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流式细胞术-DNA 倍体分析在胃癌手术患者腹腔脱落肿瘤细胞检测中的应用效果

2022-04-18周春华陆斌戴春童瑞敏蒋砚秋

癌症进展 2022年4期
关键词:浆膜阳性率腹腔

周春华,陆斌,戴春,童瑞敏,蒋砚秋

扬中市人民医院肿瘤科,江苏 镇江 212200

胃癌一般起源于胃黏膜细胞,最常见的病理类型是腺癌[1]。胃癌是多种因素共同作用的结果,在患者已有慢性炎症、慢性萎缩性胃炎等基本病因或感染、环境等多种因素的作用下,逐渐转变为胃癌,其诱发因素主要包括感染、环境、饮食及遗传因素等[2]。临床中手术治疗是胃癌最重要的治疗方法,主要是通过胃癌根治术进行治疗,但胃癌根治术后多数患者会出现复发转移[3]。脱落细胞是指在自然管腔器官内表面黏膜正常的情况下,人体器官黏膜上皮细胞发生脱落,包括自然脱落和病变脱落。临床上主要采用腹腔冲洗细胞学(peritoneal lavage cytology,PLC)检测人体各部位的脱落细胞,具有简单易行、标本易获取等优点,但因其检测灵敏度低而在临床上的使用范围较小,未获得广泛应用[4]。随着医学检测技术的不断发展,近年来流式细胞术(flow cytometry,FCM)广泛应用于临床[5]。FCM可对上万个细胞进行高速分析,并且能够从单个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好等优点,在临床中可用于外周白血病细胞、骨髓细胞及肿瘤细胞的检测,其中FCM-DNA倍体分析在恶性肿瘤的诊断中逐渐被广泛应用[6]。本研究探讨了FCM-DNA倍体分析在胃癌手术患者腹腔脱落肿瘤细胞检测中的应用效果,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年3月至2021年3月扬中市人民医院收治的胃癌患者。纳入标准:①术前经病理学检查确诊为胃癌;②接受胃癌根治术治疗。排除标准:①合并其他部位恶性肿瘤;②依从性差;③合并腹膜、淋巴结及其他脏器转移。依据纳入和排除标准,本研究共纳入68例患者。其中,男45例,女23例;年龄30~75岁,平均(51.27±10.34)岁;胃癌发生部位:胃上部15例,胃中部18例,胃下部31例,胃食管结合部4例;TNM分期:Ⅰ期12例,Ⅱ期15例,Ⅲ期32例,Ⅳ期9例。本研究经医院伦理委员会审批通过,所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

采集腹腔冲洗液:手术麻醉消毒后,利用电刀进行开腹探查,采用生理盐水冲洗胃部,待生理盐水冲洗液被吸收后,加入4%的柠檬酸钠抗凝剂进行抗凝。

PLC检测:将抗凝后的腹腔冲洗液离心5 min,制成薄片,对标本进行Papanicolau法染色,细胞学医师阅片并采用高清晰度彩色病例图文报告分析系统进行扫描观察。

FCM-DNA检测:①取腹腔积液100 ml,加入10 ml枸橼酸钠抗凝,待两者充分混匀后,取20 ml,室温下3000 r/min离心10 min,分离并去除上清液,采用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)冲洗2次,室温下3000 r/min离心10 min,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色,避光静置10 min后采用流式细胞仪进行细胞倍体检测;②在第1管内加入鸡红细胞和正常淋巴细胞并将DNA荧光信号峰值作为参考值,在第2管内加入腹腔冲洗液内的细胞进行观察分析,并根据指数分析做出直方图。

1.3 观察指标

比较PLC检测和FCM-DNA检测肿瘤细胞的阳性率,比较不同临床特征胃癌患者FCM-DNA检测的阳性率,比较不同临床特征胃癌患者FCM检测阳性率和PLC检测阳性率。分析FCM-DNA和PLC检测对胃癌术后复发的预测价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析,符合正态分布的计量资料以均数±标准差(x-±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料以例数和率(%)表示,组间比较采用χ2检验。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估FCM-DNA和PLC检测对胃癌术后复发的预测价值,计算曲线下面积(area under the curve,AUC)。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肿瘤细胞阳性检出率的比较

24例患者经PLC检测出脱落肿瘤细胞,阳性率为35.29%(24/68);46例患者经FCM-DNA检测出异倍体肿瘤细胞,阳性率为67.65%(46/68)。FCM-DNA检测肿瘤细胞的阳性率高于PLC,差异有统计学意义(χ2=14.248,P<0.05)。

2.2 不同临床特征胃癌患者FCM-DNA检测阳性率比较

弥漫性、浆膜浸润、肿瘤侵袭面积≥10 cm2、淋巴细胞转移阳性、肿瘤结节阳性、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的胃癌患者FCM-DNA检测阳性率分别高于局限性、浆膜未浸润、肿瘤侵袭面积<10 cm2、淋巴细胞转移阴性、肿瘤结节阴性、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤直径、分化程度的胃癌患者FCM-DNA检测阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(表1)

表1 不同临床特征胃癌患者FCM-DNA检测阳性情况的比较(n=68)

2.3 不同临床特征胃癌患者FCM 检测阳性率和PLC 检测阳性率的比较

局限性、弥漫性、浆膜浸润、浆膜未浸润、肿瘤侵袭面积≥10 cm2、肿瘤侵袭面积<10 cm2、肿瘤结节阴性、淋巴细胞转移阳性、Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者的FCM-DNA检测阳性率均高于PLC检测阳性率,差异均有统计学意义(P<0.05)。(表2)

表2 不同临床特征胃癌患者FCM检测阳性情况和PLC检测阳性情况的比较

2.4 FCM-DNA和PLC 检测对胃癌患者术后复发的预测价值

采用ROC曲线评估FCM-DNA和PLC检测对胃癌患者术后复发的预测价值,结果显示,FCMDNA预测胃癌患者术后复发的AUC为0.785,PLC预测胃癌患者术后复发的AUC为0.641。(表3)

表3 FCM-DNA和PLC检测对胃癌患者术后复发的预测价值

3 讨论

胃癌是发生于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,是中国常见的恶性肿瘤之一,其在中国的发病率居全部恶性肿瘤首位,好发年龄为50岁以上,男性居多,它是由多种因素共同造成的,目前幽门螺杆菌感染被认定为Ⅰ类致癌原[7]。临床上早期胃癌患者一般无明显症状,部分患者有轻微不适,可能被诊断为普通胃炎,因此不易引起重视,进展期胃癌患者可出现上腹部痛、体重下降等不适,晚期胃癌患者还会出现贫血、厌食等症状[8]。根治性手术是治疗胃癌的主要方法,对于进展期胃癌患者,需根据病理类型及临床分期,以手术治疗为主,联合化疗、靶向治疗等其他治疗方法,目的主要是减轻患者痛苦,改善患者生活质量,延长患者生存期[9]。近年来,胃癌根治术后患者的远期生活质量得到了有效提高,但进展性胃癌侵犯浆膜,导致多数患者术后复发及转移,术后最常见的复发部位是腹腔[10]。细胞脱落主要包括自然脱落和发生病变的脱落,胃癌根治术后腹腔内未完全清除的肿瘤细胞也会发生脱落,可成为导致胃癌术后复发的一个重要原因,肿瘤细胞脱落情况可为胃癌患者的预后评估提供依据[11]。临床上可利用细针抽取少量病变组织并制作涂片进行脱落细胞学检查,其特异度高,操作相对简单,但由于灵敏度较低导致应用范围较小[12]。随着分子生物技术的发展,临床中逐渐开始采用FCM对脱落肿瘤细胞进行检测,主要是对脱落细胞进行DNA定量检测,若发生恶性肿瘤,其致癌因素会损伤细胞DNA,可能会使DNA含量异常,从而导致正常体细胞变为肿瘤细胞[13]。研究发现,出现异倍体细胞而难以确定为肿瘤组织,不易发现,但最终会发展为肿瘤,因此细胞DNA含量及倍体的定量分析对诊断恶性肿瘤具有重要意义[14]。文献报道,在腹腔积液中采用FCM-DNA倍体分析检测肿瘤细胞的灵敏度为61%~81%,特异度为70%~93%[15]。本研究结果显示,24例患者经PLC检测出脱落肿瘤细胞,阳性率为35.29%(24/68);46例患者经FCM-DNA检测出异倍体肿瘤细胞,阳性率为67.65%(46/68)。FCMDNA检测肿瘤细胞的阳性率高于PLC(P<0.05)。弥漫性、浆膜浸润、肿瘤侵袭面积≥10 cm2、淋巴细胞转移阳性、肿瘤结节阳性、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的胃癌患者FCM-DNA检测阳性率分别高于局限性、浆膜未浸润、肿瘤侵袭面积<10 cm2、淋巴细胞转移阴性、肿瘤结节阴性、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05)。表明FCM-DNA检测肿瘤细胞的阳性率会随着浸润深度增加、淋巴细胞转移阳性、病理分期的升高而增加。

研究发现,DNA定量检测分析结果与肿瘤形成及肿瘤临床分期具有相关性,且肿瘤呈弥漫性、肿瘤恶性程度高的患者FCM-DNA检测阳性率较高[16]。本研究结果还显示,局限性、弥漫性、浆膜浸润、浆膜未浸润、肿瘤侵袭面积≥10 cm2、肿瘤侵袭面积<10 cm2、肿瘤结节阴性、淋巴细胞转移阳性、Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者的FCM-DNA检测阳性率均高于PLC检测(P<0.05)。表明FCM-DNA检测脱落肿瘤细胞的阳性率高于PLC检测。ROC曲线分析结果显示,FCM-DNA预测胃癌术后复发的灵敏度和特异度分别为80.23%、80.74%,而PLC预测胃癌术后复发的灵敏度和特异度分别为30.25%、80.84%,说明FCM-DNA检测的灵敏度高于PLC检测,前者能够提高脱落肿瘤细胞的检出率,降低胃癌术后复发风险。

综上所述,采用FCM-DNA检测腹腔脱落肿瘤细胞的阳性率高,且对胃癌术后复发具有较高的预测价值,能够为胃癌患者的个体化治疗及预后评估提供依据。

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