高胆红素血症新生儿血清miR-122水平与肝功能各项指标及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的相关性研究*

胆红素主要来源于血红蛋白，大量蓄积可引起一定的细胞和组织毒性

。由于新生儿胆红素生成率远高于成人，而肝脏代谢率和清除率却较低，因此，易造成新生儿高胆红素血症(NHB)

。NHB的主要严重后果包括肝肾损伤、脑损伤等

。虽然绝大多数新生儿的NHB可以自愈或经治疗后痊愈，但仍然需要及时和准确地检测新生儿各项肝肾功能，以免引起靶器官不可逆的损伤。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏与NHB也密切相关。而miR-122属于肝组织表达特异性miRNA，可全程参与肝细胞分化、肝组织发育以及维持肝代谢稳态等。本研究通过检测足月新生儿血清miR-122相对表达量，分析其与肝功能各项指标及G-6-PD的关系，为寻找预测肝损伤的早期敏感指标、为NHB新生儿的个体化治疗提供新的理论依据。

数据录入需要采用本地数据和远程数据结合录入方式进行。具有录入权限的工作人员可在任何时间地点进行数据录入。如果录入格式出现错误，可调用WEbService软件出发数据库存储过程，对于相关数据直接对应数据库列表进行文件域名修改。采用上述数据采集和录入方式可节省大量数据录入工作量，不仅提高数据采集入库速度，更具有高强容错率，有效降低数据采集成本［4］。

1 资料与方法

1.1 一般资料 调取2020年3月至2020年5月我院足月分娩的217例新生儿病案资料，男126例，女91例，日龄2～7 d。根据TBil的临床检测结果将217例新生儿分为NHB组144例，非NHB组73例。两组新生儿的性别构成、胎龄、日龄、出生平均体重、身长、分娩方式、新生儿Apgar评分、体温、心率、呼吸频率、收缩压、舒张压以及产妇的基本特征等基本一致，差异无统计学意义(

>0.05)，具有可比性，见表1。

从图6可以看出，卫星转发器本振的输出频率值相对于标称频率值有100 Hz的固定偏差，并且存在幅值100 Hz左右的类正弦变化趋势。对于频率的慢漂移趋势，我们认为主要是由于卫星所处空间环境变化引起的。图7表示上行导航信号经过卫星转发器频率变化后播发给用户的信号载波频率值，根据误差计算公式，由式（8）可以估算单频计算方法得到的卫星本振输出频率的相对准确度为

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①足月(胎龄37～42周)顺产式剖宫产新生儿；②完成血红蛋白电泳及G-6-PD筛查；由我院检验科提供完整的检测结果；③Apgar评分≥7分；④诊断符合《实用新生儿学》中的诊断标准

，若新生儿皮肤出现中、重度黄染，且血清TBil>220.6 μmol /L则诊断为NHB。排除标准：①RH溶血病、先天性发育异常、染色体疾病、胆道闭锁、感染者；②严重心、肝、肾、肺功能发育不全者。

1.1.3 仪器:日立7020型全自动生化分析仪;Beckman-Coulter MAXM血球分析仪;电子称(常熟市双杰测试仪器厂产品);万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品);Thermo BIOFUGE PRIMO R型离心机。

2.1 两组新生儿血清miR-122检测结果 经QPCR法检测，NHB组和非NHB组新生儿血清miR-122相对表达量分别为(1.00±0.18)和(1.47±0.84)，两者比较NHB组新生儿血清miR-122相对表达量升高，经独立样本

检验，差异有统计学意义(

=4.721，

<0.001)。

1.5 亚组分组方法 根据G-6-PD<1.0即确诊为G-6-PD缺乏症。根据血清TBil浓度，分为3个亚组即轻度亚组(TBil：220.6～256.5 μmol /L)、中度亚组(TBil：256.6～342.0 μmol /L)、重度亚组(TBil：>342.0 μmol /L)。

1.4 各指标检测方法 ①使用BC-5380仪(深圳迈瑞医疗公司)行血常规检测，试剂盒均为仪器原配；使用AL15800仪(美国贝克曼库尔特公司)检测肝功能各项指标和红细胞G-6-PD；采用SeblA-Minicap毛细管电泳仪(法国SEBIA公司)检测HGB，试剂盒购自法国SEBIA公司。②实时荧光定量PCR法检测血清miR-122水平，用mirVana PARIS试剂盒(美国Thermo Fisher Scientific公司)。

3.1 NHB对肝功能各项指标的影响 NHB是新生儿中最常见的临床症状之一，分为病理性NHB和生理性NHB。本研究217例足月新生儿中，NHB的发病率约为66.36%(144/217)，与多数国内研究得到的发病率基本一致。我们纳入的NHB患儿大多是在出生24 h后出现皮肤和巩膜黄染，同时伴有血清TBil水平迅速升高，出生2～3 d时TBil水平达到峰值，多数患儿随着TBil的代谢和排泄病情会逐渐减轻直至消失，但也有部分患儿血清TBil水平持续性升高，进而可能会导致肝功能损伤。在新生儿中，胆红素主要是由红细胞分解产生的，首先释放出Hb，Hb在网状内皮系统内经历两个阶段的分解代谢后进一步产生胆红素。这种未结合的(间接的)胆红素通过与血清白蛋白结合在循环血中被转运。而在肝脏中则与肝内滑面内质网中的葡萄糖醛酸结合，产生水溶性胆红素单或双葡萄糖醛酸，即结合胆红素(或直接胆红素)。结合胆红素是胆汁的一种重要组成成分，通过胆道系统进入肠道。虽然结合胆红素的一部分可被β-葡萄糖醛酸酶水解成小肠中的未结合胆红素，在那里它被重新吸收(肝肠循环)，但大多数是随着粪便排出的。因此若未结合胆红素在循环血和肝脏中大量蓄积，可增加肝肠循环负担，进而影响肝功能指标。

2 结果

对不同种源/家系樟树株高和地径进行方差分析，结果表明不同种源、家系樟树株高(F=12.747，F0.01=2.95；F=3.584，F0.01=1.75)和地径(F=8.231，F0.01=2.95；F=3.998，F0.01=1.75)生长均差异极显著，表明不同种源对樟树1a生扦插苗株高和地径生长产生显著影响，且种源内各家系1 a生扦插苗株高和地径也存在显著差异。

2.4 NHB组新生儿血清miR-122相对表达量与G-6-PD缺乏的关系 经TargetScan和miRanda在线数据库检索，miR-122存在与G-6-PD mRNA互补的保守序列。经活性检测，22例新生儿G-6-PD缺乏，G-6-PD缺乏患儿血清miR-122相对表达量显著高于G-6-PD活性正常新生儿[3.31(2.28，3.71)对1.10(0.90，1.35)]，差异有统计学意义(

=36.831，

<0.001)。见图1。

2.3 3个亚组新生儿肝功能各项指标、血清miR-122、G-6-PD结果比较 见表3。 与轻度亚组和中度亚组比较，重度亚组NHB新生儿血清ALT、AST、GGT、TBil、CRP、PCT水平以及血清miR-122相对表达量升高，差异有统计学意义(均

<0.05)。随着新生儿NHB疾病严重程度加重，G-6-PD缺乏症患儿的比例也逐渐升高，差异有统计学意义(

<0.05)。

1.3 研究方法 比较两组新生儿血常规、肝功能指标(包括ALT、AST、GGT、ALP、Alb、TBil)等检测结果及miR-122、红细胞G-6-PD活性，探讨两组新生儿血清miR-122水平与肝功能各项指标及G-6-PD的关系。

2.2 两组新生儿血常规和肝功能结果 见表2。

2.5 NHB组新生儿血清miR-122相对表达量与肝功能各项指标的关系 经Pearson相关性分析，NHB患儿血清miR-122相对表达量与ALT、AST、GGT、TBil、PCT水平呈正相关性，

=0.173，0.425，0.524，0.550，0.272，

<0.05；但是与ALP、Alb、HGB、CRP水平无显著相关性(

>0.05)。见图2。

3 讨论

Siu等

对1 164名NHB新生儿的临床检查数据进行分析，发现8.4%(98/1164)的NHB新生儿出现ALT异常升高，5.07%(59/1164)NHB新生儿出现ALP异常升高。而且国内众多研究也证实，NHB新生儿普遍存在某项或多项肝功能指标异常情况。拜福兰等

通过对比120例NHB新生儿和40例健康新生儿的肝功能结果，发现NHB新生儿GGT、ALP、AST、LDH、TBA水平均明显升高，可用于该疾病引起的肝功能及心肌损伤检测。梁健伟等

通过对清华大学第一附属医院儿科住院的2325例NHB新生儿临床资料进行统计分析，发现NHB能够造成心肌损伤，对肝功能指标(包括AST、ALT、GGT、血清总蛋白、Alb等)也有一定影响。ALT、GGT、Alb、ALP等都是反映肝脏代谢功能的重要指标，但并非肝组织损伤的特异性指标。而AST主要存在于肝脏，因此相较于其他肝功能指标，AST对肝细胞损伤诊断的特异性更高。本研究结果一方面说明NHB患儿肝脏代谢速度加快，另一方面也说明检测肝功能指标可用于NHB的诊断和筛查，但并不能完全支持肝功能损伤的病理现象。

3.2 miR-122与NHB新生儿肝功能各项指标的关系 miR-122是一种普遍存在于真核生物中的肝脏特异性miRNA。成熟miR-122具有完整保守的基因序列，通过调节多种靶mRNAs的表达参与肝功能和肝内稳态的维持。有研究显示，通过药理学和遗传学手段影响肝细胞miR-122表达，可导致机体和肝脏脂质代谢失调、铁稳态失衡以及肝细胞分化紊乱

。Thakral等

还证实，在动物肝损伤模型早期，肝细胞会特异性表达和释放大量miR-122进入体液，而且循环血中miR-122水平升高早于AST、ALP等指标，因此在众多肝损伤疾病中miR-122被认为是最具潜力的肝损伤生物标志物。本研究结果提示NHB可能会导致肝功能损伤，而且随着NHB加重，对肝功能的损伤影响更明显。Sharapova等

认为miR-122作为组织病理学或血清学生物标志物对肝损伤的诊断效能优于ALT，其表现与AST相当。将miR-122纳入常规肝功能检测，可提高对肝损伤预测的准确率。因此临床上除了密切监视新生儿AST、ALT、GGT、ALP、Alb等常规肝功能指标的变化外，可考虑增加miR-122检测，作为评估肝功能损伤的参考指标。

有些老师对课程空间建设没有经验，上传了大量资料，让课程教学空间结构非常复杂，导致需要学习观看的内容很难找到，反而不利于学生学习，因此，课程教学空间建设亟待出台建设标准，建设标准应针对学生使用而制订，一切以方便学生学和老师教为标准。

3.3 miR-122与NHB新生儿G-6-PD缺乏的关系 G-6-PD是戊糖磷酸途径中参与第一步反应的限速酶，其目的在于将葡萄糖转化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)，从而提高细胞的抗氧化能力。而红细胞中NADPH的唯一来源是戊糖磷酸途径，因此G-6-PD在红细胞中的氧化损伤防御中发挥着重要的作用。G-6-PD缺乏症是一种典型的由G-6-PD基因突变引起的X连锁遗传缺陷，是引起新生儿NHB的重要因素之一。本研究中NHB组新生儿G-6-PD缺乏的发生率约为10.14%(22/217)，且在重度NHB患儿中G-6-PD缺乏的发生率相对更高。许多研究表明，G-6-PD缺乏症患儿的胆红素水平明显高于G-6-PD正常儿

。因此G-6-PD水平与新生儿NHB的发生也有一定的关联。G-6-PD缺乏症除了与G-6-PD基因突变有关外，与G-6-PD表达缺失导致酶活性降低或丧失也有一定关联。Ben Fredj等

也证实G-6-PD酶活性降低或表达缺失可导致新生儿肝功能损伤以及严重的新生儿胆汁淤积症。本研究结果提示miR-122可通过影响G-6-PD活性降低或缺失进而影响肝功能，也从侧面证实检测新生儿血清miR-122相对表达量有助于更准确地评估NHB新生儿疾病严重程度以及肝功能情况。

综上所述，在NHB新生儿中，血清miR-122相对表达量普遍升高，并且与AST、ALT、GGT、TBil、PCT水平呈正相关性，与G-6-PD酶活性缺乏密切相关，因此增加血清miR-122水平检测有助于更准确地评估NHB患儿肝损伤情况，从而为临床针对性治疗提供一定的指导。

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