血清8-OHdG、VILIP-1 水平对ACI 患者静脉溶栓后发生HT的预测价值

贾文歆，王丽香，于振江

济南市第八人民医院，济南 271104

近年来，急性脑梗死（ACI）发病率呈上升趋势，具有较高的病死率和致残率，严重影响患者的健康和生活质量［1］。静脉溶栓是ACI 患者超急性期治疗的关键，可及时有效的恢复脑组织血流再灌注，但也导致许多并发症。出血转化（HT）是静脉溶栓的严重并发症之一，指脑梗死后病灶部位的继发性出血或远隔部位出血，是ACI 患者溶栓后出现神经功能恶化、引起医疗纠纷的主要原因之一，及早预测ACI静脉溶栓后出血转化对于改善患者预后具有重要意义。8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）是DNA 氧化应激损伤因子，可通过修饰尿苷酸影响嘌呤、碱基结构，引起DNA 双链结构断裂，抑制细胞增殖、促使细胞凋亡［2］；还可通过激活氧自由基启动氧化应激反应，破坏线粒体引起能量代谢障碍，加速神经细胞凋亡［3］。目前国内外研究表明，8-OHdG 在急性脑卒中、缺血缺氧性脑病、阿尔茨海默病中水平升高［4-6］。视椎蛋白样蛋白-1（VILIP-1）作为一种神经元钙传感蛋白，在脑组织中广泛表达，可通过调节神经细胞之间的Ca2+离子通道来传递信号。研究证实，VILIP-1为脑组织损伤的特异性标志物［7］，参与脑损伤及神经退行疾病如脑卒中、阿尔茨海默病发病过程［8-9］。8-OHdG、VILIP-1与多种神经系统疾病发生发展相关，但二者与ACI静脉溶栓后出血转化的关系少见报道。本研究旨在分析HT患者血清8-OHdG、VILIP-1水平变化，探讨二者对静脉溶栓治疗后HT的预测价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019 年1 月—2021 年9 月本院神经内科收治的ACI 患者102 例，均行静脉溶栓治疗，男59 例、女43 例，年龄（62.5±8.84）岁；根据溶栓后24 h头颅CT复查结果，将患者分为HT组（18例）、未HT 组（84 例）。纳入标准：均符合中国急性缺血性脑卒中诊治指南中的诊断标准；初次发病；具有静脉溶栓适应证并使用阿替普酶静脉溶栓。排除标准：接受桥接血管内治疗；临床资料不完整；伴严重心、肺、肝、肾功能不全；有出血倾向或凝血功能异常。患者及家属均同意参与本研究并签署知情同意书，本研究经本院伦理委员会审核批准（2020038）。

1.2 临床资料收集 详细记录所有患者的临床资料，包括人口学特征（如年龄、性别等）、基础病（如高血压、糖尿病、冠心病、心房颤动等）、入院后第一次实验室检验结果（如血糖、血脂等）、个人史（吸烟、饮酒）、NIHSS评分、发病到静脉溶栓时间（ONT）。

1.3 血清8-OHdG、VILIP-1水平测定 分别于溶栓前后采集患者静脉血5 mL，于4 ℃下以3 000 r/min离心15 min，留取血清置-80 ℃冰箱保存，等待检测。用ELISA法测定血清8-OHdG、VILIP-1。VILIP-1试剂盒购于美国Epitope Diagnostics 公司，8-OHdG试剂盒购于美国R&D 公司，操作步骤均严格按照说明书进行。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计软件。符合正态分布计量资料用±s表示，比较采用独立样本t检验；计数资料比较采用χ2检验；多因素Logistic 回归分析ACI患者溶栓后发生HT的影响因素；绘制受试者工作特征（ROC）曲线，用曲线下面积评价血清8-OHdG、VILIP-1 水平对ACI 患者溶栓后发生HT 的预测价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料比较 HT组高血压、糖尿病、心房颤动比例及NIHSS 评分、ONT 均高于未HT 组（P均＜0.05）。见表1。

表1 两组临床资料比较

2.2 两组溶栓前后血清8-OHdG、VILIP-1 水平比较 溶栓前，HT 组血清8-OHdG、VILIP-1 水平均高于未HT 组（P均＜0.05）；溶栓后，两组血清8-OHdG、VILIP-1 水平均较溶栓前降低（P均＜0.05），两组间血清8-OHdG、VILIP-1 水平比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。见表2。

表2 两组血清8-OHdG、VILIP-1水平比较（ng/mL，-x±s）

2.3 ACI 患者溶栓后发生HT 的影响因素 以ACI患者静脉溶栓后发生HT 为因变量，以高血压、糖尿病、心房颤动、NIHSS 评分、ONT、血清8-OHdG 及VILIP-1 为自变量行Logistic 回归分析，结果显示，高血压、NIHSS评分高、ONT长、血清8-OHdG 和VILIP-1 水平高均是ACI 患者溶栓后发生HT 的独立危险因素（P均＞0.05）。见表3。

表3 ACI患者溶栓后发生HT的影响因素分析

2.4 溶栓前血清8-OHdG、VILIP-1水平对ACI患者溶栓后发生HT的预测价值 溶栓前血清8-OHdG、VILIP-1联合预测ACI患者溶栓后发生HT的曲线下面积高于二者单独预测。见表4。

表4 血清8-OHdG、VILIP-1水平对ACI患者溶栓后发生HT的预测价值

3 讨论

近年来，我国ACI的发病率逐年增高，且发病年龄趋于年轻化。静脉应用重组人组织型纤溶酶原激活物溶栓是ACI 超急性期治疗最有效的方法之一，可有效恢复脑梗死缺血区的再灌注，减少脑细胞死亡及神经功能损害程度，在治疗ACI 中获得满意的效果［10］。HT是静脉溶栓治疗最严重的并发症，能加重脑组织损伤，影响溶栓治疗的安全性和有效性，进而限制了静脉溶栓的临床应用［11］。因此，积极探索静脉溶栓后导致HT 发生的危险因素，寻找能有效预测HT 发生的血清生物学指标，对降低HT 的发生率以及改善患者的预后具有重要临床意义。

关于HT 发病机制的研究较多，目前认为主要与脑组织的缺血再灌注损伤及血脑屏障的破坏有关［12］。在脑梗死超急性期，突然的缺血缺氧导致Na+-K+-ATP酶工作异常，钠离子在细胞内堆积，从而导致细胞毒性水肿，使血脑屏障通透性增加导致HT，急性期神经炎性反应及亚急性期不成熟的新生血管形成也是导致血脑屏障通透性增加的主要原因［13］。缺血再灌注后的氧化应激为HT 的另一重要机制，缺血脑组织再灌注后会通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶等途径产生活性氧自由基［14］，进一步损伤脑细胞的蛋白、脂质及核酸，从而导致血脑屏障破坏。

8-OHdG 是鸟嘌呤脱氧核苷酸与羟自由基结合生成的氧化产物，作为机体氧化应激反应的产物，8-OHdG 可用于评估DNA 损伤的严重程度［15-16］。已有研究表明，8-OHdG 在ACI 患者血清中高表达，并与大脑中动脉梗死患者确诊30 d 内死亡密切相关［17］。闫海光等［18］研究显示，血清8-OHdG 在脑出血患者中异常升高，可能参与急性脑出血病情进展过程。王晓凤等［19］分析了88 例急性脑卒中患者，发现在神经系统症状出现6 h 内，病例组8-OHdG 水平明显增高，其在脑出血组血清中的含量高于脑梗死组，这说明血清8-OHdG 的测定有可能作为预测早期脑血管事件的有效指标，而在脑出血组中更敏感。本研究结果显示，溶栓前HT 组血清8-OHdG 水平高于未HT 组，而溶栓治疗后，两组血清8-OHdG水平均有所下降，但HT 组仍高于未HT 组。提示溶栓前血清8-OHdG 可能参与了ACI 患者静脉溶栓治疗后HT 的发生；且溶栓前血清8-OHdG 水平预测ACI 患者发生HT 的曲线下面积为0.737，预测效能较好。但目前关于8-OHdG 参与HT 发生的具体机制尚不明确，可能与脑损伤诱发氧化应激反应，导致ROS 大量合成，而8-OHdG 在ROS 的氧化作用下合成、分泌增加，进一步扩大氧化应激反应，加快神经细胞凋亡有关［19］。

VILIP-1是一种相对分子质量小的胞质蛋白，通过与Ca2+结合后产生不同的结构变化，向下游传导不同的信号［20］。VILIP-1在脑组织中呈高表达，参与了神经细胞的信号调节。有研究认为，VILIP-1通过参与调节p38/JNK MAPK 信号通路，诱导神经细胞凋亡［21］。曾莹等［22］研究显示，VILIP-1在高血压脑出血患者血清中表达升高。亦有研究发现，血清VILIP-1水平对于诊断缺血性卒中具有较好的敏感性和特异性［23］。本研究结果显示，与未HT 组比较，溶栓前HT 组血清VILIP-1 水平更高，溶栓治疗后，两组血清VILIP-1 水平均下降，但HT 组仍高于未HT 组。提示溶栓前血清VILIP-1 过度表达可能参与了ACI患者静脉溶栓治疗后HT的发生；且术前血清ESM-1水平预测ACI 患者发生HT 的曲线下面积为0.876，有一定的预测价值。VILIP-1 参与脑梗死患者溶栓后HT 的机制尚不明确，有研究认为VILIP-1 可导致Aβ1-42 在脑内沉积，促使微管蛋白异常磷酸化，发挥神经毒性作用，诱导缺血缺氧性损伤和神经组织炎性反应，并破坏血脑屏障［18］，从而促使HT 的发生。既往研究认为，高血压、NIHSS 评分高、ONT 长是ACI患者溶栓后发生HT的危险因素［24］，这与本研究结果一致。多因素Logistic 回归分析显示，血清8-OHdG和VILIP-1水平高也是ACI患者溶栓后发生HT 的独立危险因素，进一步证实了血清8-OHdG、VILIP-1 参与ACI 静脉溶栓后出血转化的发生和发展过程。

综合以上分析，血清8-OHdG、VILIP-1水平变化对ACI患者静脉溶栓后HT发生有一定的预测价值，但具体作用机制需要更深入研究。