施今墨降糖对药方对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响

★ 吴梅香 吕嘉婧 罗秀 曹治云 王红日 陈旭征（.福建中医药大学附属人民医院 福州 30003；.福建中医药大学药学院 福州 30；3.福建中医药大学中西医结合研究院 福州 30；4.福建省中西医结合老年性疾病重点实验室 福州 30；.福建中医药大学附属第二人民医院 福州 3000）

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一种以慢性高血糖为特征的代谢综合征，是由于胰岛素分泌和/或作用缺陷所引起［1］。胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）是T2DM的主要病理基础，也是导致其他诸多慢性并发症和心脑血管等组织器官发生功能减退或进行性退变的共同病因，而糖脂代谢在胰岛素抵抗中发挥着重要作用［2］。因此，改善IR和糖脂代谢成为了防治T2DM急需解决的问题。

T2DM在中医学又被称为“消渴病”，以“阴虚”为本，“燥热”为标。中医药论治T2DM的历史悠久，疗效明确。国医大师施今墨，论治消渴病经验丰富，其中降糖对药方采用气阴双补的方法，采用黄芪、生地，苍术、玄参，丹参、葛根三组对药配伍，益气养阴固其本，活血化瘀治其标，标本兼治。经过前期的临床研究验证了施今墨降糖对药方在糖尿病的临床诊疗中具有显著的疗效［3-4］。本实验采用糖尿病模型大鼠进行干预，观察施今墨降糖对药方对糖尿病大鼠的糖脂代谢以及IR的影响，为进一步研究与验证施今墨降糖对药方临床疗效与作用机理。

1 实验材料

1.1 动物

清洁级SD雄性大鼠30只，4～6周龄，体质量160～180 g，购自上海杰思捷实验动物有限公司（许可证号码：SCXK（沪）2013-0006）。大鼠饲养于福建中医药大学实验动物中心，温度22～25 ℃，湿度60%～70%，12 h光照维持，昼夜循环，自由摄食与饮水。

1.2 药物

施今墨降糖对药方：黄芪30 g、生地黄30 g、苍术15 g、玄参30 g、丹参30 g、葛根15 g，由福建中医药大学附属人民医院药剂科提供。

1.3 试剂

链脲佐菌素（STZ，麦克林，CAS：18883-66-4）；甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，生产批号：20181017）；胰岛素测试盒（北方生物技术研究所，生产批号：20180928）；血糖试纸（鱼跃医疗）；高脂饲料（福建善思生物科技有限公司）。

1.4 仪器

微量血糖测试仪（鱼跃医疗）；大鼠体重秤（松竫高精度电子秤）；全自动酶标仪（美国BioTek公司，ELX800）。

2 实验方法

2.1 造模方法

将30只大鼠以普通饲料进行适应性喂养1周后，采用随机数字法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、施今墨降糖对药方3组，每组10只。除正常组外，其余两组采用STZ腹腔注射结合高脂饲料诱导T2DM模型大鼠。正常组给予普通饲料喂养6周，模型组、施今墨降糖对药方组均给予高脂饲料（60.7%基础饲料，15%蔗糖，10%猪油，10%蛋黄粉，4%胆固醇，0.3%胆酚盐）喂养6周。6周后，空腹12 h，除正常组以外的两组的大鼠均腹腔注射小剂量STZ（30 mg/kg），正常组腹腔注射等体积的生理盐水。3 d后模型组、施今墨降糖对药方组所有大鼠均再次腹腔注射小剂量STZ（30 mg/kg），正常组腹腔注射等体积的生理盐水。第2次腹腔注射后1周测空腹血糖（FBG），以2次FBG高于11.1 mmol/L或（和）随机血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病大鼠成模标准［5］。除正常组以外的两组大鼠全部造模成功。

2.2 干预方法

建模成功后，正常组、模型组给予等量的生理盐水灌胃，施今墨降糖对药方组给予施今墨降糖对药方，剂量为2.14 g/（kg·d）灌胃，灌胃给药8周。给药期间，所有实验动物予以普通饲料喂养。喂养期间，所有大鼠自由饮水。

2.3 观察指标

以鱼跃血糖仪采用尾部釆血法检测血糖，采集第2次STZ腹腔注射后1周造模成功时的各组大鼠FBG以及采集口服糖耐量试验（OGTT试验）时0 h、0.5 h、1 h、2 h的血糖（将第2次STZ腹腔注射后1周造模成功时的各组大鼠FBG作为干预前FBG，将OGTT试验时0 h的FBG作为干预8周后的FBG）；末次给药后，禁食不禁饮12 h，100 g/L水合氯醛3 mL/kg腹腔麻醉后开腹经腹主动脉采血，3 000 r/min离心15 min，取上清液，-80 ℃保存，采用全自动酶标仪检测TG、TC、空腹胰岛素（FINS），操作流程依据说明书规程进行，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。HOMA-IR计算公式为：FINS×FBG/22.5。

2.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 各组大鼠一般情况及体重比较

3.1.1 各组大鼠一般情况正常组大鼠饮食、进水正常，二便正常，皮毛顺滑，精神良好，多动；模型组大鼠体重下降，进食、饮水较多，尿量较多，大便质地偏稀，皮毛较为枯槁，精神较为萎靡；施今墨降糖对药方组上述情况均比模型组情况较好，较正常组稍次之。

3.1.2 各组大鼠体重比较与正常组比较，模型组大鼠体重明显减轻（P＜0.05）；与模型组比较，施今墨降糖对药方组大鼠体重明显增加（P＜0.05），接近正常组水平。见表1。

表1 3组大鼠体重比较（ ±s，n=10） g

表1 3组大鼠体重比较（ ±s，n=10） g

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05。

组别 体重正常组 571.20±57.94模型组 388.20±52.34*施今墨降糖对药方组 526.50±94.09#

3.2 各组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比较

与正常组比较，模型组FBG、HOMA-IR均明显升高，FINS明显降低（P＜0.05）；与正常组比较，施今墨降糖对药方组干预前的FBG有明显升高（P＜0.05），干预后的FBG、HOMA-IR均无明显差异（P＞0.05）；与模型组比较，施今墨降糖对药方组干预8周后的FBG、HOMA-IR均明显降低（P＜0.05），FINS明显升高（P＜0.05）。与本组治疗前相比较，施今墨降糖对药方组干预治疗8周后FBG较前明显下降（P＜0.05）。见表2。

表2 各组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比较（ ±s，n=10）

表2 各组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比较（ ±s，n=10）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与本组干预前比较，**P＜0.05。

组别 FBG/（mmol·L-1） FINS/（mU·L-1） HOMA-IR干预前 干预8周后正常组 4.12±0.18 5.03±0.84 54.81±10.19 12.25±0.97模型组 24.64±2.88* 27.13±6.78* 22.64±0.55* 27.34±2.21*施今墨降糖对药方组 23.39±2.58*# 7.97±2.42#** 43.65±4.92# 15.19±1.17#

3.3 各组大鼠血清TC、TG观察与正常组比较

模型组TC、TG均明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，施今墨降糖对药方组大鼠血清TC、TG均明显减低（P＜0.05），接近正常组水平。见表3。

表3 各组大鼠治疗后TC、TG水平比较（ ±s，n=10）mmol/L

表3 各组大鼠治疗后TC、TG水平比较（ ±s，n=10）mmol/L

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05。

3.4 各组大鼠OGTT实验指标比较与正常组比较

模型组在FBG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG均明显升高（P＜0.05），表示模型组存在糖耐量异常；与正常组比较，施今墨降糖对药方组在FBG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG无明显差异（P＞0.05）。与模型组相比较，施今墨降糖对药方组在FBG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG均具有明显降低（P＜0.05）。见表4。

表4 各组大鼠OGTT实验指标比较（ ±s，n=10）mmol/L

表4 各组大鼠OGTT实验指标比较（ ±s，n=10）mmol/L

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05。

组别 FBG OGTT-0.5 h PGOGTT-1 h PGOGTT-2 h PG正常组 5.03±0.84 8.10±0.47 6.21±0.39 6.46±0.95模型组 27.13±6.78* 32.63±0.64* 29.15±4.33*27.47±3.97*施今墨降糖对药方组 7.97±2.42# 10.70±3.82# 11.18±4.53# 9.43±3.85#

4 讨论

现代医学研究表明，IR是T2DM发生发展的核心问题，也是其发病的重要的病理生理基础，而全身的糖脂代谢紊乱，则起着加重组织及机体胰岛素抵抗的作用。大量的中医药研究发现，充分运用中医药整体结合及辨证论治的特点，对于改善胰岛素抵抗及糖脂代谢方面有着明显的效果，可以起到调节糖脂代谢，降低糖脂毒性，多途径、多环节地改善IR的作用［6-7］。

施今墨降糖对药方是施今墨名老中医在长期治疗消渴病的临床过程中得出的经验方，由黄芪、生地、玄参、苍术、丹参、葛根三组对药组成。中医方面，黄芪补脾胃之中气，固下焦之元气，生地滋阴、凉血、固肾，两药合用共奏健脾气，固肾阴；苍术化脾湿，升脾气，玄参退热降浊，两药配伍，共奏滋阴清热、健脾降浊之功。全方补益气血，调整阴阳固本的同时，不忘活血化瘀治标。葛根升发脾胃阳气，布散全身津液，丹参活血化瘀、行血止痛，两药共奏活血化瘀，条达气血，生津止渴之功［8］。现代药理学中，黄芪在治疗T2DM的临床疗效早已被证实，黄芪多糖作为黄芪主要的生物活性成分之一，胡桂祯等［9］通过研究发现，黄芪多糖具有改善胰岛素抵抗、增加胰岛素敏感性、调节脂质代谢、抗炎、抗氧化、保护胰岛β细胞等多种药理作用。李莉［10］研究发现，生地黄既可以改善胰岛β细胞的功能，缓解胰岛素抵抗，还可以改善糖脂代谢，降低肝葡萄糖-6-磷酸酶活性。田会东等［11］通过对苍术-玄参对药对T2DM的网络药理研究发现苍术-玄参对药中的活性成分能通过多靶点、多通路起到治疗T2DM的作用，为苍术-玄参对药治疗T2DM的药理分析提供了新的科学论据。刘倩等［12］通过研究指出，黄芪与葛根的配伍，促进了脂肪组织脂联素（APN）、瘦素（LEP）的分泌，减少了肿瘤坏死因子α、白介素-12的分泌，抑制了趋化素、趋化素受体mRNA的表达，从而达到改善T2DM大鼠糖脂代谢的作用。柳刚等［13］的研究证实了丹参有保护T2DM大鼠肾脏的作用，可以抑制转化生长因子β1（TGF-β1）、纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）等细胞因子的表达。以上研究皆为施今墨降糖对药方治疗T2DM提供了科学依据。

本研究结果表明，STZ腹腔注射结合高脂饲料可以造成大鼠的FBG、TC、TG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG、HOMA-IR的明显升高，FINS和体重的明显降低，说明T2DM造模成功。与模型组相比较，施今墨降糖对药方组T2DM大鼠的FBG、TC、TG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG、HOMA-IR均明显下降，FINS升高，并且改善了大鼠体重。研究结果证实了施今墨降糖对药方可缓解T2DM大鼠的体重下降，降低T2DM大鼠的高血糖水平，增强其对糖负荷的耐受性，促进T2DM大鼠的血脂代谢，减轻胰岛功能的受损程度，降低胰岛素抵抗。这一研究结果为临床防治糖尿病糖脂代谢紊乱以及胰岛素抵抗提供了新的治疗思路以及实验依据。但其作用机理以及作用靶点尚未明确，仍有待进一步研究。