外周血CD4+CD25+CD127调节性T细胞表达与新生儿血液感染的关系

王丽娟 王丽锋 刘雪杰 姚瑞敏

新生儿血液感染亦被称为新生儿败血症，属于一类病原微生物定植于血液循环，并在其内持续生长、繁殖，造成全身感染状态的疾患。目前临床中常见的类型为细菌性血液感染，其在所有活产儿中所占比例接近1%，在极低体重新生儿中发生比例可逼近20%，在长时间住院的患儿中发生率甚至超过30%［1-3］，属于新生儿危重症。此类感染情况多属于新生儿重症监护病房（neonatal intensive care unit，NICU）内发生的院内感染，这与新生儿自身免疫功能低下、抵抗力不足有关。当发生病原菌感染情况表现较重且治疗不及时时，感染患儿可进展为重症败血症、脓毒血症［4-5］。新生儿发生血液感染后症状较为隐匿，临床可通过血培养明确患儿血液感染情况［6］。CD3+、CD4+作为常见T 淋巴细胞，其在诸多感染病例中可表现出异常变化；CD4+CD25+CD127 调节性T 细胞（regulatory T cell，Treg）作为一类适应性免疫细胞，其可用于反映机体感染及炎症情况［7］。本次研究将进一步探究外周血CD4+CD25+CD127 Treg 表达与新生儿血液感染的关系，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

分析2018年1月至2021年1月期间于濮阳市清丰县中医院娩出的497 例新生儿中89 例存在疑似血液感染症状及体征的新生儿临床资料，根据血培养诊断结果分为感染组21 例与未感染组68例。纳入标准：①均于本院娩出，且接受研究相关血培养、免疫细胞检查；②新生儿日龄在28 d 以内。排除标准：①产妇围产期存在感染状态或肝功能异常者；②产妇围产期服用免疫抑制剂者；③临床资料存在纰漏者。男47 例，女42 例，平均日龄（12.36±3.69）d；平均胎龄（37.45±1.27）周。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者监护人均签署知情同意书。

1.2 方法

采集新生儿外周静脉血2 mL，采用BD FACSCantoⅡ流式细胞仪（碧迪医疗器械有限公司）进行T 淋巴细胞亚群检测，具体步骤为：首先进行2 000 μL 溶血素配置备用，并准备A、B 两个试管作为标记试管，分别将100 μL 全血置入各试管内，试管内对应加入试剂A、B，将其充分混匀后在室温、避光条件下放置30 min，随后于各试管内加入1 000 μL 溶血素，将其充分混匀后在室温、避光条件下放置15 min，随后于各试管内加入400 μL 鞘液，在低速涡旋状态下充分混匀后实施流式细胞仪上机检测，并以机器自带软件分析结果，得出CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平。

1.3 观察指标

比较两组外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平，采用Logistic 多元回归分析模型分析外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平与新生儿血液感染的相关性，采用受试者工作特征（ROC）曲线评估上述指标对新生儿血液感染的诊断效能。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计软件分析数据，计量资料用（±s）表示，采用独立样本t检验进行组间比较，影响因素分析采用Logistic 多元回归分析模型，预测效能采用ROC 曲线分析评估。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平比较

感染组外周血CD3+、CD4+表达水平显著低于未感染组，CD4+CD25+CD127 表达水平显著高于未感染组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg表达水平比较（±s)Table 1 Comparison of expression levels of peripheral blood CD3+，CD4+and CD4+CD25+CD127 Treg between the two groups（±s)

表1 两组外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg表达水平比较（±s)Table 1 Comparison of expression levels of peripheral blood CD3+，CD4+and CD4+CD25+CD127 Treg between the two groups（±s)

组别感染组未感染组t 值P 值n 21 68 CD3+57.85±1.23 60.12±1.41 6.633＜0.001 CD4+35.63±2.87 40.26±3.14 6.021＜0.001 CD4+CD25+CD127Treg 10.26±1.85 7.39±1.57 7.015＜0.001

2.2 新生儿血液感染的影响因素分析

Logistic 回归分析显示，外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 均为新生儿血液感染的独立危险因素（P＜0.05）。见表2。

表2 新生儿血液感染的影响因素分析Table 2 Analysis of influencing factors of neonatal blood infection

2.3 外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg

诊断新生儿血液感染的效能分析ROC 曲线分析显示，外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 诊断新生儿血液感染的曲线AUC 分别为0.891、0.909、0.854，截断值分别为59.85% 、38.57%、8.87%，诊断效能良好（P＜0.05）。见表3、图1。

表3 ROC 曲线参数Table 3 ROC curve parameters

图1 外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 诊断新生儿血液感染的ROC 曲线Figure 1 ROC curves of peripheral blood CD3+，CD4+and CD4+CD25+CD127 Treg in the diagnosis of neonatal blood infection

3 讨论

当机体发生病原微生物入侵后，机体可通过免疫细胞释放肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）等促炎细胞因子对入侵部位进行炎症反应诱导，降低感染危害［8-9］。相关研究指出，相关炎性介质可进入血液循环并引发全身免疫炎症反应以对抗感染，此时可伴随T 淋巴免疫细胞在血液中的异常表达，且在炎症反应过度的情况下，机体免疫系统功能可出现一定抑制，造成感染易感性增加［10-11］。T 淋巴细胞亚群源自于骨髓多能干细胞，其可在机体中发挥免疫调节作用，其中CD3+可对成熟T 细胞在外周血中的表达水平进行反映，水平下降意味着机体免疫功能较为低下，CD4+则作为辅助诱导性T 细胞的代表，可对机体B 淋巴细胞产生刺激作用，促进抗体产生。相关研究指出，部分感染性疾病患者发病前即可出现CD3+、CD4+水平过低，同时伴随淋巴细胞因子数量的减少，表现为疾病易感性升高［12-13］。本研究中，感染组外周血CD3+、CD4+表达水平显著低于未感染组，经Logistic 回归分析发现，外周血CD3+、CD4+均为新生儿血液感染的独立危险因素，提示存在血液感染状况的新生儿CD3+、CD4+表达水平均较低。经ROC 曲线进一步分析发现，上述指标诊断新生儿血液感染的曲线AUC 分别为0.905、0.811，截断值分别为58.71%、36.75%，提示在低于相应临界值后CD3+、CD4+在新生儿血液感染中的诊断效能良好。分析其原因在于CD3+、CD4+T 细胞均属新生儿机体免疫系统核心，其与CD8+共同参与机体免疫系统的动态平衡及正常发挥，CD3+、CD4+水平下降表示患儿机体存在免疫功能抑制状态，更易发生感染，而在血液感染发生后炎症反应过度的情况下，这种免疫抑制状态更为明显。

CD4+CD25+CD127 Treg 属于机体T 淋巴免疫细胞中重要的调节细胞，其在脓毒症患者机体免疫调节过程中可发挥抑制细胞免疫的作用。相关研究发现，CD4+CD25+CD127 Treg 细胞具备广泛Toll 样受体（Toll-like receptors，TLR），在机体存在感染、炎症状态下，TLR 可因病原菌、炎性因子及部分毒性产物的刺激上调表面活性物质，从而促进CD4+CD25+CD127 Treg 的存活、增殖［14］，同时进一步加强CD4+CD25+CD127 Treg 细胞的免疫抑制作用。张浩等［15］研究指出，病原菌成分及其侵入机体后产生的细菌脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）、细菌DNA 等病理产物均可诱导并促进CD4+CD25+CD127 Treg 生成，在炎症反应、脓毒症患者病情进展中发挥重要作用。本研究中，感染组外周血CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平较未感染组明显更高，Logistic 回归分析发现，外周血CD4+CD25+CD127 Treg 为新生儿血液感染的独立危险因素，提示存在血液感染状态的新生儿多存在CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平的升高，即免疫抑制状态更为严重。经ROC 曲线进一步分析得出，该指标诊断新生儿血液感染的曲线AUC为0.857，截断值分别为9.54%，提示当新生儿外周血CD4+CD25+CD127 表达水平高于9.54%时，CD4+CD25+CD127 Treg 对其血液感染具有良好的诊断效能。分析其原因在于血液感染可使新生儿适应性免疫、固有免疫状态发生紊乱，感染之初所引发的炎症反应由固有免疫所驱使，此时机体CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平升高以增强适应性免疫抑制，使患儿所受免疫炎症反应损伤降低，但同时更易导致感染程度的加深；此外，在血液感染情况下，患儿因血液内病原微生物侵袭激活TLR 信号通路，通过TLR 刺激病原菌表面活性物质促进Treg 细胞增殖，亦可使外周血CD4+CD25+CD127 Treg 表达水平升高。

综上所述，外周血CD3+、CD4+、CD4+CD25+CD127 Treg 表达情况与新生儿血液感染具有一定相关性，且上述各指标在新生儿血液感染诊断中均具有良好效能，可为新生儿血液感染情况及后续治疗措施实施提供一定参考。