百合利咽茶治疗肺肾阴虚型慢喉痹的疗效及其网络药理学机制探讨

李逸雪， 刘恒瑞， 付文洋

（1.广州中医药大学第四临床医学院，深圳市中医院，广东深圳 518000；2.深圳市逗点生物有限公司，广东深圳 518000）

慢喉痹即是现代医学的“慢性咽炎”[1-2]，其临床表现主要为咽部异物感、疼痛感、干燥感、痒感等症状，咽喉部查体可见咽后壁色暗红，伴随不同程度的肿胀[3]。病情时轻时重，且易因言语过多、饮食不当、胃食管反流[4]、空气污染[5]等刺激性因素诱发反复。目前，西医在急性期使用抗生素治疗，效果较好，但对于慢性期的遗留症状，暂无明确的特效靶向药，其疗效存在一定的局限性[6-7]。而中医基于临床辨证论治理论，在慢性期使用中医药治疗，不仅能改善患者的口干、异物感等症状，提高患者生活质量，还能减少复发率[8]。

喉痹在临床很常见[9]。根据相关流行病学调查，慢喉痹的患病人群正日益扩大，且有越来越年轻化的趋势。慢喉痹中的“慢”字体现了该病患病日久，非一日之功，易使肺肾两脏虚损，其中肺为标，肾为本。肾阴不足不仅不能上行滋补肺阴，还致使虚火上犯，耗气伤津；而咽喉为上焦，属肺之门户，邪气来袭，首当其冲，导致肺脏阴虚更甚；而金水相生，肺阴亏虚累及肾阴，导致肺肾阴虚，日久而发为慢喉痹。基于2020年深圳市中医院耳鼻喉科门诊患者的慢喉痹辨证观察，发现肺肾阴虚型患者占慢喉痹患者总数的绝大部分。因此，本研究选取85例肺肾阴虚型慢喉痹患者作为研究对象进行百合利咽茶的临床疗效观察。但由于百合利咽茶的药效成分和疗效机制尚未明确，为了解百合利咽茶的潜在治疗机制，本研究还进行了生物信息学分析，运用系统生物信息学理论来预测中药配伍作用机制[10-14]，以便更好地指导临床工作。现将研究结果报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象及分组选取2021年4月至2021年7月在深圳市中医院耳鼻咽喉科门诊就诊且明确诊断为肺肾阴虚型慢喉痹的患者，共85例。由非本研究的其他人员应用统计学软件产生随机数字，根据就诊先后顺序，将患者随机分为2组，其中观察组45例，对照组40例。本研究符合医学伦理学要求并通过深圳市中医院伦理委员会的审核批准；同时，所有入选患者均在本研究开始前签署了知情同意书。

1.2 诊断标准参照中华人民共和国中医药行业标准《中医内科病证诊断疗效标准》中有关慢喉痹（慢性咽炎）的中医诊断标准[15]。①以口咽干，咽部异物感但不伴有吞咽困难，伴或不伴咽痛、咽痒等为主要症状；②病程较长，至少半年以上的慢喉痹病史，且咽部不适症状时轻时重；③常有慢喉痹急性反复发作史，常因使用嗓音过度或不当、饮食不当、胃食管反流、空气污染等导致发病；④咽部检查：咽后壁黏膜肿胀，或有暗红色斑块状、树枝状充血，以及淋巴滤泡增生。肺肾阴虚型的辨证标准：咽干口干，频频求饮，伴或不伴有咽部灼热感，多言之后口干、咽痛等症状加重，伴或不伴有腰酸乏力，午后及黄昏时症状更甚。咽部充血呈暗红色，黏膜较干燥，或有淋巴滤泡增生，色偏暗红。舌红，苔薄黄，脉细数。

1.3 纳入标准①符合上述慢喉痹（慢性咽炎）的诊断标准；②中医证型为肺肾阴虚型；③经过西药治疗后，病情仍有反复发作；④入选本研究时处于慢性咽炎发作期；⑤依从性好，自愿参加本研究并签署知情同意书的患者。

1.4 排除标准①平时需要使用激素及其他可能影响疗效观察的药物治疗的患者；②合并有其他咽喉部疾病的非单纯性慢喉痹患者；③已知有重大全身性严重疾病（如神经系统疾病、肌肉骨骼疾病和自身免疫性疾病），以及需对严重慢性疾病（如癌症）进行持续治疗的患者；④依从性差，未按规定进行治疗的患者。

1.5 治疗方法对照组在第1 周至第4 周给予口服养阴清肺汤的中药汤剂（方药组成：生地黄20 g、麦冬15 g、玄参15 g、贝母15 g、牡丹皮15 g、白芍15 g、甘草10 g、薄荷10 g）治疗，每日1 剂，煎取400 mL，分2 次于早晚饭后20～30 min服用，每次200 mL，共治疗4 周；在第5 周至第8 周不再进行任何药物治疗和干预。观察组在第1 周至第4 周给予口服养阴清肺汤中药汤剂（汤剂的组成、用法与对照组相同），并加上口服百合利咽茶（方药组成：百合2 g，菊花1 g，陈皮1 g，甘草1 g）治疗，每日1剂，每次用300 mL开水冲泡后服用，每日3 次，于早中晚饭后1 h 服用；在第5 周至第8 周，停用养阴清肺汤，继续使用百合利咽茶治疗（使用方法及剂量不变）。2组患者均在治疗8 周后评价疗效。

1.6 网络药理学方法为了获得可靠的慢喉痹病理基因列表，我们对比较毒理基因组学数据库（CTD）及GeneCards 数据库中慢喉痹相关基因交叉应用得到基因集G1，其中相关分数＞80，P值＜0.05。同时，对百合利咽茶的中药成分，基于BATMAN-TCM 数据库，进行活性成分及作用靶点进行预测分析，得到基因集G2，G1 和G2 交集后得到G3，即为百合利咽茶治疗慢喉痹的基因靶点，再将G3 导入String 网站，构建治疗靶基因的蛋白-蛋白相互作用网络图；与此同时，对G3 在GO 和KEGG 数据库进行富集分析，以分析百合利咽茶的主要分子生物过程或信号通路，并绘制高级气泡图、输出基因-概念网络图。

1.7 临床疗效评价标准根据局部症状与体征量化计分标准（见表1），在患者首次治疗前、治疗第4 周和治疗第8周后进行临床症状与体征量化评分，计算出治疗前、治疗第4周和治疗第8周后的各项症状与体征评分及总积分，再根据治疗前后症状与体征总积分的变化情况判定疗效。计算公式如下：症状与体征总积分减少率（疗效指数）=（治疗前总积分-治疗后总积分）/治疗前总积分×100%。显效：疗效指数≥80%；有效：40%≤疗效指数＜80%；无效：疗效指数＜40%。总有效率=（显效例数+有效例数）/总病例数×100%。

表1 慢喉痹症状与体征具体量化计分标准Table 1 Specific quantitative scoring criteria for symptoms and signs of chronic pharyngitis

1.8 统计方法应用SPSS 26.0统计学软件进行数据的统计分析。计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料用率或构成比表示，组间比较采用χ2检验（即采用GraphPad Prism 8 中的Contingency 方法计算组间差异）。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者基线资料比较观察组45例患者中，男27例，女18例；年龄24～67岁，平均（45.07±10.96）岁；病程6 个月～5年。对照组40例患者中，男23例，女17例；年龄24～66岁，平均（37.9±10.30）岁；病程8 个月～4年。2组患者的性别、年龄、病程、严重程度等基线资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），表明2组患者的基线特征基本一致，具有可比性。

2.2 2组患者治疗4周后和治疗8周后临床疗效比较表2结果显示：治疗4周后，观察组的总有效率为82.2%（37/45），高于对照组的65.0%（26/40），但组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗8 周后，观察组的总有效率为91.1%（41/45），明显高于对照组的70.0%（28/40），组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 2组慢喉痹患者治疗4周后和治疗8周后的临床疗效比较Table 2 Comparison of clinical efficacy between the two groups of patients with chronic pharyngitis after 4 and 8 weeks of treatment [例（%）]

2.3 网络药理学分析结果在CTD 及GeneCards数据库找到慢喉痹病理基因1008个，在BATMANTCM 中筛选了153 个与百合利咽茶相关的基因靶点，两者交集后有21 个相关靶点（见图1-A）；将21 个相关靶点提交至String 网站，生成蛋白-蛋白相互作用网络图。图中节点表示蛋白质，两个节点之间，线条越密集则表示关联度越大，其中GGT1和GSR、PGR和ESR1、CHRNA5和CHRNA7的关联度较大（见图1-B），在KEGG 和GO 富集结果中，百合利咽茶的显著治疗靶点在细胞修饰的氨基代谢通路和谷胱甘肽代谢。在KEGG富集结果中，基因及通路相关的基因放射比主要集中在0.23左右，最显著的值约为0.35；在GO 富集结果中，基因及通路相关的基因放射比主要集中在0.25，最显著的值是0.30。结果见图2～图3。

图1 慢喉痹与百合利咽茶的基因韦恩图（A）和相交靶点的蛋白-蛋白相互作用网络图（B）Figure 1 Gene Venn diagram and protein-protein interaction network of intersecting targets of chronic pharyngitis and Baihe Liyan Tea

图2 GO和KEGG富集气泡分析图Figure 2 GO and KEGG enrichment bubble analysis graph

图3 GO和KEGG输出基因-概念网络图Figure 3 GO and KEGG output gene-concept network diagram

2.4 百合利咽茶的中药性能分析结果中药都具有一定的药性和药味，即四气五味，这是药物性能的一个重要方面。对百合利咽茶中的药物进行分析，得出该方四气以寒为主，占60.0%，五味以甘为主，占70.0%，归经以归肺经为主，占45.0%。结果见图4。

图4 百合利咽茶中药成分的四气五味归经图Figure 4 Graphs of four properties，five flavors and meridian tropism of Chinese herbal ingredients of Baihe Liyan Tea

2.5 不良反应2组患者在治疗过程中均未发生相关的任何不良事件。

3 讨论

3.1 中医对慢喉痹病因病机的认识痹者，闭也，指阻塞不畅的意思[16]。《素问·阴阳别论》最早提出喉痹的概念，曰：“一阴一阳结，谓之喉痹”。《寿世保元》则曰：“一阴者，手少阴君火，心之脉气也。一阳者，手少阳相火，三焦之脉气也。二脉并络于喉，气热则内结，结甚即肿胀，肿胀甚则痹。”[17]这里明确提出了喉痹的概念。而该病日久，反复发作，则可导致“慢喉痹”。有关慢喉痹的病因病机，《景岳全书》曰：“格阳喉痹，由火不归元，则无根之火客于咽喉而然，其证则上热下寒，全非火证。”[18]意思即肺为标，肾为本，肾阴不足，肾水不能制火，则虚火上犯咽喉而发为喉痹；且肾阴不足，不仅不能上行滋补肺阴，还可致虚火上犯，耗气伤津，而咽喉为上焦，属肺之门户，邪气来袭，首当其冲，导致肺脏阴虚更甚，而金水相生，肺阴亏虚累及肾阴不足，日久则发而为慢喉痹。

3.2 研究结果分析

3.2.1 临床疗效结果分析 本研究结果显示，治疗4 周后，观察组的总有效率较对照组有所提高，但差异无统计学意义（P＞0.05），说明百合利咽茶在慢喉痹急性发作时的疗效有限，具有一定的治疗局限性，但第1～4周的治疗并不影响第5～8周的治疗结果，第5～8 周的治疗结果偏差较小，可信度较高。治疗8周后，观察组的总有效率较对照组明显提高，差异有统计学意义（P＜0.05），说明在慢喉痹急性发作治疗后还遗留的口干、异物感等症状，用百合利咽茶作为辅助治疗，可以大大提高患者的生活质量，减少患者的疾病痛苦。

3.2.2 网络药理学结果分析 在CTD及GeneCards数据库找到慢喉痹的病理基因和在BATMAN-TCM中筛选与百合利咽茶相关的基因靶点，两者交集后有21 个显著相关靶点，说明百合利咽茶极有可能通过此21 个显著的相关靶点，对慢喉痹起到辅助治疗作用和日常咽喉保健作用；再通过百合利咽茶复方化合物-靶点-慢喉痹疾病网络与GO、KEGG富集分析，显示出“细胞修饰的氨基代谢通路”和“谷胱甘肽代谢”是显著的治疗通路和靶点。有研究[19]表明，谷胱甘肽是一种小分子活性肽，在生物体内具有显著的抗氧化功能，在对内质网应激的发展和缓解方面发挥重要作用。内质网应激是一种细胞状态，由内质网中未折叠或错误折叠蛋白的超载引起，如果未正确解决，可导致细胞死亡[20]。虽然暂未有研究表明慢喉痹疾病与内质网应激有显著相关，但通过本研究，可预测百合利咽茶治疗慢喉痹可能是通过影响内质网应激的发展和缓解而发挥作用。由此可见，本研究可进一步揭示百合利咽茶对慢喉痹的辅助治疗效果和日常咽喉保健疗效的具体机制，以及从生物基因水平论证了中医药在治疗复杂疾病方面的有效性，为中医药治疗慢喉痹提供了新的思路与方法[21]。

3.2.3 百合利咽茶的中药性能结果分析 从古至今的中医文献，在论述每一种药物时，首先标明其性味与归经，这有助于我们认识各种药物的共性和个性，以此来指导临床用药。本研究结果显示，百合利咽茶的四气中寒性占比为60.0%，虽寒性占比最大，但还有40.0%是温性和平性，寒温并用，温能制寒，故百合利咽茶中剩余的寒性，只有寥寥；五味中，甘的占比最大，达70.0%，甘性温补，但又过于平和，只能缓缓发之，不适用于急性期的治疗；归经中，肺经占比最大，占45.0%。本研究中，除肺阴亏虚外，肾阴亦亏损，而该方在治疗时未能兼顾先天之本，故百合利咽茶在慢喉痹急性发作时，只能起到辅助治疗作用，而待急性期治疗过后，坚持继续服用，取其甘性以缓缓补之，对咽喉的保健作用具有显著疗效。

3.3 结论百合利咽茶在肺肾阴虚型慢喉痹的辅助治疗及治疗后的预防保健中可发挥显著的疗效。基于网络药理学，百合利咽茶活性成分对慢喉痹疾病相关的多个靶点和多条信号通路的调控是提高慢喉痹治疗有效率的重要作用机制，由此可见，百合利咽茶治疗慢喉痹具有一定的生物学理论基础。

（致谢：感谢刘毅先生提供的计算机语言支持！）