-3水平低于无效组，结果进一步证实高Tim-3确实参与了布鲁菌病患者的病情发展，与既往研究报道结果相似[20]。由此推测，在机体遭受到布鲁氏菌感染的过程中，Tim-3可能参与了Th1/Th2细胞的免疫紊乱，使得Th1细胞的免疫功能下调，致使Th2细胞处于优势情况，从而抑制了细胞免疫，使得布鲁菌出现免疫逃逸。为明确影响布鲁菌病患者治疗效果的危险因素，本研究通过Logistic回归模型分析，结果显示，IFN-γ(异常降低)、IL-4(异常升高)、Tim-3(异常升高)是影响布鲁菌病患者治疗效果的独立危险因素。

综上所述，布鲁菌病患者IFN-γ呈低表达，IL-4及Tim-3呈高表达，其可能参与了布鲁菌病病情发生、发展的过程，检测上述因子水平有助于评估治疗效果。