CCAAT 增强子结合蛋白γ、肺耐药相关蛋白在卵巢癌中的表达及与患者预后的关系

赵晓娟，魏珂，董菲，樊雅芝，靳新星

咸阳市第一人民医院妇产科，陕西 咸阳 712000

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一，据流行病学统计，2018年卵巢癌新发病例5.21万例，死亡2.25万例，居妇科肿瘤首位。由于卵巢位于盆腔、体积小、早期症状不明显，发现一般为晚期，且肿瘤细胞出现扩散转移，导致治疗难度增高。随着科技的进步，基因芯片、蛋白质芯片及转录学等技术开始出现于大众视野，加快了肿瘤生物标志物研究的发展。目前卵巢癌检查方法包括阴道超声联合血清糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）检测[1]。影响卵巢癌预后的危险因素有很多，其中包括CCAAT增强子结合蛋白γ（CCAAT enhancer binding protein gamma，CEBPG）及肺耐药相关蛋白（lung resistance protein，LRP）。CEBPG即C/EBPγ基因，为C/EBP家族（C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPγ、C/EBPδ等）成员；CEBPG蛋白能与CCAAT区多种病毒增强子相结合，并能与C/EBP中的每一位成员形成异二聚体，其中CEBPG在多种组织中广泛表达[2]。LRP是化疗敏感卵巢癌患者预后评估中一项非常重要的指标[3]。国内外文献关于CEBPG与LRP在卵巢癌中的表达及其与预后的关系分析研究较少[4]。本研究旨在观察CEBPG及LRP在卵巢癌中的表达情况，分析预后的相关因素，为卵巢癌发生和预后判断提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年4月至2019年4月咸阳市第一人民医院收治的卵巢癌患者作为卵巢癌组，取其卵巢癌组织标本。纳入标准：①于本次治疗前未进行过相关治疗；②经病理检查确诊为卵巢癌；③病历资料齐全。排除标准：①肿瘤发生转移；②伴心、肝、肾等重要器官功能障碍；③意识不清晰，无法正常交流；④存在免疫性疾病、血液系统疾病、严重感染；⑤未能接受随访。根据纳入、排除标准，共纳入71例卵巢癌患者，年龄32～69岁，平均（43.23±7.52）岁；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期35例；病理分级：Ⅰ～Ⅱ级34例，Ⅲ～Ⅳ级37例；组织学类型：浆液性46例，非浆液性25例。另选取同期于咸阳市第一人民医院进行附件切除的49例子宫肌瘤患者为对照组，取其正常卵巢组织。纳入标准：①均经病理检查确诊为非癌变；②临床资料完整。排除标准：①存在心、肝、肾等重要器官功能障碍；②存在免疫性疾病、血液系统疾病、严重感染；③未能接受随访。49例患者，年龄31～68岁，平均（41.97±7.11）岁。两组患者年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

LRP及CEBPG均采用免疫组织化学法进行检测。具体操作步骤：标本均由中性甲醛固定，石蜡包埋并进行切片，使用二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，通过H2O2（3%）阻断灭活内源性过氧化物10 min。采用蒸馏水重复洗2次，放于柠檬酸修复液中3 min。正常羊血清工作液封闭，37℃10 min。滴加一抗置于4℃左右环境下过夜储存，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作为阴性对照，过夜后置于室温5 min，加生物素标记的兔二抗，置37℃室温30 min，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色30 s左右，苏木素复染1～2 s，常规脱水，透明，干燥，封片，光镜下进行观察。

阳性标准为在细胞核或细胞质内出现棕黄色或褐色颗粒，根据阳性细胞百分比、染色强度判定结果。①染色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②阳性细胞百分比：从每张切片中随机选取5个高倍视野并计算、观察阳性细胞数，阳性细胞百分比（%）=阳性细胞数/观察细胞数×100%。无阳性细胞为0分，阳性细胞＜10%为1分，10%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。总积分为上述2项评分的乘积，总积分＞4分为阳性。

1.3 观察指标

观察CEBPG及LRP在不同组织中的表达情况，并进行对比分析。随访71例卵巢癌患者2年，将不同预后患者年龄、FIGO分期、病理分级、组织学类型、CEBPG、LRP及淋巴结转移情况进行比较，进一步分析预后的影响因素。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；影响因素分析采用多元Logistic回归分析；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CEBPG及LRP 表达情况的比较

卵巢癌组织中CEBPG、LRP阳性表达率均明显高于正常卵巢组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 正常卵巢组织及卵巢癌组织中CEBPG、LRP表达情况的比较[n（%）]

2.2 卵巢癌患者预后影响因素的单因素分析

随访2年后，71例患者生存55例（77.46%），死亡16例（22.54%）。生存与死亡患者组织学类型、CEBPG表达、LRP表达及淋巴结转移情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；生存与死亡患者年龄、FIGO分期及病理分级比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表2 卵巢癌患者预后影响因素的单因素分析（n=71）

2.3 卵巢癌患者预后影响因素的多因素分析

经Logistic回归模型分析得出，组织学类型为浆液性、CEBPG阳性、LRP阳性、有淋巴结转移均为卵巢癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。（表3）

表3 卵巢癌患者预后影响因素的多因素分析

3 讨论

卵巢癌好发于中年女性，但发病逐渐呈现年轻化，大多数卵巢癌患者就诊时已处于中晚期，且初始治疗后的患者两三年内会出现复发，严重威胁女性身体健康。

CEBPG为C/EBP家族成员，基因定位于19q13.11上，它是参与组织发育、分化及凋亡过程中重要的转录因子；LRP基因定位于16号染色体p13.1～p11.2，主要分布于机体与外界相通的巨噬细胞及分泌性器官等当中[6-7]。本研究中，卵巢癌组织中CEBPG、LRP阳性表达率均明显高于正常卵巢组织，与既往文献相符[8]；说明CEBPG及LRP与卵巢癌之间存在着密切的联系。另一方面，生存与死亡患者组织学类型、CEBPG表达、LRP表达及淋巴结转移情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；生存与死亡患者年龄、FIGO分期及病理分级比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。提示CEBPG、LRP可能在卵巢癌发生、发展中发挥重要作用，参与了部分肿瘤浸润、淋巴结转移等恶性进程[9-10]。

卵巢癌分为上皮癌和生殖细胞癌两种类型，卵巢上皮癌是最常见的类型，上皮癌起源于卵巢上皮组织，卵巢浆液性肿瘤起源于卵巢表面上皮-间充质，其中浆液性癌是恶性肿瘤，容易发生转移，危及患者的生命，说明组织学类型是卵巢癌的影响因素之一[11-12]。大多数卵巢癌晚期会出现转移，是肿瘤转移的危险信号，淋巴结转移作为卵巢癌转移的常见模式，其中肿胀的腹膜后淋巴结往往会抑制大静脉，造成脚或腿一侧的血流障碍与水肿，长期水肿会导致重要器官功能衰竭，由此可见淋巴结转移对卵巢癌具有深远影响[13]。本研究经Logistic回归模型分析得出：组织学类型为浆液性、CEBPG阳性、LRP阳性、有淋巴结转移均为卵巢癌患者预后的独立危险因素，进一步证实组织学类型、CEBPG表达、LRP表达、淋巴结转移与患者的预后密切相关。此外，据国外文献提及，不同肿瘤标志物的灵敏度与组织学类型有着密切联系，不同组织学类型的卵巢癌包含诸多特殊的高表达基因，其中包括CEBPG、LRP，推测CEBPG、LRP在卵巢癌中通过调节DNA修复基因，促进肿瘤细胞发生发展[14]。此外，据研究指出，CEBPG与肿瘤及其对化疗药物的耐药存在联系，LRP为顺铂耐药最有价值的预测指标之一，其在卵巢癌中呈阳性表达，侧面显示卵巢癌多药耐药的机制较为复杂，且二者联合可全面客观筛查不同耐药机制的高效低毒药物，因此检测CEBPG、LRP在卵巢癌中的表达对筛选化疗药物、提供逆转耐药靶点、判断预后有重要意义[15]。本研究不足之处在于样本数量较少，后续将增大样本量进一步验证。

综上所述，CEBPG及LRP在卵巢癌中表达增高，且与卵巢癌患者的预后有着密切的联系，CEBPG、LRP的表达可作为预测卵巢癌患者预后的分子标志物和治疗的潜在靶点。