乳腺浸润性导管癌中分子标志物表达与病理诊断研究

李永琳，安仕勇，张培亮，蔡世远，刘黔明

贵州省凤冈县人民医院病理科，贵州遵义 564200

乳腺浸润性导管癌为乳腺癌常见类型，手术+放化疗治疗为该病主要治疗方式，需加强对患者疾病严重程度、预后精准评估，以保证治疗方案的准确性[1-2]。随着分子生物学技术不断发展，在对该病诊断及预后评估中，雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体（HER-2）、Ki-67 应用频率逐渐提升[3]。目前大量研究表示， 上述分子标志物表达情况与乳腺癌发生、发展过程密切相关，但哪种指标能更好地预测患者治疗后复发、转移情况研究仍存在争议[4-5]。为此， 该研究回顾性分析凤冈县人民医院2015 年1月—2020 年12 月收治的60 例乳腺浸润性导管癌患者临床资料，并收集其病理组织标本，分析其分子标志物表达与病理诊断之间关系。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析凤冈县人民医院收治的60 例乳腺浸润性导管癌患者临床资料， 年龄36~68 岁， 平均（55.02±3.16）岁。 纳入标准：①均符合乳腺浸润性导管癌诊断标准[6]，且经病理组织诊断确诊；②年龄≥18 岁；③临床资料完整；④患者、家属对研究知情同意。排除标准：①随访资料不完整者；②合并其他恶性肿瘤者。 该研究经该院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

应用EnvisionTMSystems 分析系统分析乳腺癌标本， 采用 SP 二步法测定标本中 ER、PR、HER-2、Ki-67 的表达情况。主要步骤：切片脱蜡至水后0.3%H2O2甲醇处理切片后水洗； 抗原修复后PBS 冲洗，加入抗体孵育过夜；清洗后加入酶标抗兔/鼠，复合物孵育； 清洗后 DAB-H2O2孵育 5～10 min； 清洗后Harris 苏木素染核 5～10 min；水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。观察内容包括病理学分类及组织学分级等情况。

1.3 观察指标

（1）免疫组化法判定染色阳性信号：①ER、PR：细胞核中间黄色着色物为阳性；②HER-2：依据胞膜着色强度评分为 0、（+）、（++）、（+++），≥30%浸润癌连续出现完整强胞膜着色（+++）时为阳性；③Ki-67：取任意 5 个高倍视野（400 倍），阳性细胞率≤14%为阴性（-），＞14%为阳性（+）。

（2） 临床评估指标， 包括肿瘤病组织学分类、TNM 分期、大小、是否存在腋窝淋巴结转移及大小；其中组织学分类依据WHO 乳腺癌的组织学分类(2003)[7]中细胞分化、核分裂、腺管形成等评分标准，将其分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级；TNM 分期依据2002 年第六版AJCC 分期标准[8]将其分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级。

（3）所有患者均接受手术切除治疗，并保持随访（信访、电话随访、门诊复查），统计患者复发、转移情况；该研究中，出现原位复发、淋巴结转移、远处转移其中任意一项均定义为复发； 分析不同分子标志物表达与患者复发之间关系； 该次研究中随访截止日期为2018 年2 月， 最长随访时间为 84 个月， 平均61 个月。

1.4 统计方法

采用SPSS 11.0 统计学软件进行数据分析，计数资料以[n(%)]表示，组间差异比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ER 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系

60 例患者中，ER 阳性检出率为 56.67%（34/60）；不同年龄、组织学分级、TNM 分级、肿瘤大小、是否存在腋窝淋巴结转移患者、 是否复发、ER 阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表 1。

表1 ER 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系[n（%）]

2.2 PR 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系

60 例患者中，PR 阳性率为 51.67%（31/60）；不同年龄、组织学分级、TNM 分级、肿瘤大小、是否存在腋窝淋巴结转移患者、是否复发，PR 阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表 2。

表2 PR 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系[n（%）]

2.3 HER-2 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系

60 例患者中，HER-2 阳性检出率为40.00%（24/60）； 组织学Ⅲ级HER-2 阳性占比较Ⅰ~Ⅱ级高，存在腋窝淋巴结转移HER-2 阳性占比较无腋窝淋巴结转移高， 复发患者HER-2 阳性较无复发转移高，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 3。

表3 HER-2 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系[n（%）]

2.4 Ki-67 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系

60 例患者中，Ki-67 阳性检出率为55.00%（33/60）；TNM 分期中Ⅲ~Ⅳ级 Ki-67 分级占比较Ⅰ~Ⅱ级高，复发转移患者Ki-67 阳性较无复发转移高，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 4。

表4 Ki-67 表达与乳腺浸润性导管癌患者病理参数之间关系[n（%）]

3 讨论

随着分子生物学的不断发展，在临床疾病诊断中，逐渐倾向于应用分子生物学联合影像学等技术共同进行疾病诊断，以准确评估患者病灶状态及预后情况[9-10]。目前在乳腺癌诊断中，ER、PR、HER-2、Ki-6 均为常见的诊断评估指标， 但哪种指标可更好评估预后仍存在争议[11-12]。

该研究中， 对乳腺浸润性导管癌患者选择ER、PR、HER-2、Ki-6，分析其与病理组织诊断结果之间关系， 结果显示，ER、PR 与病理诊断结果之间无显著关系， 但组织学Ⅲ级HER-2 阳性占比较Ⅰ~Ⅱ级高，存在腋窝淋巴结转移HER-2 阳性占比较无腋窝淋巴结转移高（72.22% vs 26.19%），复发患者HER-2 阳性较无复发转移高，考虑原因为，HER-2 属原癌基因，正常情况下处于非激活状态，在受到外界因素刺激后出现肿瘤转化活性[13-14]；且其水平升高会出现微血管密度、微淋巴管密度增加情况，其过度表达提示肿瘤恶性程度高，提示HER-2 水平升高，乳腺浸润性导管癌存在肿瘤细胞增殖速度增加、 可能伴有淋巴结转移情况[15-16]。 该次研究结果显示，TNM 分期中Ⅲ~Ⅳ级Ki-67 分级占比较Ⅰ~Ⅱ级高（76.00% vs 40.00%）， 复发转移患者Ki-67 阳性较无复发转移高，考虑原因为，细胞核相关抗原Ki-67 为在增殖细胞中表达的抗原，其在乳腺癌发生、发展过程中均表现出异常增高情况[17-18]；该分子标志物主要表达在细胞 G1 期、S 期、G2 期、M 期，脱离细胞周期后迅速降解， 因此在对肿瘤细胞增殖活性检测中表现出良好性能，提示Ki-67 水平升高，可能存在乳腺浸润性导管癌组织细胞增殖、浸润程度增加情况[19-20]；且若随访中存在HER-2、Ki-6 水平升高情况， 提示患者存在复发风险[21]。 陈余英等[22]研究发现，乳腺浸润性导管癌患者发生淋巴结转移，HER-2 阳性检出率显著提升 （54.76% vs 21.88%）；TNM 分期Ⅲ~Ⅳ期患者，Ki-67 阳性检出率显著提升（81.48% vs 57.45%），与该次研究结果相近。

综上所述，HER-2、Ki-67 对肿瘤组织学分期、TNM 分期、是否存在腋窝淋巴结转移及复发情况存在明显影响，可作为该病术前评估、预后评估指标。