HPV E6/ E7 mRNA 联合液基薄层细胞学检测(TCT)在宫颈癌筛查中的实施价值

刘端芳

新泰市妇幼保健计划生育服务中心妇女保健科，山东新泰 271200

宫颈癌又被称为子宫颈癌， 是发生在宫颈部位的恶性肿瘤， 同时也是女性生殖道内极为常见的妇科肿瘤[1]。人乳头状瘤病毒（HPV）是导致宫颈癌发生的危险因素之一[2]。针对宫颈癌筛查可以进一步防止癌病变， 对女性患者身体健康有重要作用[3]。 HPV E6/E7 mRNA 可以有效评估癌症基因的活动情况，同时对宫颈癌发生风险预测有重要作用[4]。液基薄层细胞学检测（TCT）技术属于目前针对宫颈癌细胞学检查中关键性技术。 两种技术均具有良好的宫颈癌筛查价值，而联合HPV E6/E7 mRNA 与TCT 技术筛查应用与单一技术筛查应用相比筛查价值更高，准确性更加理想， 同时更加具有较高的灵敏度， 特异度，对宫颈癌疾病筛查有较高的临床价值[5-6]。 选取2020 年7 月—2021 年7 月于该院进行宫颈癌筛查的1 528 例患者为研究对象， 分别使用HPV E6/E7 mRNA 联合TCT 技术进行筛查，探究其在宫颈癌筛查中的价值。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院进行宫颈癌筛查的1 528 例患者为研究对象，患者年龄 25~64 岁，平均（48.59±2.26）岁。参与该次医学研究女性均在《知情同意书》签字。 经医院医学伦理委员会审批同意后开展项目研究。 纳入标准：①存在阴道分泌物；②白带异常；③宫颈糜烂、肿物；④接触性出血；⑤24 h 内无性生活；⑥无宫颈放射性治疗。 排除标准：①子宫切除者；②出现癌前病变史者；③合并其他肿瘤/癌症者；④认知异常者。

1.2 方法

对参与该次研究的患者均同时采集TCT 标本以及HPV 标本，标本采集前叮嘱患者不允许进行阴道冲洗，同时也不允许进行阴道内药物使用。采集方法：凯普宫颈细胞收集保存系统与去RNA 酶宫颈细胞保存系统采集宫颈细胞标本各1 份； 同时使用阴道扩张器进行扩张后， 采用无菌棉球将宫颈分泌物拭去，将TCT 检测专用采样装置放置在患者宫颈鳞柱状上皮交界处。 以顺时针旋转3~5 圈后折断采集器，将其采集样本放置在细胞保存液中。

TCT 筛查：在筛查过程中涉及到的技术：膜式液基超薄细胞学和离心沉淀技术， 对采集后的宫颈脱落细胞进行固定染色处理， 利用Bethesda 系统诊断宫颈细胞学。

按照TBS 国际癌症协会诊断标准，对非典型鳞状细胞（ASCUS）、恶性病变（NILM）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）等进行检查，上述任一存在则判断为阳性。

HPV E6/E7 mRNA 筛查：筛查过程中采用PCR聚合酶链式反应， 对 HPV E6/E7 mRNA 进行筛查。筛查前通过将样本进行离心处理， 完成离心后将上层清液清除，加入裂解液及蛋白酶，在恒温状态下保持90 min 后将其取出震荡。 利用信号放大对目的mRNA 进行放大，同时加入催化剂实现病毒杂交，以此生成支链DNA 复合物，利用碱性磷酸酶进行标记，同时对其进行发光值检测， 当相对发光强度(RLUs)比≥1，这种情况下说明HPV E6/E7 mRNA 阳性。

联合诊断阳性判断标准： HPV E6/E7 mRNA 筛查阳性，TCT 检查为阳性。

1.3 观察指标

观察病理切片阳性情况， 同时对比单一检验及联合检验与病理诊断结果， 分析不同诊断方案诊断效能。

1.4 统计方法

采用SPSS 19.0 统计学软件分析数据。 符合正态分布的计量资料以（）来表示，计数资料以[n（%）]表示，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理切片阳性情况

经过病理切片检查，1 528 例患者宫颈癌筛查中，阳性例数108 例，阳性率7.07%，阴性例数1 420例，阴性率92.93%。

2.2 单项检测、联合检查与病理检查结果

联合诊断对于宫颈癌筛查的灵敏度、 特异度及诊断符合率88.89%、96.34%、95.81%，对比单一诊断数据均更为理想，见表1、表2。

表1 单项检测、联合检查与病理检查结果

表2 不同诊断方案诊断效能对比（%）

3 讨论

宫颈癌是现阶段女性生殖道内最为常见的恶性肿瘤之一，严重地影响女性身体健康及生命安全。据流行病学调查数据显示，世界卫生组织在2018 年通过调查发现全球宫颈癌发病率为13/10 万， 死亡率7/10 万， 而同期全球新发宫颈癌患者数量超过56.9万，死亡患者数量超过31.1 万[7-8]。 而近年来世界上宫颈癌的发病率及病死率有明显的降低， 导致这种情况发生的主要原因是社会上加强了对宫颈癌疾病的健康教育，同时HPV 疫苗的接种以及宫颈癌筛查工作也大大降低了宫颈癌疾病发生[9]。尽管宫颈癌发生情况逐渐减少，但是相关研究表明，宫颈癌发病的平均年龄有低龄化、年轻化趋势。我国宫颈癌发病最多年龄40~50 岁，峰值年龄60~70 岁。疾病的发生主要因HPV 感染导致，加之患者如果存在吸烟或者多个性伴侣， 而且性生活过早或者出现多孕多产以及免疫障碍，均会增加疾病发生风险[10]。

疾病在发生初期症状并不明显， 很容易导致女性忽视自身症状， 而局部症状主要表现为患者存在接触性出血，白带、阴道分泌物异常，除此之外还会伴随着其他组织发生病变， 例如压迫直肠， 侵犯膀胱、盆腔进而造成尿频，尿急，腹部疼痛等。为保障女性患者机体健康， 需要进一步加大宫颈癌的临床筛查工作， 通过宫颈癌筛查可以进一步对患者宫颈病变程度及宫颈病变类型进行判断， 同时还可以为患者提供有效的救治服务[11-13]。现阶段临床中针对宫颈癌筛查的方法主要为HPV 检测、细胞学检测、阴道镜检测及宫颈组织病理学活检等方法[14]。 目前分析宫颈癌疾病出现原因主要是持续性感染高危型HPV病毒造成，HPV E6/E7 作为造成宫颈致癌因子重要内容，E6 可以对抑癌P53 进行抑制， 进而起到细胞周期凋亡阻断工作，除此之外，该物质还可以进一步促进肿瘤细胞异常增殖扩散提高宫颈癌变风险。 E7同样可以使细胞周期异常，促进癌细胞增殖分化[15]。因此在宫颈癌筛查过程中通过HPV E6/E7 检查可以进一步判断患者感染HPV 病毒后的严重情况，对于宫颈癌前病变以及相关疾病风险预测有重要作用。 液基薄层细胞学检测（TCT）是现阶段临床医学中具有高精准性，较为先进的宫颈癌筛查技术。该种诊断方式需要细胞学医师进行诊断， 不同人员在诊断过程中很容易出现偏差导致检验结果不准确，所以在针对患者疾病筛查过程中需要由2 名或者2 名以上医生进行检查复核， 这样可以进一步提升疾病诊断准确性[16]。

经过病理切片检查，1 528 例患者宫颈癌筛查中，阳性例数108 例，阳性率7.07%，阴性例数1 420例，阴性率92.93%；同时经诊断效能分析，联合诊断对宫颈疾病筛查的灵敏度、 特异度及诊断符合率分别为88.89%、96.34%、95.81%， 较单一诊断更加理想。 陈林龙[17]在其研究中也发现，在宫颈癌筛查中采取HPV E6/E7 mRNA 联合薄层液基细胞学检测的诊断灵敏度为96.21%，特异度为74.00%；HPV E6/E7 mRNA 灵敏度为 84.26%， 特异度为 63.11%，TCT 检验灵敏度为71.43%， 特异度为72.02%， 均是HPV E6/E7 mRNA+TCT 检验效能更高， 这一结果与该次研究部分结果高度相似， 进一步说明HPV E6/E7 mRNA+TCT 联合筛查在宫颈癌筛查中的价值。

在宫颈癌疾病筛查中使用HPV E6/E7 mRNA检验联合TCT 技术筛查效果更加理想。 而且使用TCT 检查可以实现宫颈癌疾病有效检出， 在采集样本后将其直接保存在细胞保存瓶中， 这样在一定程度上提升细胞获取率， 减少黏液组织及炎症因子干扰，同时减少检测次数。 薛春芬等[18]在研究中发现HPV E6/E7 mRNA、TCT 单独检测阳性率，TCT 更加理想， 而且针对宫颈癌早期病变同样是两种筛查方式灵敏度更高，研究结果与该次研究结果高度相似，进一步说明了HPV E6/E7 mRNA 与TCT 联合检查在宫颈癌筛查中的实施价值。

综上所述，宫颈癌筛查中HPV E6/E7 mRNA 联合TCT 筛查效果更加理想，更加利于宫颈疾病诊断，值得临床推广使用。